【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物体内原位成像检测，具体涉及一种具有内质网靶向的onoo-荧光探针及其制备方法和应用。
技术介绍
1、肝脏是人体最大的消化器官，位于人体的腹部。它在各种生理过程中发挥了重要作用，包括糖原收集的平衡和各种物质的代谢。随着当代生活节奏的加快，肝脏面临着酒精，药物和化学物质造成的危害威胁。急性肝损伤可恶化为肝衰竭，严重者可导致死亡，严重危及人类健康。急性肝损伤发生复杂，评估费力，其临床行为包含所有肝脏相关病理过程。药物治疗在临床上是一个巨大的挑战，主要是由于缺乏有效和准确的诊断。目前对于急性肝损伤的诊断，传统的临床方法基于监测血清指标水平，这些指标包含丙氨酸氨基转移酶(alt)，天冬氨酸氨基转移酶(ast)，γ-谷氨酰转肽酶(ggt)和碱性磷酸酶(alp)，但是这些生物标志物与其他疾病(如急性肺损伤、骨骼肌损伤等)重复，不具有特异性，因此可能会给临床诊治带来极大的不确定性，可见，如何利用精确的检测方法实现急性肝损伤的快速精准诊断，对于加速急性肝损伤的紧迫、及时治疗具有划时代的意义。
2、内质网是参与生命活动的一类重要的细胞器，参与许多蛋白质、糖原、脂质和胆固醇物质的合成和分泌，依据内质网膜外表面是否有核糖体附着，通常将内质网分为粗面内质网(rough endoplasmic reticulum，rer)和滑面内质网(smooth endoplasmicreticulum，ser)两种基本类型，滑面内质网还具有解毒功能，如肝细胞中的滑面内质网中含有一些酶，用以清除脂溶性的废物和代谢产生的有害物质，因此对于内质
技术实现思路
1、针对现有技术中的上述问题，本专利技术提供一种具有内质网靶向的onoo-荧光探针及其制备方法和应用，用以解决现有技术难以评估onoo-在内质网氧化应激下的水平波动的技术难题。
2、本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种具有内质网靶向的onoo-荧光探针，所述onoo-荧光探针由喹啉的aie骨架和硼酸酯的响应基团以及磺酰胺的靶向基团构成，命名为qm-onoo，其结构式如式1所示：
4、
5、具有内质网靶向的onoo-荧光探针的制备方法，所述onoo-荧光探针由如下步骤制得：
6、(1)取化合物2-甲基喹啉溶于甲苯溶液，氮气条件下加入溴乙酸乙酯反应升温至100～120℃回流过夜，反应结束后，冷却至室温固体析出，抽滤后的固体用乙醚洗涤，得到如
7、式2所示的物质1；
8、
9、(2)将物质1溶于乙醇，氮气条件下加入丙二腈以及乙醇钠，室温下搅拌6～12h，反应完成后旋蒸除去溶剂，以二氯甲烷为有机相、以饱和食盐水为水相萃取，合并保留有机层，旋蒸除去溶剂，硅胶柱分离纯化，得到如式3所示的物质2；
10、
11、(3)将物质2溶于thf/h2o混合溶液，氮气条件下加入naoh，升温至60～80℃，反应过夜，浓缩反应液，加水至组分完全溶解，逐滴加入稀盐酸直至固体不再析出，抽滤得如式4所示的物质3；
12、
13、(4)将物质3溶于dmf，0℃条件下缓慢加入edci和hobt，氮气条件下搅拌半小时，0℃冰浴，缓慢加入n-(2-氨基乙基)-4-甲基苯磺酰胺，室温反应过夜，反应完成后以乙酸乙酯为有机相、以饱和食盐水为水相萃取，合并保留有机层，旋蒸除去溶剂，硅胶柱分离纯化，得到如式5所示的物质4；
14、
15、(5)将物质4和4-甲酰基苯硼酸频哪醇酯溶于乙腈，氮气条件下逐滴加入哌啶，反应升至70～100℃回流反应过夜，反应结束后，以二氯甲烷为有机相、以饱和食盐水为水相萃取，合并保留有机层，旋蒸除去溶剂，硅胶柱分离纯化，得到如式1所示的qm-onoo。
16、更进一步地，步骤(1)中，所述2-甲基喹啉与溴乙酸乙酯的摩尔比为1∶1～1.5。
17、更进一步地，步骤(2)中，所述物质1、丙二腈以及乙醇钠的摩尔比为1∶2∶2。
18、更进一步地，步骤(3)中，所述物质2、naoh的摩尔比为1∶1，所述thf/h2o混合溶液中，thf/h2o的体积比为5∶1。
19、更进一步地，步骤(4)中，所述物质3与edci、hobt、n-(2-氨基乙基)-4-甲基苯磺酰胺的摩尔比为1∶1.3∶1.3∶1.3。
20、更进一步地，步骤(5)中，所述物质4与4-甲酰基苯硼酸频哪醇酯的摩尔比为1∶2～3。
21、具有内质网靶向的onoo-荧光探针在作为检测体内内质网氧化应激下的onoo-水平波动的荧光探针上的应用。
22、综上所述，相比于现有技术，本专利技术具有如下优点及益效果：
23、1、本专利技术设计合成了喹啉骨架的聚集诱导发光内质网荧光探针，该探针分子由喹啉骨架、靶向基团以及反应基团构成。本专利技术提供的聚集诱导发光内质网荧光探针qm-onoo具有细胞毒性小、光稳定性高、内质网定位特异性好等显著优势，可以专一性检测体内内质网氧化应激下的onoo-水平波动，不受其他生物分子及酶等干扰。
24、2、本专利技术中目标探针与onoo-反应后，具有明显的聚集诱导发光行为，所得聚集诱导发光内质网探针光稳定性好、细胞毒性低且对内质网定位特异性高，可用于活细胞实时动态高分辨荧光成像，成像效果好，因此可用于肝损伤的实时监测以及对损伤程度的评估。
25、3、通过本专利技术的制备方法获得onoo-响应型探针，能够定性的展示hepg2细胞中内质网的onoo-的空间分布，以及肝损伤小鼠时内质网的onoo-水平波动，对研究onoo-相关的生理和病理过程具有重要的科研及经济价值。
26、4、本专利技术合成路线简单、反应条件温和、产率较高；原料简单易得，合成成本低廉。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种具有内质网靶向的ONOO-荧光探针，其特征在于，所述ONOO-荧光探针由喹啉的AIE骨架和硼酸酯的响应基团以及磺酰胺的靶向基团构成，命名为QM-ONOO，其结构式如式1所示：
2.如权利要求1所述的一种具有内质网靶向的ONOO-荧光探针的制备方法，其特征在于，所述ONOO-荧光探针由如下步骤制得：
3.如权利要求2所述的具有内质网靶向的ONOO-荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述2-甲基喹啉与溴乙酸乙酯的摩尔比为1∶1～1.5。
4.如权利要求2所述的具有内质网靶向的ONOO-荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述物质1、丙二腈以及乙醇钠的摩尔比为1∶2∶2。
5.如权利要求2所述的具有内质网靶向的ONOO-荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述物质2、NaOH的摩尔比为1∶1，所述THF/H2O混合溶液中，THF/H2O的体积比为5∶1。
6.如权利要求2所述的具有内质网靶向的ONOO-荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述物质3与EDCI、HOBT、N-(2
7.如权利要求2所述的具有内质网靶向的ONOO-荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述物质4与4-甲酰基苯硼酸频哪醇酯的摩尔比为1∶2～3。
8.如权利要求1所述的具有内质网靶向的ONOO-荧光探针在作为检测体内内质网氧化应激下的ONOO--水平波动的荧光探针上的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种具有内质网靶向的onoo-荧光探针，其特征在于，所述onoo-荧光探针由喹啉的aie骨架和硼酸酯的响应基团以及磺酰胺的靶向基团构成，命名为qm-onoo，其结构式如式1所示：
2.如权利要求1所述的一种具有内质网靶向的onoo-荧光探针的制备方法，其特征在于，所述onoo-荧光探针由如下步骤制得：
3.如权利要求2所述的具有内质网靶向的onoo-荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述2-甲基喹啉与溴乙酸乙酯的摩尔比为1∶1～1.5。
4.如权利要求2所述的具有内质网靶向的onoo-荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述物质1、丙二腈以及乙醇钠的摩尔比为1∶2∶2。
5.如权利要求2所述的具有内质网靶...
【专利技术属性】
技术研发人员：董鉴霞，费皓天，张培，李静，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。