一种无标签LC-MS联合RPPA的深层蛋白质组学分析方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种无标签LC‑MS联合RPPA的深层蛋白质组学分析方法及应用，属于蛋白检测技术领域。本发明专利技术提供的无标签LC‑MS工作流程，对LC‑MS试剂和复杂的MS运行设置没有特殊要求，并与RPPA蛋白质组学技术并行结合，在组织和细胞系设置中建立一个精简的从样品制备到数据采集的工作流程，扩大了基于组织的蛋白质组学发现的蛋白质靶点的覆盖范围。使用一体化检测流程，提高了样本的利用率，优化了稀有样本使用资源，而且这两种技术相辅相乘，对蛋白组学的数据进行更全面和具体的分析和研究，同时也为TNBC肿瘤在发生发展过程中机制通路提供了更全面的证据链。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及蛋白检测，尤其涉及一种无标签lc-ms联合rppa的深层蛋白质组学分析方法及应用。

技术介绍

1、现如今，定量蛋白质组学，特别是高通量蛋白质组学技术已经成为在许多疾病环境中发现新型蛋白质生物标志物的前沿分析方法。蛋白质组学(proteomics)以肿瘤蛋白质组为研究对象，从整体的角度分析肿瘤细胞内动态变化的蛋白质组成与变化规律。蛋白质组学方法也是肿瘤疗效预测研究的重要方法之一，人们期望临床蛋白质组学研究将为开发更好的诊断和预后工具、确定新的治疗靶点并最终实现患者个性化治疗做出重大贡献。

2、高通量蛋白质组学技术已经成为在许多疾病环境中发现新型蛋白质生物标志物的前沿分析方法。但是，对于常用的蛋白检测技术，如elisa和westernblot来说，不能实现对于高通量蛋白标志物的检测，也无法从高通量数据中挖掘获取更多关于机制、通路等生物信息学的信息。

3、并且，传统检测仅使用一种检测平台，例如液相串联质谱检测(一种用于肺癌检测的生物标志物及其系统cn115575636b)、酶联免疫检测elisa(一种诊断待测者是否是乳腺癌的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种无标签LC-MS联合RPPA的深层蛋白质组学分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述分析方法，其特征在于，所述裂解缓冲液的组成为：1-100mM pH7.4的HEPES、10-800mM NaCl、0.1-10mM EGTA、1-100mM焦磷酸钠、10-1000mM氟化钠、0.1-10mM MgCl2、0.1-10％Triton X-100、1-50％甘油、0.1-10mM原氰酸钠、蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂，蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂均按照50ml/template的添加浓度进行检测。

3.根据权利要求2所述分析方法，其特征在于，所...

【技术特征摘要】

1.一种无标签lc-ms联合rppa的深层蛋白质组学分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述分析方法，其特征在于，所述裂解缓冲液的组成为：1-100mm ph7.4的hepes、10-800mm nacl、0.1-10mm egta、1-100mm焦磷酸钠、10-1000mm氟化钠、0.1-10mm mgcl2、0.1-10％triton x-100、1-50％甘油、0.1-10mm原氰酸钠、蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂，蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂均按照50ml/template的添加浓度进行检测。

3.根据权利要求2所述分析方法，其特征在于，所述蛋白酶抑制剂为roche05056489001，所述磷酸酶抑制剂为roche 04906837001。

4.根据权利要求3所述分析方法，其特征在于，所述待测组织与裂解缓冲液的质量体积比为1:5-1:50，所述研磨裂解的参数为：1-4个周期，每个周期15-60秒，冷却时间间隔5-30秒，匀浆后的样品在0-20℃、10000-18000rpm下离心10-20min。

5.根据权利要求4所述分析方法，其征在于，所述蛋白定量至蛋白质的浓度高于1mg/ml。

6.根据权利要求5所述分析方法，其特征在于，所述lc-ms/...

【专利技术属性】
技术研发人员：王楠，丁志勇，
申请(专利权)人：非因生物科技山东有限公司，
类型：发明
国别省市：