一种靶向新型冠状病毒核衣壳蛋白单链抗体的制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种靶向新型冠状病毒核衣壳蛋白单链抗体的制备方法和应用，旨在提供一种亲和力高、特异性强的单链抗体。本发明专利技术通过噬菌体抗体库构建、噬菌体筛选技术，获取3种抗新型冠状病毒核衣壳蛋白单链抗体。上述单链抗体由重链可变区、15aa连接肽、轻链可变区顺次连接构成，具有如SEQ ID NO：1‑SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。本发明专利技术公开的单链抗体与新冠病毒核衣壳蛋白有着优异的结合性能和特异性，可应用于新型冠状病毒的多种免疫分析平台，在新冠病毒检测领域具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体设计一种靶向新型冠状病毒核衣壳蛋白单链抗体的制备方法和应用。

技术介绍

0、技术背景

1、新型冠状病毒由一条正义rna链和4种结构蛋白(s：刺突蛋白；n：核衣壳蛋白；m：膜蛋白；e：包膜蛋白)组成。目前新冠的主要检测方法为核酸检测法和免疫分析法。实时荧光pcr法为代表的核酸检测法，由于其高灵敏度做为新冠检测的金标准，但其操作步骤繁琐、样本制备程序复杂、需专业的操作人员及设备，极大限制新冠的筛选效率，仍需一种操作简单、快速、灵敏的新冠检测手段。基于双单克隆抗体夹心的免疫层析试纸条具有操作简单、检测速度快、原位检测等优点，如专利“一种基于荧光免疫层析法的新冠病毒抗原检测试剂盒”(申请号：cn202210582441.1)，基于双单克隆抗体夹心的方法提供一种原位快速检测新冠抗原的荧光层析试纸条，新冠诊疗方案(试行第十版)也已将免疫层析试纸条法做为新的诊断标准。在新冠的免疫层析法，单克隆抗体是最常用的免疫分析元件，如专利“抗sars-cov-2核衣壳蛋白的单克隆抗体及其应用”(申请号：cn202210623337.2)，描述了一本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种靶向新型冠状病毒核衣壳蛋白单链抗体，其特征在于，所述单链抗体具有SEQID NO：1-SEQ ID NO：3的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的一种靶向新型冠状病毒核衣壳蛋白单链抗体，其特征在于，所述单链抗体由重链可变区、连接肽、轻链可变区组成，与新型冠状病毒核衣壳蛋白有着优异的结合性能及特异性；

3.根据权利要求1或2所述的一种靶向新型冠状病毒核衣壳蛋白单链抗体的制备方法，其特征在于，主要包含如下步骤：

4.根据权利要求3所述的一种靶向新型冠状病毒核衣壳蛋白单链抗体的制备方法，其特征在于，所述核衣壳蛋白由原核表达系统产出；所述洗脱法的ph...

【技术特征摘要】

1.一种靶向新型冠状病毒核衣壳蛋白单链抗体，其特征在于，所述单链抗体具有seqid no：1-seq id no：3的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的一种靶向新型冠状病毒核衣壳蛋白单链抗体，其特征在于，所述单链抗体由重链可变区、连接肽、轻链可变区组成，与新型冠状病毒核衣壳蛋白有着优异的结合性能及特异性；

3.根据权利要求1或2所述的一种靶向新型冠状病毒核衣壳蛋白单链抗体的制备方法，其特征在于，主要包含如下步骤：

4.根据权利要求3所述的一种靶向新型冠状病毒核衣壳蛋白单链抗体的制备方法，其特征在于，所述核衣壳蛋白由原核表达系统产出；所述洗脱法的ph值为2-10；所述鉴定噬菌体特异性使用蛋白为新冠受体结合区蛋白、牛血清白蛋白、卵清白蛋白。

5.根据权利要求3所述的一种靶向新型冠状病毒核衣壳蛋白单链抗体的制备方法，其特征在于，所述的单链抗体噬菌体文库的构建方法，主要包含如下步骤：

6.根据权利要求5所述的一种靶向新型冠状病毒核衣壳蛋白单链抗体的制备方法，其特征在于，所述两端引入sfi i和not i酶切位点所用试剂和用量为：2-6μl 10×quickcutbuffer，1-3μl sfi i酶，1-3μl not i酶，...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗义，胡文进，毛大庆，杨世翔，王盛炀，蔺怀，龙翔，袁青彬，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：