一种增强型胞质表达系统和表达质粒及其应用技术方案

本发明专利技术涉及一种胞质表达系统、包括该表达系统的表达质粒及其在增强胞质表达外源基因中的应用。本发明专利技术所述胞质表达系统在T7RNAP的胞质表达系统中的T7RNAP编码框的上游与细胞核启动子的下游之间插入有T7启动子的序列，通过为基于C3P3框架的T7RNAP表达系统引入自扩增机制，借助细胞核启动子驱动T7RNAP表达系统的表达，随之进入胞质可以识别胞质中外源蛋白表达载体和/或本发明专利技术所述胞质表达系统带有的T7启动子，既能启动外源蛋白表达载体的T7RNAP继续进行转录表达，促进外源蛋白表达又得以实现对自身表达载体进行正反馈表达，从而提高其表达量，继而显著地增强外源蛋白的表达水平。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物，涉及蛋白表达技术，具体是涉及一种增强型胞质表达系统和表达质粒及其应用。

技术介绍

1、真核细胞mrna的典型结构是具有5'末端的m7g帽和3'末端的poly(a)尾，这两个组分在mrna的翻译和稳定性维持中发挥了重要作用，帽依赖性扫描机制是绝大多数拥有m7g帽和poly(a)尾的真核细胞mrna进行翻译起始的经典方式。基于t7 rna聚合酶(t7rnapolymerase，t7 rnap)的胞质表达系统在哺乳动物细胞中所转录的mrna无5'm7g帽结构，需引入内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site，ires)元件以增强翻译功能实现蛋白表达。胞质表达系统无需质粒进入细胞核即可表达，可显著提高有效转染效率。然而，ires介导的翻译水平远低于5'm7g。2019年， ph等(nucleic acids res.2019)在t7rnap的n端增加了非洲猪瘟病毒来源的np868r加帽酶获得具有转录、加帽双功能的t7rnap，基于双功能t7 rnap的胞质表达系统(c3p3)无需借助ires介导翻译，显示了本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种胞质表达系统，其特征在于，在T7 RNAP的胞质表达系统中的T7RNAP编码框的上游与细胞核启动子的下游之间插入有T7启动子的序列。

2.根据权利要求1所述的胞质表达系统，其特征在于，所述胞质表达系统从5’至3’依次包括以下元件的序列：细胞核启动子，T7启动子，非洲猪瘟病毒的加帽酶，T7 RNA聚合酶，bGHpA，poly A尾，核酶，T7终止子。

3.根据权利要求2所述的胞质表达系统，所述细胞核启动子选自CMV或CAG中的至少一种。

4.一种胞质表达质粒patC3P3cag，其特征在于，所述胞质表达质粒patC3P3cag为表达质粒中插入有权...

【技术特征摘要】

1.一种胞质表达系统，其特征在于，在t7 rnap的胞质表达系统中的t7rnap编码框的上游与细胞核启动子的下游之间插入有t7启动子的序列。

2.根据权利要求1所述的胞质表达系统，其特征在于，所述胞质表达系统从5’至3’依次包括以下元件的序列：细胞核启动子，t7启动子，非洲猪瘟病毒的加帽酶，t7 rna聚合酶，bghpa，poly a尾，核酶，t7终止子。

3.根据权利要求2所述的胞质表达系统，所述细胞核启动子选自cmv或cag中的至少一种。

4.一种胞质表达质粒patc3p3cag，其特征在于，所述胞质表达质粒patc3p3cag为表达质粒中插入有权利要求1-3任一项所述的胞质表达系统。

5.权利要求4所述的胞质表达质粒patc3p3cag的制备方法，其特征在于，所述制备方法步骤包括如下：

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，s1中包括以下步骤：以携带t7启动...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯立强，焦丽闯，卢俊南，
申请(专利权)人：安徽大学，
类型：发明
国别省市：