【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物诊断，涉及一种亚细胞器主动靶向成像探针及其制备方法。
技术介绍
1、研究表明胃泌素释放肽作为一种生长因子在多种肿瘤组织中异常表达，并以自主分泌、异常分泌、神经内分泌等方式作用于其特异性受体(grpr)，从而影响多种信号传导途径，直接刺激肿瘤的生长。grpr表达情况与肿瘤的性质、类型、分化程度、级别、侵袭力等息息相关。grpr在正常组织和肿瘤组织中的激活作用有重要的生长效应，且在恶性肿瘤中的表达比在正常的人体组织更为普遍。在多种人类癌症细胞中异常或过度表达，包括在小细胞肺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、乳腺癌、神经胶质母细胞瘤和肺癌等。因此grpr成为热门的肿瘤标志物应用于癌症的早期诊断和治疗。
2、目前临床所用的成像探针多为小分子探针，这些荧光探针的设计遵循对生物标志物的高敏感性和特异性，其面临的主要问题是到达疾病部位的效率较低，并且会对其他器官造成不可避免的副作用，且难以对亚细胞器进行定位，可见肿瘤的复杂性使得高灵敏度肿瘤成像探针的开发面临着艰巨的任务。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是针对现有技术存在的上述问题，提出了一种亚细胞器主动靶向成像探针，利用受体配体等分子亲和作用将探针定向分布在靶细胞内，并利用铃蟾肽及其衍生物的电荷特性和亲脂性在亚细胞器部位蓄积，从而实现亚细胞器靶向。
2、本专利技术的目的可通过下列技术方案来实现：一种亚细胞器主动靶向成像探针，成像探针包括依次连接的主动靶向型肽段和成像探针基团，其中主动靶向型肽段为铃蟾肽及其
3、在上述的一种亚细胞器主动靶向成像探针中，铃蟾肽及其衍生物为seq id no.1-17中的至少一种。
4、作为优选，铃蟾肽及其衍生物为seq id no.1-7中的至少一种。
5、在上述的一种亚细胞器主动靶向成像探针中，成像探针基团选自荧光探针、ct探针、核素探针、磁共振成像探针中的至少一种。
6、作为优选，荧光探针选自fitc、cy3、cy5、cy3.5、cy5.5、cy7、cy7.5、icg、ir-780、ir-783、ir775、ir-792、ir-808、ir-820、ir-825、ir-1048、ir-1064及其衍生物中的至少一种。
7、作为优选，ct探针选自碘帕醇、碘海醇、碘喷托、碘普胺、碘佛醇、碘必乐、碘克沙醇和碘美普尔中的至少一种。
8、作为优选，核素探针选自18f、99mtc、131i、133xe、32p、3h、109cd、111zn、141ce、153sm、198au中的至少一种。
9、作为优选，磁共振成像探针选自钆双胺、钆塞酸二钠、钆喷酸葡胺、钆双胺和卡地胺钠、钆特酸葡胺、钆特醇、四氧化三铁中的至少一种。
10、在上述的一种亚细胞器主动靶向成像探针中，主动靶向型肽段和成像探针基团之间包含连接子。本专利技术亚细胞器主动靶向成像探针靶向型肽段与荧光探针之间可以包含任意连接子，也可以不包含连接子。
11、在上述的一种亚细胞器主动靶向成像探针中，亚细胞器包括线粒体、溶酶体、内质网中的至少一种。
12、线粒体是位于真核细胞细胞质内具有双膜的亚细胞器，线粒体由四部分组成:线粒体外膜、线粒体内膜、线粒体膜间隙和线粒体基质。存在于线粒体内膜的质子泵将线粒体基质内质子泵入线粒体膜间隙,导致线粒体膜间隙带有大量正电荷,而线粒体基质带有大量负电荷,从而形成横跨线粒体内膜的跨膜电位(mitochondrial transmembranepotential,mtp),简称为线粒体膜电位。mtp内负外正,在机体正常细胞内膜电位值为130～150毫伏,而在肿瘤细胞中mtp增高。因此,正电性制剂进入细胞,在肿瘤细胞高mtp的驱动下,靶向至线粒体中，本专利技术的亚细胞器主动靶向探针的短肽部分来自于铃蟾肽及其衍生物，本专利技术对其氨基酸序列进行一系列替换、增减，保留了短肽序列的正电性和亲脂性，使其在靶向grpr进入肿瘤细胞后，在肿瘤细胞高mtp的驱动下,能够靶向至线粒体中。
13、溶酶体是由酸性囊泡(ph≈4.8)组成的动态系统，通过内吞和自噬作用从质膜或细胞质中接收物质，并将其降解和循环利用。溶酶体也可消化细胞自身的局部细胞质或细胞器，当细胞衰老时，其溶酶体破裂，释放出水解酶，消化整个细胞而使其死亡。在肿瘤细胞中，溶酶体的这些降解途径被解除限制，由此也更容易受到外源性或内源性刺激而触发溶酶体膜渗透(lmp)。本专利技术的带有正电荷的铃蟾肽及其衍生物偶联荧光成像探针通过强静电吸引作用与细胞膜相互作用，使细胞膜去极化或产生亲水膜孔，最终导致质膜通透性发生改变，从而形成溶酶体积累。
14、内质网作为真核细胞中极为重要的膜性细胞器之一，是蛋白折叠与转运、脂质合成、囊泡运输、钙离子储存的主要场所，并且参与多种信号转导途径的调控过程。不仅如此，内质网还通过其发达的延伸结构，建立与质膜、线粒体、内吞体、溶酶体等其他膜性结构的连接位点，在胞内细胞器及质膜的信息、物质及能量交流过程中扮演重要角色。本专利技术的带有正电荷的铃蟾肽及其衍生物偶联荧光成像探针经选择性内吞途径(如小凹蛋白介导的内吞作用)进入细胞通过胞内转运过程直接被动的靶向内质网。
15、本专利技术还提供了一种上述亚细胞器主动靶向成像探针的制备方法，所述方法包括如下步骤：
16、s1、通过多肽自动合成仪在树脂0上偶联主动靶向型肽段得到树脂1；
17、s2、向树脂1中加入成像基团进行反应，得到树脂2；
18、s3、对树脂2进行切割去除氨基酸侧链保护，纯化后得亚细胞器主动靶向多功能成像探针。
19、本专利技术还提供了一种上述亚细胞器主动靶向成像探针在制备抗肿瘤药物中的应用。
20、作为优选，在制备乳腺癌、前列腺癌、直结肠癌、肾癌、卵巢癌药物中的应用。
21、本专利技术还提供了一种成像剂，所述成像剂包括权利要求1-6任意一项所述的亚细胞器主动靶向成像探针。
22、本专利技术还提供一种上述成像剂在制备诊断肿瘤疾病中药物的应用。
23、作为优选，在制备诊断乳腺癌、前列腺癌、直结肠癌、肾癌、卵巢癌药物中的应用。
24、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术亚细胞器主动靶向成像探针以特殊序列的铃蟾肽及其衍生物偶联荧光成像探针形成纳米粒子(nanoparticles，nps)一方面其可以主动靶向涉及nps的亲脂性阳离子的表面功能化，另一方面通过被动靶向肿瘤部位，对于实体瘤具有的高通透性和滞留效应。
25、其中，seq id no.1氨基酸序列片段为mlhgvawq；
26、seq id no.2氨基酸序列片段为mhqlgvaw；
27、seq id no.3氨基酸序列片段为hqmgvalw；
28、seq id no.4氨基酸序列片段为hhhgvawq；
29、seq id no.5氨基酸序列片段为rrrgvawq；
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1.一种亚细胞器主动靶向成像探针，其特征在于，成像探针包括依次连接的主动靶向型肽段和成像探针基团，其中主动靶向型肽段为铃蟾肽及其衍生物。
2.根据权利要求1所述的一种亚细胞器主动靶向成像探针，其特征在于，铃蟾肽及其衍生物为SEQ ID No.1-17中的至少一种。。
3.根据权利要求1所述的一种亚细胞器主动靶向成像探针，其特征在于，铃蟾肽及其衍生物为SEQ ID No.1-7中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的一种亚细胞器主动靶向成像探针，其特征在于，成像探针基团选自荧光探针、CT探针、核素探针、磁共振成像探针中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的一种亚细胞器主动靶向成像探针，其特征在于，主动靶向型肽段和成像探针基团之间包含连接子。
6.根据权利要求1所述的一种亚细胞器主动靶向成像探针，其特征在于，亚细胞器包括线粒体、溶酶体、内质网中的至少一种。
7.根据权利要求1-6任意一项所述的一种亚细胞器主动靶向成像探针的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
8.一种如权利要求1-6任意一项所
9.一种成像剂，其特征在于，所述成像剂包括权利要求1-6任意一项所述的亚细胞器主动靶向成像探针。
10.根据权利要求9所述的一种成像剂在制备诊断肿瘤疾病中药物的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种亚细胞器主动靶向成像探针，其特征在于，成像探针包括依次连接的主动靶向型肽段和成像探针基团，其中主动靶向型肽段为铃蟾肽及其衍生物。
2.根据权利要求1所述的一种亚细胞器主动靶向成像探针，其特征在于，铃蟾肽及其衍生物为seq id no.1-17中的至少一种。。
3.根据权利要求1所述的一种亚细胞器主动靶向成像探针，其特征在于，铃蟾肽及其衍生物为seq id no.1-7中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的一种亚细胞器主动靶向成像探针，其特征在于，成像探针基团选自荧光探针、ct探针、核素探针、磁共振成像探针中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的一种亚细胞器...
【专利技术属性】
技术研发人员：李娟，魏媛媛，曹奕，吴爱国，
申请(专利权)人：中国科学院宁波材料技术与工程研究所，
类型：发明
国别省市：
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