【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及dna提取，尤其涉及一种蛋白类生物制品中残留dna提取试剂盒及其使用方法。
技术介绍
1、蛋白类生物制品可用于治疗贫血、糖尿病、恶性肿瘤等，在医学科学研究、疾病治疗中具有广泛的用途。从培养基质中获得高质量蛋白类生物制品是临床疾病治疗和其他医学科学研究得前提。但由于蛋白类生物制品中重组蛋白含量较高、缓冲体系组成不同、培养基质不同等特点，使得于蛋白类生物制品中快速进行残留dna提取变得十分困难，难以满足相关疾病治疗和生命科学研究的需求。
2、常见的蛋白类生物制品中残留dna提取方法多见于碘化钠抽提法和磁珠吸附法。碘化钠抽提法操作复杂，提取时间长，对实验设备要求高，对实验人员负担较大。磁珠法采用硅羟基磁珠，核酸吸附能力强，核酸提取纯度高，即支持手工单管式抽提方案，也可搭配全自动核酸提取仪使用，操作简便快速，但目前磁珠吸附法中多采用手工单管式抽提方案，实验人员操作导致回收率差别较大，稳定性差，极易造成残留dna的提取效果不稳定。另外，由于不用缓冲体系间存在较大差异，导致蛋白类生物制品组分也存在一定的差别，目前常用的碘化钠抽提法对蛋白类生物制品中残留dna的提取效果常常不稳定，尤其是在处理痕量残留dna的蛋白类生物制品时，时常存在残留dna回收过低或过高等问题，对下游qpcr结果准确性干扰较大。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种蛋白类生物制品中残留dna提取试剂盒及其使用方法，优化产品配方和提取步骤，并将其与全自动核酸提取仪适配，提高蛋白类生物制品中残
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种蛋白类生物制品中残留dna提取试剂盒，包括如下组分：蛋白消化液a、蛋白消化液b、蛋白消化液c、裂解液、糖原、carrier rna、磁珠、结合液、漂洗液和洗脱液。
4、作为优选，所述蛋白消化液a的制备方法为：将28～30g氯化钠用水溶解，定容到100ml即得。
5、作为优选，所述蛋白消化液b的制备方法为：将48～52mg蛋白酶k用水溶解，定容到2.5ml即得。
6、作为优选，所述蛋白消化液c的制备方法为：将0.22～0.26g三羟甲基氨基甲烷、0.31～0.35g乙二胺四乙酸二钠、0.98～1.02g十二烷基磺酸钠分别用10ml水溶解，之后将三份试剂混合定容至100ml，并调节ph值为7.8～8.2。
7、作为优选，所述裂解液制备方法为：将34～36g硫氰酸胍、0.58～0.62g三羟甲基氨基甲烷、0.27～0.31g乙二胺四乙酸二钠、0.4～0.6g十二烷基磺酸钠和8～10ml曲拉通x-100分别用水溶解，并定容至100ml，调节ph值为8.8～9.2。
8、作为优选，所述糖原制备方法为：将0.4～0.6g糖原用水溶解，定容到100ml即得。
9、作为优选，所述结合液为异丙醇。
10、作为优选，所述漂洗液制备方法为：将3～11g盐酸胍和0.22～0.26g三羟甲基氨基甲烷溶于水中，用乙醇定容到100ml，调节ph值为7.8～8.2即得；所述漂洗液中乙醇的体积浓度为60％～90％。
11、作为优选，所述洗脱液的制备方法为：将0.14～0.17g三羟甲基氨基甲烷盐酸盐用水溶解，定容到100ml，调节ph值为7.8～8.2即得。
12、本专利技术还提供了所述试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
13、(1)将蛋白类生物制品、蛋白消化液a、蛋白消化液b和蛋白消化液c混合后54～58℃水浴28～32min，得到物料1；
14、(2)将物料1冷却至室温与裂解液、糖原和carrier rna混匀，得物料2；
15、(3)将物料2与结合液和磁珠混匀后涡旋3～7min，得物料3；
16、(4)将物料3吸附3～7min后弃清液得物料4；
17、(5)将物料4用漂洗液漂洗两次，室温开盖3～5min，得物料5；
18、(6)将物料5和洗脱液混合，68～72℃水浴3～12min，得到残留dna。
19、本专利技术提供了一种蛋白类生物制品中残留dna提取试剂盒及其使用方法，所述试剂盒包括如下组分：蛋白消化液a、蛋白消化液b、蛋白消化液c、裂解液、糖原、carrier rna、磁珠、结合液、漂洗液和洗脱液。本专利技术采用蛋白酶k进行蛋白消化，优化试剂组分，引入糖原与carrier rna提高残留dna回收率，适配全自动核酸提取仪，快速简便，提取效果稳定。
20、本专利技术提出的适用于蛋白类生物制品中残留dna提取的试剂，提取方法以及用途，其优点是：
21、1.针对现有方法对蛋白类生物制品中残留dna回收率低，导致一些样本残留dna丢失、质量差的缺点，本专利技术优化试剂组分，提供了一种基于磁珠法适用于蛋白类生物制品进行残留dna提取的方法。
22、2.现有技术中多为采用单管手提法进行蛋白类生物制品中残留dna的提取，因其易受实验人员操作影响，易导致提取效果不稳定，针对此缺点，在本专利技术技术方案中适配全自动核酸提取仪应用于蛋白类生物制品中残留dna提取，无需实验人员操作。进而可有效解决残留dna提取效果不稳定的问题。本专利技术对不同缓冲体系的蛋白类生物制品残留dna回收效果稳定，获得70％～130％之间的回收率，可更好的满足下游qpcr实验的需要。
23、3.本专利技术使用carrier rna解决耗材对蛋白类生物制品中残留dna的吸附问题，这极大提高了痕量残留dna的回收率，避免了全自动核酸提取仪提取过程中导致残留dna被吸附于耗材对后续检测带来的问题。
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1.一种蛋白类生物制品中残留DNA提取试剂盒，其特征在于，包括如下组分：蛋白消化液A、蛋白消化液B、蛋白消化液C、裂解液、糖原、Carrier RNA、磁珠、结合液、漂洗液和洗脱液。
2.根据权利要求1所述的一种蛋白类生物制品中残留DNA提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白消化液A制备方法为：将28～30g氯化钠用水溶解，定容到100mL即得。
3.根据权利要求2所述的一种蛋白类生物制品中残留DNA提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白消化液B制备方法为：将48～52mg蛋白酶K用水溶解，定容到2.5mL即得。
4.根据权利要求3所述的一种蛋白类生物制品中残留DNA提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白消化液C制备方法为：将0.22～0.26g三羟甲基氨基甲烷、0.31～0.35g乙二胺四乙酸二钠、0.98～1.02g十二烷基磺酸钠分别用10mL水溶解，之后将三份试剂混合并定容至100mL，调节pH值为7.8～8.2。
5.根据权利要求4所述的一种蛋白类生物制品中残留DNA提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液制备方法为：将34～36g硫氰酸胍、0.5
6.根据权利要求5所述的一种蛋白类生物制品中残留DNA提取试剂盒，其特征在于，所述糖原制备方法为：将0.4～0.6g糖原用水溶解，定容到100mL即得。
7.根据权利要求6所述的一种蛋白类生物制品中残留DNA提取试剂盒，其特征在于，所述结合液为异丙醇。
8.根据权利要求7所述的一种蛋白类生物制品中残留DNA提取试剂盒，其特征在于，所述漂洗液制备方法为：将3～11g盐酸胍和0.22～0.26g三羟甲基氨基甲烷溶于水中，用乙醇定容到100mL，调节pH值为7.8～8.2即得；所述漂洗液中乙醇的体积浓度为60％～90％。
9.根据权利要求8所述的一种蛋白类生物制品中残留DNA提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱液制备方法为：将0.14～0.17g三羟甲基氨基甲烷盐酸盐用水溶解，定容到100mL，调节pH值为7.8～8.2即得。
10.权利要求1～9任意一项所述试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种蛋白类生物制品中残留dna提取试剂盒，其特征在于，包括如下组分：蛋白消化液a、蛋白消化液b、蛋白消化液c、裂解液、糖原、carrier rna、磁珠、结合液、漂洗液和洗脱液。
2.根据权利要求1所述的一种蛋白类生物制品中残留dna提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白消化液a制备方法为：将28～30g氯化钠用水溶解，定容到100ml即得。
3.根据权利要求2所述的一种蛋白类生物制品中残留dna提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白消化液b制备方法为：将48～52mg蛋白酶k用水溶解，定容到2.5ml即得。
4.根据权利要求3所述的一种蛋白类生物制品中残留dna提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白消化液c制备方法为：将0.22～0.26g三羟甲基氨基甲烷、0.31～0.35g乙二胺四乙酸二钠、0.98～1.02g十二烷基磺酸钠分别用10ml水溶解，之后将三份试剂混合并定容至100ml，调节ph值为7.8～8.2。
5.根据权利要求4所述的一种蛋白类生物制品中残留dna提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液制备方法为：将34～36g硫氰酸胍、0.58～0.62g三羟甲基氨基甲烷、...
【专利技术属性】
技术研发人员：张美萍，陈阳，王义，尹锐，王艳芳，王康宇，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：
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