【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化学发光检测，尤其涉及一种基质金属蛋白酶3化学发光检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
1、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，mmps)为酶活性依赖性锌离子的蛋白酶家族，根据其结构功能可分为不同亚家族。研究表明，mmps成员在结构上具有较高的相似性，且其酶活性高度依赖于锌离子，其主要通过降解细胞外基质的蛋白，从而发挥作用。目前，在脊椎动物中共鉴定出24种已知的mmps，其中23种被发现在人体内有表达。mmp使用数字进行编号，从mmp-1到mmp-28。但是由于有不同团队同时发现同一种mmp的情况出现，所以mmps的编号中不包括mmp-4、mmp-5、mmp和mmp-22。基于在体外的底物特异性，可以将mmps分为7类：胶原酶、明胶酶、基质溶解素、间质溶素、金属弹性蛋白酶及其他mmps。
2、mmp-3为mmps家族中重要的一类因子，主要由滑膜细胞以及软骨细胞分泌，其基质特异性是构成软骨的蛋白多糖，作为与类风湿性关节炎(ra)关节组织破坏相关的酶而受到关注。通常伴随着ra的发展，滑膜呈现炎症反应而引起增生，随着滑膜增生，mmp-3在滑膜表层细胞上大量产生。滑膜表层细胞上产生的mmp-3储存在关节液中，经由血管和淋巴管转移到血液中，使其在血液中的浓度上升。在风湿性关节炎患者的滑膜组织中发现mmp-3过剩表达，患者血液中的浓度可反应其风湿性关节炎的活动性。因此临床工作中检测mmp-3，对诊断类风湿性关节炎病因有很大的帮助，是系统性的炎症标志物，可作为类风湿性关节炎特别是早期患者滑
3、临床上常用的检测mmp-3方法有放射免疫分析法、酶联免疫吸附法和胶乳免疫比浊法。放射免疫分析法存在放射线辐射和污染等问题目前已被淘汰，酶联免疫法试剂盒，特异性和灵敏度较低，操作流程繁琐，检测时间长，产生较多样本污染废液；胶乳免疫比浊法适合检测含量较高的物质，检测周期也较久，胶乳粒子也会因为胶乳的重力作用导致试剂容易聚集和沉降，使试剂的测试稳定性变差。且胶乳粒子容易吸附在生化反应杯上影响试剂的性能测试，生化试剂中使用较普遍的氧化还原性辅酶、底物等还会加剧测试过程中胶乳附着反应杯的问题。
4、化学发光技术是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析。它具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染、仪器简单经济等优点。目前，这一技术已经成为临床检验医学的常规检测手段。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种基质金属蛋白酶3化学发光检测试剂盒及其制备方法，旨在解决现有检测mmp-3方法检测周期长，灵敏度较低的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了一种基质金属蛋白酶3化学发光检测试剂盒制备方法，包括以下步骤：
3、分别制备mmp-3校准品、甲苯黄酰基磁珠偶联的mmp-3单克隆抗体和碱性磷酸酶标记的mmp-3单克隆抗体；
4、利用碱性磷酸酶底物、荧光剂和含表面活性剂的缓冲液混合制备化学发光底物液；
5、将所述mmp-3校准品、所述甲苯黄酰基磁珠偶联的mmp-3单克隆抗体、所述碱性磷酸酶标记的mmp-3单克隆抗体、化学发光底物液和浓缩洗液组合包装。
6、其中，所述甲苯黄酰基磁珠为甲苯磺酰基修饰的超顺磁性微球，磁珠粒径优先选1.5μm-3μm。
7、其中，所述甲苯黄酰基磁珠偶联需要使用缓冲液，所述缓冲液包括偶联缓冲液、增强剂、封闭液和洗涤或储存缓冲液。
8、其中，所述浓缩洗液由tris缓冲体系、氯化钠、吐温-20、曲拉通x-100和proclin-300组成，其中所述tris缓冲液100mm、所述氯化钠100g/l、所述吐温-20 10g/l、所述曲拉通x-1001ml/l和所述proclin-30010ml/l。
9、第二方面，本专利技术还提供了一种基质金属蛋白酶3化学发光检测试剂盒，包括mmp-3校准品、甲苯黄酰基磁珠偶联的mmp-3单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的mmp-3单克隆抗体、化学发光底物液和浓缩洗液。
10、本专利技术的一种基质金属蛋白酶3化学发光检测试剂盒制备方法，分别制备mmp-3校准品、甲苯黄酰基磁珠偶联的mmp-3单克隆抗体和碱性磷酸酶标记的mmp-3单克隆抗体；利用碱性磷酸酶底物、荧光剂和含表面活性剂的缓冲液混合制备化学发光底物液；将所述mmp-3校准品、所述甲苯黄酰基磁珠偶联的mmp-3单克隆抗体、所述碱性磷酸酶标记的mmp-3单克隆抗体、化学发光底物液和浓缩洗液组合包装，该方法制备的试剂盒检测过程简单，易于操作，自动化程度高，灵敏度高，特异性好，试剂盒稳定性好，16min自动出结果，能满足临床辅助诊断类风湿性关节炎诊断和治疗，解决现有检测mmp-3方法检测周期长，灵敏度较低的问题。
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【技术特征摘要】
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3.如权利要求1所述的一种基质金属蛋白酶3化学发光检测试剂盒制...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈婷，刘红平，管志平，
申请(专利权)人：桂林优利特医疗电子有限公司，
类型：发明
国别省市：
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