【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种蛭弧菌冻干粉及其制备方法，属于生物。
技术介绍
1、蛭弧菌是一类专门寄生于其他细菌并能导致其裂解的革兰氏阴性菌，能够识别、侵入并定居宿主菌周质空间中，利用宿主菌细胞的营养进行丝状生长，并裂解杀灭宿主菌。蛭弧菌具有和噬菌体类似的功能，但不是病毒，而且抑菌的广谱性比噬菌体更强。蛭弧菌普遍存在于自然和人工环境中，不侵染真核细胞，对人和动物无致病性，可作为“抗生素替代物”在生物防治病原菌方面具有重要的潜力。
2、不同于普通细菌的培养，蛭弧菌需要在有宿主菌的培养条件下才能培养。普通有益菌可以做成粉剂或液体进行保存，但是蛭弧菌在液体状态下，缺少宿主菌的条件下，保存时间短，且活性差。因此如何在保障蛭弧菌活性的前提下，延长其保存时间，是有待解决的关键技术。
3、真空冷冻干燥技术是指将完全冷冻的物料置于低温低压的条件下，水的沸点和冰点会在某一个特定的压力值时重合，此时水分冰晶便可以直接转变为气态脱离从而实现物料干燥的一种手段。目前，该技术已经应用于食品、医疗、制药、保健品等多个领域。在食品行业里，益生菌的生产与真空冷冻干燥技术有着密切的联系。多数研究显示经过冷冻干燥技术生产的菌粉水分含量较低，便于长期储存。但是没有保护剂情况下直接多细菌进行冷冻干燥会对细菌产生损伤，主要是细胞膜的损伤；溶质渗透压的损伤，酶和蛋白质的损伤和遗传物质的损伤。
4、蛭弧菌的特点是不生成芽孢，且对生长环境要求苛刻，液体状态下的蛭弧菌在没有宿主菌的情况下存活天数较短，且蛭弧菌液体本身会产生ph的改变、杂菌增多和有毒有害物
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种蛭弧菌冻干粉及其制备方法。
2、为达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
3、第一方面，本专利技术提供一种蛭弧菌冻干粉制备方法，包括：
4、制备宿主菌，与蛭弧菌种子液按照接种比例进行接种，于24-28℃静置状态下培养至少72小时，获得蛭弧菌菌液；
5、将脱脂奶粉，蔗糖，酪氨酸，山梨醇和宿主菌溶解于无菌生理盐水中，灭菌，冷却至室温，获得保护剂混悬液；
6、将蛭弧菌菌液和保护剂混悬液混合均匀，进行预冻处理，及真空冷冻干燥，制得蛭弧菌冻干粉。
7、结合第一方面，进一步的，制备宿主菌包括：将维氏气单胞菌接种于营养肉汤培养基中，好氧培养16-20小时后，离心收集菌泥，使用灭菌生理盐水充分重悬，获得宿主菌。
8、进一步的，所述好氧培养的条件包括：温度为28℃，通气量为0.5m3/小时，搅拌转速为70转/分钟。
9、进一步的，所述脱脂奶粉，蔗糖，酪氨酸，山梨醇和宿主菌分别按照15％～20％、20％～24％、1％～2％、2％～4％和0.5％～2％的质量比溶解于无菌生理盐水中
10、进一步的，所述蛭弧菌菌液和保护剂混悬液按照体积比为1:1的比例混合均匀。
11、进一步的，所述预冻处理的温度为-20℃，预冻时间为2-4h；所述真空冷冻干燥的温度范围为-35℃至-50℃，冻干时间为24-36h。
12、第二方面，本专利技术提供一种蛭弧菌冻干粉，根据上述任一所述一种蛭弧菌冻干粉制备方法制得。
13、与现有技术相比，本专利技术所达到的有益效果：
14、本专利技术将脱脂奶粉，蔗糖，酪氨酸，山梨醇和宿主菌溶解于无菌生理盐水中，灭菌，冷却至室温，获得保护剂混悬液，可以长期保持蛭弧菌核酸稳定和蛭弧菌的噬菌活性；其中添加2％～4％质量比的山梨醇和1％～2％质量比的酪氨酸能够保护蛋白质结构，能够有效防止细菌内部受到冰晶的损害，维持细菌的完整性和生物活性。
15、将蛭弧菌菌液和保护剂混悬液混合均匀，进行预冻处理，及真空冷冻干燥，制得蛭弧菌冻干粉，外观为疏松块状结构，能保存6个月以上。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种蛭弧菌冻干粉制备方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，制备宿主菌包括：将维氏气单胞菌接种于营养肉汤培养基中，好氧培养16-20小时后，离心收集菌泥，使用灭菌生理盐水充分重悬，获得宿主菌。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述好氧培养的条件包括：温度为28℃，通气量为0.5m3/小时，搅拌转速为70转/分钟。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述脱脂奶粉，蔗糖，酪氨酸，山梨醇和宿主菌分别按照15％～20％、20％～24％、1％～2％、2％～4％和0.5％～2％的质量比溶解于无菌生理盐水中。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述蛭弧菌菌液和保护剂混悬液按照体积比为1:1的比例混合均匀。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述预冻处理的温度为-20℃，预冻时间为2-4h；所述真空冷冻干燥的温度范围为-35℃至-50℃，冻干时间为24-36h。
7.一种蛭弧菌冻干粉，其特征在于，根据权利要求1-6任一所述方法制得。
【技术特征摘要】
1.一种蛭弧菌冻干粉制备方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，制备宿主菌包括：将维氏气单胞菌接种于营养肉汤培养基中，好氧培养16-20小时后，离心收集菌泥，使用灭菌生理盐水充分重悬，获得宿主菌。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述好氧培养的条件包括：温度为28℃，通气量为0.5m3/小时，搅拌转速为70转/分钟。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述脱脂奶粉，蔗糖，酪氨酸，山梨醇和宿主菌分别...
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