【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及疫苗组合物，其包含编码至少一种抗原或其片段或变体的至少一种核酸和载体组合物，其中所述载体组合物包含磷脂磷脂酰丝氨酸。至少一种抗原或其片段或变体可以源自病原性抗原、肿瘤抗原、变应原性抗原或自身免疫性自身抗原，使得疫苗组合物或包含疫苗组合物的药物组合物可以用于在受试者中治疗和预防感染性疾病；癌症或肿瘤疾病、紊乱或病症；特定的肝脏疾病；过敏；或自身免疫性疾病、紊乱或病症。本专利技术还涉及相应的套件或成套部件、在受试者中诱导免疫应答的相应方法以及其在受试者中诱导免疫应答和诱导抗原特异性t细胞应答的用途。
技术介绍
1、通常，疫苗可细分为“第一代”、“第二代”和“第三代”疫苗。“第一代”疫苗通常是全生物体疫苗。它们基于活的减毒的或灭活的病原体，例如病毒、细菌等。活的减毒疫苗的主要缺点是存在恢复为危及生命的变种的风险。因此，尽管已减毒，此类病原体本质上仍可能具有不可预测的风险。灭活的病原体可能无法像期望那样有效产生特异性免疫应答。为了尽量减少这些风险，开发了“第二代”疫苗。这些通常是亚单位疫苗，由源自病原体的确定抗原或重组蛋白组分组成。
2、基因疫苗，即用于基因疫苗接种的疫苗，通常被理解为“第三代”疫苗。它们通常由基因工程核酸分子组成，其允许在体内表达病原体或肿瘤抗原特征的肽或蛋白质(抗原)片段。基因疫苗在施用于患者时在被靶细胞摄取后表达。施用的核酸的表达导致编码蛋白质的产生。如果这些蛋白质被患者的免疫系统识别为外来物，就会触发免疫应答。
3、dna以及rna可以用作在基因疫苗接种的情况下施用的核酸分子
4、使用信使rna(mrna)将遗传信息递送到靶细胞中为dna提供了一种有吸引力的替代方案。使用mrna的优点包括瞬时表达和非转化特性——mrna不需要进入细胞核而进行表达，而且不会被整合到宿主基因组中，从而消除了肿瘤发生的风险，即，通过使用rna代替dna进行基因疫苗接种，可以最大限度地减少或避免不期望的基因组整合和抗dna抗体产生的风险。与疫苗中使用mrna相关的两个主要问题与降解和细胞内进入有关。因此，游离rna在血浆中容易被核酸酶消化，并且游离rna进入相关翻译机器所在的细胞内区室的能力有限。
5、由阳离子脂质与其它脂质成分(例如中性脂质、胆固醇和聚合物缀合脂质)和mrna形成的脂质纳米颗粒(lnp)已被用来阻止血浆中rna的降解并促进寡核苷酸的细胞摄取。在这方面，wo2018078053和wo2016176330描述了包含编码不同抗原的未修饰的和核苷修饰的rna的脂质纳米颗粒组合物。
6、虽然上述脂质纳米颗粒的使用已经向有效使用基于mrna的疫苗迈出了一大步，但仍需要进一步改进基于mrna的疫苗，例如通过向基于mrna的疫苗添加至少一种另外的成分，使得疫苗引起针对mrna编码的抗原的更强免疫应答。
7、此外，标准lnp通常靶向肝脏。这在一些情况下可能是不利的，例如在免疫疗法中，因为可能会触发针对这些器官的免疫应答。因此，需要可以全身施用、避免肝脏靶向的mrna制剂。另外，提供靶向至脾脏、巨噬细胞或分别地dc的lnp将是有利的。在这方面，诸如mrna的核酸对于患者的各种治疗干预具有高度的意义，例如，在肿瘤治疗方法中，其基于通过抗原呈递细胞(apc)中编码mrna的肿瘤抗原表达，来诱导针对肿瘤的t细胞应答。这种干预的靶细胞是树突状细胞(dc)，其存在于例如淋巴结(ln)或脾脏中。因此，编码包含一种或多种表位的多肽的mrna可用于将源自由过度上调的rna转录物编码的肿瘤相关抗原的表位递送至患者。脾脏中存在的树突状细胞(dc)代表对表位mrna表达特别感兴趣的抗原呈递细胞。因此，本专利技术的一个目的是开发一种具有高度脾脏选择性的可注射rna制剂，其满足用于向患者施用的产品的标准。本专利技术的权利要求提供了对上述问题或目的的解决方案。根据本专利技术，包含磷脂酰丝氨酸的lnp在施用那些lnp后令人惊讶地导致脾脏或分别地树突细胞中的大量mrna表达。测定到报告基因在靶细胞(脾脏)中表达强烈，而在其它器官中表达较低。这是出乎意料的，因为通常lnp在施用后主要在肝脏中表达。
8、因此，尽管有所有现有技术，然而，仍然需要包含替代性脂质的替代性脂质纳米颗粒制剂，其提供降低的细胞毒性、更好的靶向能力、增强的短期和/或长期免疫力或促进分子(例如核酸)的内体逃逸中的一种或多种特性。因此，尽管迄今为止在脂质纳米颗粒制剂领域进行了大量的工作，但仍需要开发能够改善或消除上述或转染过程的体内功效、毒性、成本和设计简单性中的一个或多个问题的另外的脂质纳米颗粒制剂。
9、因此，本专利技术的目的还可以被视为提供改善或消除上述或转染过程的体内功效、毒性、成本和设计简单性中的一个或多个问题的新的脂质纳米颗粒制剂。这些问题以及在“
技术介绍
”下描述的进一步的问题通过本专利技术的主题和权利要求来解决。本专利技术问题的一个示例性解决方案是提供一种疫苗组合物，其包含
10、a)编码至少一种抗原或其片段或变体的至少一种核酸；和
11、b)载体组合物，其中所述载体组合物包含磷脂磷脂酰丝氨酸，其中所述磷脂酰丝氨酸的量不超过所述载体组合物中所有脂质辅料的总摩尔量的9mol％，优选地不超过5mol％。
12、此外，通过向lnp制剂中添加如本文所公开的具有较短烷基链的磷脂，特别是(07:0)pc(dhpc；二庚酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱)解决了上述问题。
技术实现思路
1、本专利技术人解决了上述需要，因为他们惊奇地发现，将磷脂磷脂酰丝氨酸添加到包含含有编码抗原的核酸的载体组合物(优选脂质纳米颗粒)的疫苗组合物中将产生更有效的疫苗，其最有可能的是——不希望受理论的束缚——通过将疫苗组合物靶向免疫系统的吞噬细胞的吞噬作用，最终导致吞噬细胞中存在编码的抗原或其片段或变体。
2、此外，令人惊奇地发现，与不包含磷脂酰丝氨酸的疫苗组合物相比，上述向疫苗组合物中添加磷脂酰丝氨酸导致疫苗组合物分别对抗原呈递细胞(apc)(例如分别dc、巨噬细胞)或脾脏本身的靶向显著增加，优选地其中疫苗组合物是mrna-lnp疫苗组合物。还令人惊奇地发现，与不包含磷脂酰丝氨酸的mrna-lnp疫苗组合物相比，上述向mrna-lnp疫苗组合物中添加磷脂酰丝氨酸导致mrna-lnp疫苗组合物对淋巴结的靶向显著增加。
3、在第一方面，本专利技术涉及疫苗组合物，其包含
4、a)编码至少一种抗本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种疫苗组合物，包含
2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述至少一种核酸不是致耐受性核酸；和/或其中所述至少一种核酸不编码致耐受性多肽；和/或其中所述疫苗组合物不包含抗原或其片段或变体；和/或其中所述疫苗组合物包含所述至少一种核酸作为唯一的有效负载；和/或其中所述疫苗组合物不是致耐受性组合物。
3.根据权利要求1或2所述的疫苗组合物，其中所述载体组合物至少部分封装所述至少一种核酸。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的疫苗组合物，其中所述载体组合物封装所述至少一种核酸。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的疫苗组合物，其中所述载体组合物包括内表面和面向外部的外表面，其中所述磷脂酰丝氨酸位于所述载体组合物的所述外表面。
6.根据权利要求5所述的疫苗组合物，其中所述磷脂酰丝氨酸的亲水性头基位于所述载体组合物的所述外表面。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的疫苗组合物，其中包含在所述载体组合物中的所述磷脂酰丝氨酸的亲水性头基可从所述载体组合物的外部接近。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的
9.根据权利要求1至8中任一项所述的疫苗组合物，其中所述载体组合物是脂质纳米颗粒组合物。
10.根据权利要求9所述的疫苗组合物，其中所述脂质纳米颗粒组合物还包含
11.根据权利要求9或10所述的疫苗组合物，其中所述脂质纳米颗粒组合物还包含
12.根据权利要求10或11所述的疫苗组合物，其中所述阳离子或可电离脂质在生理pH下携带净正电荷，优选地其中所述阳离子或可电离脂质包含叔氮基团或季氮基团，更优选地其中所述阳离子或可电离脂质选自由HEXA1、HEXA2和THIOETHER组成的组，其结构分别如图1A、1B和1C所示。
13.根据权利要求10至12中任一项所述的疫苗组合物，其中所述类固醇选自由胆固醇、胆固醇半琥珀酸酯(CHEMS)及其衍生物组成的组，优选地其中所述类固醇是胆固醇。
14.根据权利要求10至13中任一项所述的疫苗组合物，其中所述另外的磷脂选自由以下组成的组：1,2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DPhyPE；1,2-二-(3,7,11,15-四甲基十六酰基)-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、1,2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DPhyPC)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DOPC；二油酰基磷脂酰胆碱)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DPPC；二棕榈酰基磷脂酰胆碱)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE)、磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰基磷脂酰胆碱、二油酰基-磷脂酰乙醇胺(DOPEA)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DSPE)、棕榈酰油酰基磷脂酰胆碱(POPC)、棕榈酰油酰基-磷脂酰乙醇胺(POPE)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DPPE)、二油酰基-磷脂酰乙醇胺4-(N-马来酰亚胺甲基)-环己烷-1-羧酸酯(DOPE-mal)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DMPE)、1,2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DLoPE)、二硬脂酰基-磷脂酰乙醇胺(DSPE)、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(POPE)、1,2-二月桂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DLPE)、16-O-单甲基磷酸乙醇胺、16-O-二甲基磷脂酰乙醇胺、1,2-二芥酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DEPE)、18-1-反式磷脂酰乙醇胺、1-硬脂酰基-2-油酰基磷脂酰乙醇胺(SOPE)、1,2-二角鲨烯酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DSQPE)、1,2-二反油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(反式DOPE)、1-硬脂酰基-2-亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(SLPE)、1-十三烷酰基-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(钠盐)、1-油酰基-2-羟基-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(钠盐)、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(钠盐)(POPS)、1-1-硬脂酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(钠盐)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(钠盐)(DOPS)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(钠盐)、1,2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(钠盐)、1...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种疫苗组合物，包含
2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述至少一种核酸不是致耐受性核酸；和/或其中所述至少一种核酸不编码致耐受性多肽；和/或其中所述疫苗组合物不包含抗原或其片段或变体；和/或其中所述疫苗组合物包含所述至少一种核酸作为唯一的有效负载；和/或其中所述疫苗组合物不是致耐受性组合物。
3.根据权利要求1或2所述的疫苗组合物，其中所述载体组合物至少部分封装所述至少一种核酸。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的疫苗组合物，其中所述载体组合物封装所述至少一种核酸。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的疫苗组合物，其中所述载体组合物包括内表面和面向外部的外表面，其中所述磷脂酰丝氨酸位于所述载体组合物的所述外表面。
6.根据权利要求5所述的疫苗组合物，其中所述磷脂酰丝氨酸的亲水性头基位于所述载体组合物的所述外表面。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的疫苗组合物，其中包含在所述载体组合物中的所述磷脂酰丝氨酸的亲水性头基可从所述载体组合物的外部接近。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的疫苗组合物，其中所述磷脂酰丝氨酸选自由以下组成的组：dphyps、wt-ps、16:0-ps、14:0-ps、10:0-ps、6:0-ps、18:1-psdops、18:1-lyso ps和18:0-lyso ps。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的疫苗组合物，其中所述载体组合物是脂质纳米颗粒组合物。
10.根据权利要求9所述的疫苗组合物，其中所述脂质纳米颗粒组合物还包含
11.根据权利要求9或10所述的疫苗组合物，其中所述脂质纳米颗粒组合物还包含
12.根据权利要求10或11所述的疫苗组合物，其中所述阳离子或可电离脂质在生理ph下携带净正电荷，优选地其中所述阳离子或可电离脂质包含叔氮基团或季氮基团，更优选地其中所述阳离子或可电离脂质选自由hexa1、hexa2和thioether组成的组，其结构分别如图1a、1b和1c所示。
13.根据权利要求10至12中任一项所述的疫苗组合物，其中所述类固醇选自由胆固醇、胆固醇半琥珀酸酯(chems)及其衍生物组成的组，优选地其中所述类固醇是胆固醇。
14.根据权利要求10至13中任一项所述的疫苗组合物，其中所述另外的磷脂选自由以下组成的组：1,2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dphype；1,2-二-(3,7,11,15-四甲基十六酰基)-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、1,2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dphypc)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dopc；二油酰基磷脂酰胆碱)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc；二棕榈酰基磷脂酰胆碱)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dope)、磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰基磷脂酰胆碱、二油酰基-磷脂酰乙醇胺(dopea)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dspe)、棕榈酰油酰基磷脂酰胆碱(popc)、棕榈酰油酰基-磷脂酰乙醇胺(pope)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dppe)、二油酰基-磷脂酰乙醇胺4-(n-马来酰亚胺甲基)-环己烷-1-羧酸酯(dope-mal)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dmpe)、1,2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dlope)、二硬脂酰基-磷脂酰乙醇胺(dspe)、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(pope)、1,2-二月桂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dlpe)、16-o-单甲基磷酸乙醇胺、16-o-二甲基磷脂酰乙醇胺、1,2-二芥酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(depe)、18-1-反式磷脂酰乙醇胺、1-硬脂酰基-2-油酰基磷脂酰乙醇胺(sope)、1,2-二角鲨烯酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dsqpe)、1,2-二反油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(反式dope)、1-硬脂酰基-2-亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(slpe)、1-十三烷酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(钠盐)、1-油酰基-2-羟基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(钠盐)、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(钠盐)(pops)、1-1-硬脂酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(钠盐)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(钠盐)(dops)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(钠盐)、1,2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(钠盐)、1-o-十六烷基-2-o-(9z-十八烯基)-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱或1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)、1,2-二-o-植烷基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1-棕榈酰基-2-胆固醇半琥珀酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(pchemspc)、1,2-二胆固醇半琥珀酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dchemspc)、2-((2,3-双(油酰氧基)丙基)二甲基铵)磷酸氢乙酯(docp)、2-((2,3-双(油酰氧基)丙基)二甲基铵)乙基乙基磷酸酯(docpe)和1-o-十八烷基-2-o-甲基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(依地福新)，
15.根据权利要求10至14中任一项所述的疫苗组合物，其中所述聚合物缀合脂质是聚乙二醇化脂质或pmoz-脂质。
16.根据权利要求11至15中任一项所述的疫苗组合物，其中所述组合物包含以选自由以下组成的组的比例的辅料：
17.根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中所述至少一种核酸是dna或rna。
18.根据权利要求17所述的疫苗组合物，其中所述至少一种核酸是rna，优选地是包含编码所述至少一种抗原或其片段或变体的编码序列和任选的编码至少一种自扩增酶的编码序列的mrna。
19.根据权利要求18所述的疫苗组合物，其中所述脂质纳米颗粒包含以下量的所述mrna
20.根据权利要求18或19所述的疫苗组合物，其中所述mrna是单、双或多顺反子mrna。
21.根据权利要求18至20中任一项所述的疫苗组合物，其中所述mrna包含至少一种化学修饰。
22.根据权利要求21所述的疫苗组合物，其中所述化学修饰选自由碱基修饰、糖修饰、骨架修饰和脂质修饰组成的组，优选地其中所述化学修饰是碱基修饰，更优选地其中所述碱基修饰优选地选自由以下组成的组：假尿苷(psi或ψ)、n1-甲基假尿嘧啶(n1mpu、n1mpsi或n1mψ)、1-乙基假尿嘧啶、2-硫尿嘧啶(s2u)、4-硫尿嘧啶、5-甲基胞嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶及其任意组合。
23.根据权利要求18至22中任一项所述的疫苗组合物，其中所述编码序列表现出序列修饰。
24.根据权利要求23所述的疫苗组合物，其中所述序列修饰选自序列的g/c含量修饰、密码子修饰、密码子优化或c优化；优选地其中，与相应野生型mrna的编码序列相比，
25.根据权利要求18至24中任一项所述的疫...
【专利技术属性】
技术研发人员：帕特里克·鲍姆霍夫，杰玛·纳瓦罗，利维亚·帕尔默斯顿·门德斯，克里斯蒂娜·吕克特，桑德拉·拉扎罗，
申请(专利权)人：库瑞瓦格欧洲公司，
类型：发明
国别省市：
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