一种鼠源膜组织延伸刺突蛋白的碳末端结构域的制备制造技术

本发明专利技术公开了一种鼠源膜组织延伸刺突蛋白(膜突蛋白)的碳末端结构域(CTD)的制备。根据鼠源膜突蛋白CTD结构域的编码基因(核苷酸序列)进行密码子优化，得到偏好于大肠杆菌表达的基因序列，该基因除编码CTD结构域之外，还含有组氨酸标签(6×His)和TEV蛋白酶酶切位点，便于目标产品的纯化。本发明专利技术通过比较得知宿主细胞为E.coli BL21(DE3)，表达载体为pET‑28a时蛋白表达量最高。通过上述改进使得在大肠杆菌表达系统中可以获得更高的蛋白表达量，从而能够得到完整的鼠源膜突蛋白CTD结构域，并具有与膜突蛋白的FERM结构域相结合的活性。因此，该方法对于研究膜突蛋白的结构与功能具有重要的意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，涉及一种鼠源膜突蛋白的碳末端结构域(ctd)制备。所述结构域对于研究膜突蛋白的结构及功能具有重要意义。

技术介绍

1、膜组织延伸刺突蛋白，简称膜突蛋白，是一种存在于子宫中的膜蛋白(biochem j,1998,251:831)。膜突蛋白具有577个氨基酸，分子量约为67kda，属于erm蛋白家族成员。膜突蛋白具有三个结构域，它们分别是n-末端ferm结构域、中心螺旋结构域和c-末端结构域(ctd，biol cell,2012,92:305)。在无活性的静息状态下，膜突蛋白的ferm和ctd相互作用，掩盖肌动蛋白结合位点、膜结合位点和蛋白质相互作用位点(cell,2000,101:259)。而活性构象的转变涉及蛋白与质膜脂质磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(pip2)的结合以及特定c末端苏氨酸残基t558的磷酸化(cell biol,2004,164:653)，其中c末端磷酸化被认为是膜突蛋白活性所必需的步骤(cell biol,2012,199:969)。

2、膜突蛋白参与多种生理过程(infect immun,1999,67:本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于制备鼠源膜突蛋白CTD结构域的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；

2.权利要求1所述的重组蛋白的核苷酸序列，其特征在于，根据鼠源膜突蛋白CTD结构域的编码基因核苷酸序列进行密码子优化，得到偏好于大肠杆菌表达的核苷酸序列。

3.一种重组表达载体，其特征在于，包括权利2所述的核苷酸、组氨酸标签和蛋白酶酶切位点。

4.含有权利要求3所述的重组表达载体的重组宿主细胞。

5.权利要求4所述的重组宿主细胞，其特征在于，所述的重组宿主细胞为E.coliBL21(DE3)。

<p>6.权利要求1所...

【技术特征摘要】

1.一种用于制备鼠源膜突蛋白ctd结构域的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白的氨基酸序列如seq id no：1所示；

2.权利要求1所述的重组蛋白的核苷酸序列，其特征在于，根据鼠源膜突蛋白ctd结构域的编码基因核苷酸序列进行密码子优化，得到偏好于大肠杆菌表达的核苷酸序列。

3.一种重组表达载体，其特征在于，包括权利2所述的核苷酸、组氨酸标签和蛋白酶酶切位点。

4.含有权利要求3所述的重组表达载体的重组宿主细胞。

5.权利要求4所述的重组宿主细胞，其特征在于，所述的重组宿主细胞为e.colibl21(de3)...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄方，朱文慧，张庆硕，虎祥，钱爱枝，赵锦程，王晓娟，
申请(专利权)人：中国石油大学华东，
类型：发明
国别省市：