一种基于两步巢式PCR技术鉴定猪胚胎单细胞性别的方法技术

一种基于两步巢式PCR技术鉴定猪胚胎单细胞性别的方法，属于生物工程技术领域。本发明专利技术为解决现有技术中的胚胎细胞性别鉴定技术存在操作繁琐、操作时间长、技术要求较高，准确性、稳定性和灵敏性较低的技术问题，提供了一种基于两步巢式PCR技术鉴定猪胚胎单细胞性别的方法，通过对巢式PCR鉴定体系进行优化，将常规PCR酶替换为KOD酶，发现其扩增效果较好；提供的鉴定方法可以实现10个以上细胞样本的性别鉴定，确定AMEL引物对扩增效率较高，灵敏度更强；本发明专利技术提供的巢式PCR技术极大地提高了PCR的灵敏性，获得的电泳条带清晰无非特异性扩增，具有操作简单、鉴定周期短的优点，适合产业应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程，涉及利用两步巢式pcr技术扩增猪胚胎单细胞dna，进行早期胚胎性别鉴定的方法。

技术介绍

1、哺乳动物胚胎性别鉴定技术是一项具有重要意义的技术，它在动物生产、育种和基础研究等方面都具有广泛应用价值。在日常生产中，通过性别鉴定可以控制物种子代的性别比例，提高优势品系选择的强度，减少性别相关疾病的发生，加速动物遗传育种进程，有利于物种群体自我更新，从而充分发挥优势性别的经济效益；在基础研究方面，性别鉴定是进行x染色体失活和性别决定等研究的前提条件。同时，在保护珍稀动物和濒危物种、维护生物多样性和生态平衡等方面也具有重要意义。

2、家畜胚胎早期育种选择往往是在囊胚期，甚至是卵裂期，这个时期一个胚胎往往只有几个到几十个细胞，能够提供给鉴定用的样本数量非常有限，因为取的细胞数量越多对胚胎的损伤越大，甚至导致胚胎发育阻滞。因此，人们更加关注微量样本的性别鉴定技术，尤其是单个细胞样本，但一个细胞只有2套基因组，雌性细胞具有2条x染色体或雄性x、y染色体各1条，因此，对鉴定方法的准确性、稳定性和灵敏性要求非常高。p>

3、随着细本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于两步巢式PCR技术鉴定猪胚胎单细胞性别的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S1中所述的胚胎为活体采胚、经体外受精产生的胚胎或冻胚。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S1中所述胚胎细胞基因组DNA的获取步骤为：通过体外受精获取胚胎细胞，然后建立细胞裂解体系，获得胚胎细胞基因组DNA。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述体外受精获取胚胎细胞的过程为：使用mTBM培养液将新鲜猪精子稀释到为3×105/ml，然后通过体外受精技术与mTBM清洗后的卵母细胞在50ml的mTBM精液中进行授...

【技术特征摘要】

1.一种基于两步巢式pcr技术鉴定猪胚胎单细胞性别的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，s1中所述的胚胎为活体采胚、经体外受精产生的胚胎或冻胚。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，s1中所述胚胎细胞基因组dna的获取步骤为：通过体外受精获取胚胎细胞，然后建立细胞裂解体系，获得胚胎细胞基因组dna。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述体外受精获取胚胎细胞的过程为：使用mtbm培养液将新鲜猪精子稀释到为3×105/ml，然后通过体外受精技术与mtbm清洗后的卵母细胞在50ml的mtbm精液中进行授精，持续6h，然后清洗胚胎并置于pzm-3培养液中以39℃、5％co2、饱和湿度的环境培养6.5d，获得胚胎细胞。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述细胞裂解体系的建立步骤为：先向单个胚胎细胞pcr管中加入3μ...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹智，翁晓刚，芦春雪，王璐瑶，张宇霆，刘忠华，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：