【技术实现步骤摘要】
本专利技术关于中药制剂分析，尤其涉及一种紫雪散的指标成分检测方法及其应用。
技术介绍
1、紫雪散，由石膏、北寒水石、磁石、滑石、玄参、升麻、甘草、丁香、木香、沉香、芒硝、硝石、水牛角浓缩粉、羚羊角粉、人工麝香、朱砂16味药组成，是凉开剂的代表方剂，具有清热开窍、止痉安神之效，临床用于治疗小儿高热惊厥、感染性休克等。紫雪散组方药味繁多，成分十分复杂，但化学基础研究相对薄弱。目前2020年版《中国药典》仅对组方中甘草、升麻、麝香酮进行定性鉴别，相关文献也仅报道麝香酮的含量分析，不能全面反映紫雪散质量。因此，有必要建立更为全面的质量检测方法来提升其质量标准，从而对紫雪散的质量进行更有效的监控。
技术实现思路
1、针对以上技术问题，本专利技术提供一种紫雪散的指标成分检测方法及其应用。该指标成分检测方法通过特定的液相色谱条件能够使指标成分良好分离，进而可进行定性、定量分析，所得数据能够更全面地反映紫雪散的质量。
2、为达到上述专利技术目的，本专利技术实施例采用了如下的技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供一种紫雪散的指标成分检测方法，该方法用超高效液相色谱法对指标成分进行分离，所述超高效液相色谱法的色谱条件包括：
4、色谱柱：反相色谱柱；
5、流动相a为含0.1％～0.2％v/v的甲酸水溶液，流动相b为甲醇或乙腈，进行线性梯度洗脱，梯度洗脱程序为：
6、
7、
8、流速：0.5ml/min；
9
10、上述色谱条件能够实现沉香四醇、异阿魏酸、安格洛苷c、升麻素、甘草素、肉桂酸、异甘草素、哈巴俄苷、甘草酸之间以及与其他化合物之间的良好分离，获得分离度高、峰形好的色谱峰，结合其他检测方法或色谱条件即可进一步进行上述指标成分的定性分析以及定量检测，为科学评价及有效控制紫雪散质量提供依据。
11、结合第一方面，所述指标成分包括沉香四醇、异阿魏酸、安格洛苷c、升麻素、甘草素、肉桂酸、异甘草素、哈巴俄苷、甘草酸。
12、紫雪散组方由动物、矿物、植物三类药组成，其中矿物药占比较大、成分相对简单，容易控制，动物药占比较少，因此本专利技术选择占比多且成分复杂的植物药中的成分作为衡量紫雪散质量的关键成分。紫雪散组方药材中包含6味植物药材，其中：玄参滋阴凉血；升麻清热解毒；木香、丁香、沉香三香行气通窍；甘草补脾益气，与其他药味并用，发挥药效。以上9个指标成分均为6味药材的质控指标或有效成分，其中沉香四醇为药材沉香指标成分，安格洛苷c、肉桂酸和哈巴俄苷来自药材玄参，升麻素来自药材升麻，异阿魏酸来自玄参和升麻，甘草素、异甘草素和甘草酸来自药材甘草。
13、并且，有文献报道异阿魏酸可抑制炎症蛋白mip-2的产生来发挥抗感染作用，升麻素、异甘草素、甘草酸能够抑制nf-κb信号，进一步降低il-1β、tnf-α、hmgb1等细胞因子的表达发挥抗炎作用。本专利技术在研究过程中通过swisstargetprediction平台对上述9个指标成分的基因靶点进行收集，共得到291个成分靶点，利用genecards数据库收集得到3806个炎症相关靶点，两者交集靶点229个。经ppi网络分析，9个成分主要通过stat3、mapk3、egfr、jun、vegfa等靶点发挥抗炎作用。以上研究结果说明以上9个成分对于紫雪草的药效具有重要影响。因此，本专利技术选取沉香四醇、异阿魏酸、安格洛苷c、升麻素、甘草素、肉桂酸、异甘草素、哈巴俄苷、甘草酸为紫雪散的指标定量成分。
14、优选地，所述色谱柱为zorbax sb-c18(4.6×100mm，1.8μm)。采用该色谱柱能够获得理想的分离度，且色谱峰较多。
15、优选地，流动相b为甲醇。在该检测方法中，以甲醇为有机相能够使各指标成分的色谱峰之间具有更佳的分离度。
16、优选地，所述柱温为45℃。
17、结合第一方面，所述指标成分检测方法还包括用质谱法对所述指标成分进行表征，以实现对液相色谱法分离出的物质的定性。
18、优选地，所述指标成分检测方法利用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用仪实施。
19、优选地，所述质谱法的质谱条件包括：采用正/负离子切换的扫描模式，毛细管电压为3.00kv(esi+)及-2.50kv(esi-)，离子源温度120℃，锥孔电压40v，锥孔气体流量50l/h，氮气脱气温度500℃，脱气体积流量800l/h，低碰撞能量为6ev、高碰撞能量10～45ev；质量范围：m/z 50-1200amu。
20、结合第一方面，所述指标成分检测方法的具体操作包括：
21、s1、将待测紫雪散样品以50％～75％v/v甲醇水溶液提取，作为供试品溶液；将所述指标成分的对照品以50％～75％v/v甲醇水溶液溶解，制成对照品溶液；
22、s2、用所述超高效液相色谱法对所述供试品溶液和对照品溶液进行检测。
23、优选地，所述提取的方法为超声提取，超声温度为60℃，超声时间为20～40min。进一步优选地，超声时间为30min。
24、优选地，所述紫雪散样品与所述甲醇水溶液的料液比为1﹕(10～50)，g﹕ml。
25、优选地，所述甲醇水溶液的浓度为65％～75％v/v。进一步优选为75％v/v。
26、第二方面，本专利技术还提供上述指标成分检测方法在紫雪散指标成分含量检测中的应用。
27、结合第二方面，所述色谱条件还包括多波长切换，波长切换程序为：
28、
29、经方法学验证，以上述指标成分检测方法建立的紫雪散指标成分含量检测方法具有良好的线性关系，检测限和定量限较低，精密度、稳定性和重复性rsd值均小于3.0％，加样回收率在92.5％-105.4％之间，能够准确、高效地检测紫雪散中的上述多种指标成分，为提升紫雪散质控标准提供研究基础。
30、本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供的指标成分检测方法能够检测出沉香四醇、异阿魏酸、安格洛苷c、甘草素、肉桂酸、哈巴俄苷、异甘草素、甘草酸共9种指标成分。本专利技术利用该检测方法，通过采用超高效液相色谱–四级杆–飞行时间质谱(uplc-q-tof-ms)技术在特定色谱和质谱条件下对紫雪散化学成分进行表征，鉴定出了75个非挥发性成分，包括19个三萜及其苷类、17个黄酮、13个色原酮、6个有机酸、6个倍半萜、5个苯丙素、4个单萜，以及少量二萜、糖和酚苷类化合物。本专利技术提供的该检测方法还可用于紫雪散指标成分含量检测。本专利技术利用该检测方法首次以沉香四醇、异阿魏酸、安格洛苷c、升麻素、甘草素、肉桂酸、哈巴俄苷、异甘草素、甘草酸为指标，建立了基于uplc-pda技术的紫雪散多成分定量分析方法，系统方法学验证结果表明该方法可行，符合定量分析的要求，分析结果能够为紫雪散质量标准的提升提供参考。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种紫雪散的指标成分检测方法，其特征在于，用超高效液相色谱法对指标成分进行分离，所述超高效液相色谱法的色谱条件包括：
2.根据权利要求1所述的紫雪散的指标成分检测方法，其特征在于，所述指标成分包括沉香四醇、异阿魏酸、安格洛苷C、升麻素、甘草素、肉桂酸、异甘草素、哈巴俄苷、甘草酸。
3.根据权利要求1或2所述的紫雪散的指标成分检测方法，其特征在于，所述色谱柱为ZORBAX SB-C18，规格为4.6×100mm，1.8μm；和/或
4.根据权利要求1或2所述的紫雪散的指标成分检测方法，其特征在于，所述指标成分检测方法还包括用质谱法对所述指标成分进行表征。
5.根据权利要求4所述的紫雪散的指标成分检测方法，其特征在于，所述指标成分检测方法利用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用仪实施。
6.根据权利要求5所述的紫雪散的指标成分检测方法，其特征在于，所述质谱法的质谱条件包括：采用正/负离子切换的扫描模式，毛细管电压为3.00kV及-2.50kV，离子源温度120℃，锥孔电压40V，锥孔气体流量50L/h，氮气脱气温度5
7.根据权利要求1或2所述的紫雪散的指标成分检测方法，其特征在于，所述指标成分检测方法的具体操作包括：
8.根据权利要求7所述的紫雪散的指标成分检测方法，其特征在于，所述提取的方法为超声提取，超声温度为60℃，超声时间为20～40min；和/或
9.权利要求1～8任一项所述指标成分检测方法在紫雪散指标成分含量检测中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述色谱条件还包括多波长切换，波长切换程序为：
...【技术特征摘要】
1.一种紫雪散的指标成分检测方法，其特征在于，用超高效液相色谱法对指标成分进行分离，所述超高效液相色谱法的色谱条件包括：
2.根据权利要求1所述的紫雪散的指标成分检测方法，其特征在于，所述指标成分包括沉香四醇、异阿魏酸、安格洛苷c、升麻素、甘草素、肉桂酸、异甘草素、哈巴俄苷、甘草酸。
3.根据权利要求1或2所述的紫雪散的指标成分检测方法，其特征在于，所述色谱柱为zorbax sb-c18，规格为4.6×100mm，1.8μm；和/或
4.根据权利要求1或2所述的紫雪散的指标成分检测方法，其特征在于，所述指标成分检测方法还包括用质谱法对所述指标成分进行表征。
5.根据权利要求4所述的紫雪散的指标成分检测方法，其特征在于，所述指标成分检测方法利用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用仪实施。
6.根据权利要求5所述的紫雪散...
【专利技术属性】
技术研发人员：张营，宋纹，王跃飞，柴饮，崔英，宋玲玲，徐健，
申请(专利权)人：天津宏仁堂药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。