一种检测胆固醇的探针系统及其应用技术方案

本发明专利技术属于胆固醇检测技术领域，具体涉及一种检测胆固醇的探针系统及其应用，包括哺乳细胞表达的SNAP‑D4融合蛋白和溶致变色荧光染料Acrylodan‑BG，哺乳细胞表达的SNAP‑D4融合蛋白包含SNAP标签，SNAP标签活性位点的半胱氨酸与BG发生共价结合形成荧光探针系统，本发明专利技术的Acrylodan‑BG/SNAP‑D4探针系统识别胆固醇具有特异性高，可操作性强等特点，细胞荧光成像显示脂筏胆固醇发出蓝色荧光，而胞膜中暴露于水相的胆固醇即活性膜胆固醇显示绿色荧光，本发明专利技术为脂筏胆固醇与活性膜胆固醇的区别检测提供了方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于胆固醇检测，具体涉及一种检测胆固醇的探针系统及其应用。

技术介绍

1、胆固醇是哺乳细胞膜的主要组成成分，它可以影响细胞膜流动性，通透性及各种酶、转运体和受体的功能。哺乳动物细胞膜含有高达占细胞总胆固醇80％的胆固醇。脂筏是细胞膜上富含胆固醇和鞘磷脂的微结构域，脂筏中的胆固醇一般位于脂相的细胞膜磷脂双层中，脂筏中的胆固醇可以通过招募特定分子到脂筏上从而触发各种细胞信号事件；而活性膜胆固醇，它是指当脂筏中胆固醇含量高于一定的阈值，超过磷脂的络合能力时，具有较高化学活性(逃逸倾向)的胆固醇，其一部分暴露于细胞膜周围的水相中。细胞膜内侧叶中的活性膜胆固醇可引起内质网反应、线粒体氧化甾醇反应等，同时活性膜胆固醇可以影响细胞内胆固醇运输以及多种离子转运通道或配体门控通道等功能。由此可见，监测细胞膜脂筏胆固醇和活性膜胆固醇，对了解细胞膜的功能、细胞内胆固醇运输和细胞信号转导等生理病理过程具有十分重要的意义。

2、近年来基于同位素、电化学传感器和荧光探针的胆固醇标记方法已经被开发出来，在这些方法中，同位素示踪和电化学传感器需要专门的环境、昂贵的实本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种检测胆固醇的探针系统，其特征在于，包括哺乳细胞表达的SNAP-D4融合蛋白和溶致变色荧光染料Acrylodan-BG，哺乳细胞表达的SNAP-D4融合蛋白包含SNAP标签，SNAP标签活性位点的半胱氨酸与溶致变色荧光染料Acrylodan-BG的BG共价结合形成荧光探针系统。

2.如权利要求1所述一种检测胆固醇的探针系统，其特征在于：哺乳细胞表达的SNAP-D4融合蛋白包含氨基酸序列SEQ ID NO.3。

3.如权利要求2所述一种检测胆固醇的探针系统，其特征在于：编码哺乳细胞表达的SNAP-D4融合蛋白包含核苷酸序列SEQ ID NO.4。

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【技术特征摘要】

1.一种检测胆固醇的探针系统，其特征在于，包括哺乳细胞表达的snap-d4融合蛋白和溶致变色荧光染料acrylodan-bg，哺乳细胞表达的snap-d4融合蛋白包含snap标签，snap标签活性位点的半胱氨酸与溶致变色荧光染料acrylodan-bg的bg共价结合形成荧光探针系统。

2.如权利要求1所述一种检测胆固醇的探针系统，其特征在于：哺乳细胞表达的snap-d4融合蛋白包含氨基酸序列seq id no.3。

3.如权利要求2所述一种检测胆固醇的探针系统，其特征在于：编码哺乳细胞表达的snap-d4融合蛋白包含核苷酸序列seq id no.4。

4.如权利要求3所述一种检测胆固醇的探针系统，其特征在于：编码哺乳细胞表达的snap-d4融合蛋白的表达细胞为huh-7细胞或l02细胞。

5.如权利要求1所述一种检测区分胆固醇的探针系统，其特征在于：snap-d4融合蛋白包含氨基酸序列seq id no.1。

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【专利技术属性】
技术研发人员：陈压西，阮雄中，罗旋，赵云飞，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：