【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测，具体设计一种测定血浆中太白贝母所含贝母辛，西贝母碱，贝母素甲，贝母素乙浓度的方法。
技术介绍
1、贝母辛(peimisine)，西贝母碱(imperialine)，贝母素甲(peimine)和贝母素乙(peiminine)是从百合科贝母属植物川贝母(fritillaria cirrhosa d.don)的干燥鳞茎中分离得到的甾体类生物碱成分。太白贝母是川贝母的主要基源种，太白贝母是2010年版《中国药典》川贝母项下新增的品种，是临床常用且疗效显著的一味贵重中药，主要应用于祛痰、镇咳、平喘、抗炎、抗肿瘤、抗氧化等，含有贝母辛，西贝母碱，贝母素甲，贝母素乙等主要成分。研究证明这几种生物碱成分具有显著的镇咳祛痰、平喘、抗炎、抗肿瘤等生物活性，是一种具有良好开发前景的新药源化合物。其结构式如下：
2、
3、目前尚未关于太白贝母所含贝母辛，西贝母碱，贝母素甲，贝母素乙这4种成分体内测定方法的报道。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是建立一种准确、高效测定血浆中太白贝母所含贝母辛，西贝母碱，贝母素甲，贝母素乙浓度的方法，通过该方法对这4种成分的药物代谢情况进行探索性研究。
2、为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种测定血浆中太白贝母所含贝母辛，西贝母碱，贝母素甲，贝母素乙浓度的方法，血浆样品经过预处理后经液质联用系统检测其浓度，具体方法包括如下步骤：
4、(1)血浆样品预处理
5、(2)将步骤(1)预处理后的血浆样品进行液相色谱分离，使用液质联用系统检测贝母辛，西贝母碱，贝母素甲。贝母素乙浓度，色谱条件：色谱柱：agilent extend-c18色谱柱，反相色谱柱，流动相a为0.1％甲酸，b为乙腈，进行梯度洗脱，洗脱程序为：0-3min，乙腈的体积分数从5％线性增加至38％，3-5min，乙腈的体积分数从38％线性增加至40％，5-6min，乙腈的体积分数从40％线性增加至95％，6-7min，乙腈的体积分数保持在100％，7-8min，乙腈的体积分数从95％线性减少至5％，8-9min，乙腈的体积分数保持在5％；流速：0.3ml/min；柱温40℃；进样量5μl。质谱条件：采用esi+模式进行检测，检测方式采用多反应监测模式(mrm)，参数如下：离子源温度550℃；离子化电压4500v；雾化气55psi；辅助加热气55psi；气帘气35psi；氮气作为喷雾辅助气体，各成分贝母辛、西贝母碱、贝母素甲、贝母素乙的质谱参数q1/q3(m/z)分别为：429.4/114.3、431.4/413.4、433.4/425.4、431.4/413.4；去簇电压(dp)分别为40.87v、65.79v、48.70v、55.98v；碰撞电压(ce)分别为：36.05v、43.05v、41.19v、42.11v。
6、(3)计算：采用内标法，以贝母辛，西贝母碱，贝母素甲，贝母素乙和内标黎芦碱的峰面积比值带入标准曲线方程计算各成分的浓度。
7、步骤(1)中，取血浆样品100μl，加入内标50ng.ml-1黎芦碱甲醇溶液10μl和300μl甲醇，振荡3min，12000r/min离心10min，取上清液300μl，真空浓缩干燥。待样品挥干后，加入100μl甲醇，涡旋5min使充分溶解，于12000r/min离心5min，取上清液。
8、步骤(2)中，色谱柱长度为100mm，内径2.1mm，填料粒径为1.8μm。
9、其中，所述的血浆为给予了含贝母辛，西贝母碱，贝母素甲，贝母素乙药物的血浆。
10、其中，所述血浆为人或动物的血浆。
11、其中，所述血浆为大鼠血浆。
12、有益效果：本专利技术方法与现有技术相比具有如下优势：
13、(1)预处理方法简便：采用有机溶媒蛋白沉淀法，上清液真空浓缩，适用于常规测定。
14、(2)专属性强：采用agilent extend-c18色谱柱作为固定相，乙腈和0.1％甲酸水的混合液作为流动相，梯度洗脱，各成分测定时间在5min之内，且内源性物质不干扰待测成分与内标的测定。
15、(3)灵敏度高：贝母辛，西贝母碱，贝母素甲，贝母素乙的血浆最低定量限分别为：0.992ng.ml-1，0.445ng.ml-1，0.509ng.ml-1，0.465ng.ml-1。
16、(4)本专利技术方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为太白贝母所含贝母辛，西贝母碱，贝母素甲，贝母素乙的血药浓度测定提供依据，具有新药开发的前景。本方法贝母辛，西贝母碱，贝母素甲，贝母素乙的血浆标准曲线范围为：0.99-495.88ng.ml-1，0.45-222.46ng.ml-1，0.51-254.31ng.ml-1，0.47-232.26ng.ml-1，日内和日间精密度的rsd均小于12.36％。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种测定血浆中贝母辛，西贝母碱，贝母素甲，贝母素乙浓度的方法，其特征在于，血浆样品经预处理后经液质联用系统检测其浓度，具体方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的测定血浆中贝母辛、西贝母碱、贝母素甲和贝母素乙浓度的方法，其特征在于，步骤(1)中，取血浆样品100μL，加入内标50ng.mL-1黎芦碱甲醇溶液10μL和300μL甲醇，振荡3min，12000r/min离心10min，取上清液300μL，真空浓缩干燥。待样品挥干后，加入100μL甲醇，涡旋5min使充分溶解，于12000r/min离心5min，取上清液待测。
3.根据权利要求1所述的测定血浆中贝母辛，西贝母碱，贝母素甲和贝母素乙浓度的方法，其特征在于，步骤(2)中，色谱柱长度为100mm，内径2.1mm，填料粒径为1.8μm。
4.根据权利要求1所述的测定血浆中贝母辛，西贝母碱，贝母素甲，贝母素乙浓度的方法，其特征在于，所述的血浆为给予了含贝母辛，西贝母碱，贝母素甲，贝母素乙药物的血浆。
5.根据权利要求1所述的测定血浆中贝母辛，西贝母碱，贝母素甲，贝母素乙浓度
...【技术特征摘要】
1.一种测定血浆中贝母辛，西贝母碱，贝母素甲，贝母素乙浓度的方法，其特征在于，血浆样品经预处理后经液质联用系统检测其浓度，具体方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的测定血浆中贝母辛、西贝母碱、贝母素甲和贝母素乙浓度的方法，其特征在于，步骤(1)中，取血浆样品100μl，加入内标50ng.ml-1黎芦碱甲醇溶液10μl和300μl甲醇，振荡3min，12000r/min离心10min，取上清液300μl，真空浓缩干燥。待样品挥干后，加入100μl甲醇，涡旋5min使充分溶解，于12000r/min离...
【专利技术属性】
技术研发人员：李伟东，梅春梅，周浓，朱星宇，赵雨薇，
申请(专利权)人：南京中医药大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。