【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于黑水虻资源化利用，具体涉及一种多酶法制备脱脂黑水虻酶解物的工艺及应用。
技术介绍
1、随着养殖业的发展，鱼粉、豆粕等常规蛋白资源短缺日益严重。因此，新型蛋白源的开发越来越被重视，黑水虻作为昆虫资源中较有潜力的高蛋白、高油脂原料，目前多以脱脂黑水虻粉的形式被用于鱼粉、豆粕等的替代，原料的大量替代从长远角度出发始终不是用于缓解饲料资源短缺的最优途径，而让原料以小剂量的添加形式发挥重要功能是一种较好的思路。
2、目前有关黑水虻酶解物的制备整体研究较少，且多数是以单酶法进行制备，单酶法制备的酶解物缺点是产物较为单一，小分子蛋白肽含量较少，使用多酶法工艺制备的酶解物产物形式多样，小分子蛋白肽含量高，具有较强的抗氧化能力。
3、因此，利用多酶法对脱脂黑水虻幼虫粉进行酶解更容易得到具有独特功能的黑水虻酶解产品，对于提高黑水虻的营养价值以及缓解饲料原料短缺具有重要影响。
技术实现思路
1、针对上述现有技术存在的技术问题，本专利技术提供了一种多酶法制备脱脂黑水虻酶解物的工艺，并对其抗氧化能力进行评估，该工艺制得的脱脂黑水虻幼虫粉酶解物能够有效提高脱脂黑水虻幼虫的总还原力、超氧阴离子自由基清除活性、羟基自由基清除活性和dpph自由基清除活性等抗氧化性能，能够作为水产动物饲料添加剂。
2、本专利技术为解决上述技术问题采用如下技术方案：一种多酶法制备脱脂黑水虻酶解物的工艺，其特征在于具体过程为：将脱脂黑水虻幼虫粉加入到反应容器中，加入蒸馏水进行溶解，再加入
3、进一步地，所述碱性蛋白酶来源于地衣芽孢杆菌发酵；胰蛋白酶来源于猪胰腺；木瓜蛋白酶来源于番木瓜植物未成熟的果实；中性蛋白酶来源于枯草芽孢杆菌1398深层发酵；风味蛋白酶来源于米曲霉菌株发酵。
4、本专利技术所述多酶法制备脱脂黑水虻酶解物的工艺，其特征在于具体步骤为：将10g脱脂黑水虻幼虫粉加入到150ml的锥形瓶中，加入50ml蒸馏水进行溶解，再加入脱脂黑水虻幼虫粉固重4wt％-6wt％的蛋白酶，搅拌混合均匀，自然ph，用保鲜膜进行封口，放入150r/min的恒温水浴振荡器中于50-70℃酶解3-5h，酶解结束后将酶解液在95℃条件下灭酶15min，终止反应，待酶解液温度下降到室温后，使用离心机在10℃、5000rpm的条件下离心10min，取上清液得到脱脂黑水虻酶解液，再进行冷冻干燥后得到脱脂黑水虻酶解干粉，所述蛋白酶为质量比1:1:1的碱性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的复合蛋白酶。
5、本专利技术所述多酶法制备脱脂黑水虻酶解物的工艺，其特征在于具体步骤为：将10g脱脂黑水虻幼虫粉加入到150ml的锥形瓶中，加入50ml蒸馏水进行溶解，再加入脱脂黑水虻幼虫粉固重6wt％的蛋白酶，搅拌混合均匀，自然ph，用保鲜膜进行封口，放入150r/min的恒温水浴振荡器中于63-64℃酶解5h，酶解结束后将酶解液在95℃条件下灭酶15min，终止反应，待酶解液温度下降到室温后，使用离心机在10℃、5000rpm的条件下离心10min，取上清液得到脱脂黑水虻酶解液，再进行冷冻干燥后得到脱脂黑水虻酶解物干粉，所述蛋白酶为质量比1:1:1的碱性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的复合蛋白酶。
6、本专利技术制备的脱脂黑水虻酶解物作为水产动物饲料添加剂中的应用，经试验研究表明，该脱脂黑水虻酶解物能够提高脱脂黑水虻幼虫粉的总还原力、超氧阴离子自由基清除活性、羟基自由基清除活性和dpph自由基清除活性等抗氧化性能，进而能够较好地作为饲料添加剂加入到水产动物饲料中。
7、本专利技术所述脱脂黑水虻酶解物的制备工艺条件的优化过程包括以下步骤：
8、(1)蛋白酶的筛选：从碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶等五种蛋白酶通过单酶、双酶、三酶、四酶、五酶进行酶解过程筛选出最佳酶解组合；
9、(2)单因素试验设计：将筛选出的复合蛋白酶加入到脱脂黑水虻幼虫粉水溶液中，复合蛋白酶添加质量比例为1:1:1、1:2:1、1:1:2、2:1:1，加酶量为1wt％-8wt％(以脱脂黑水虻幼虫粉原料计)，底物浓度4wt％-48wt％(以脱脂黑水虻幼虫粉原料计)，酶解温度为40-80℃，酶解时间为1-5h，酶解后于95℃保温15min灭酶，5000rpm离心10min取上清，即得脱脂黑水虻酶解液，冷冻干燥后得到脱脂黑水虻酶解物干粉；
10、(3)box-behnken中心组合试验设计：底物浓度20wt％，自然ph，加酶质量比例为1:1:1，加酶量为4wt％-6wt％(以脱脂黑水虻幼虫粉原料计)，酶解温度为50-70℃，酶解时间为3-5h，酶解后于95℃保温15min灭酶，终止反应，使用离心机在10℃、5000rpm的条件下离心10min，取上清液得到脱脂黑水虻酶解液，冷冻干燥后得到脱脂黑水虻酶解物干粉。
11、本专利技术与现有技术相比具有以下优点和有益效果：本专利技术的脱脂黑水虻酶解物通过碱性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶在最优条件下酶解得到，由于多种蛋白酶参与增加了脱脂黑水虻幼虫粉的酶解位点，提升了脱脂黑水虻幼虫粉的产品价值。本专利技术制备的脱脂黑水虻酶解物能够提高脱脂黑水虻幼虫粉的总还原力、超氧阴离子自由基清除活性、羟基自由基清除活性和dpph自由基清除活性等抗氧化性能，进而能够较好地作为饲料添加剂加入到水产动物饲料中。
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1.一种多酶法制备脱脂黑水虻酶解物的工艺，其特征在于具体步骤为：将10g脱脂黑水虻幼虫粉加入到150mL的锥形瓶中，加入50mL蒸馏水进行溶解，再加入脱脂黑水虻幼虫粉固重4wt%-6wt%的蛋白酶，搅拌混合均匀，自然pH，用保鲜膜进行封口，放入150r/min的恒温水浴振荡器中于50-70℃酶解3-5h，酶解结束后将酶解液在95℃条件下灭酶15min，终止反应，待酶解液温度下降到室温后，使用离心机在10℃、5000rpm的条件下离心10min，取上清液得到脱脂黑水虻酶解液，再进行冷冻干燥后得到脱脂黑水虻酶解干粉，所述蛋白酶为质量比1:1:1的碱性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的复合蛋白酶。
2.根据权利要求1所述的多酶法制备脱脂黑水虻酶解物的工艺，其特征在于具体步骤为：将10g脱脂黑水虻幼虫粉加入到150mL的锥形瓶中，加入50mL蒸馏水进行溶解，再加入脱脂黑水虻幼虫粉固重6wt%的蛋白酶，搅拌混合均匀，自然pH，用保鲜膜进行封口，放入150r/min的恒温水浴振荡器中于63-64℃酶解5h，酶解结束后将酶解液在95℃条件下灭酶15min，终止反应，待酶解液温度下降到室
3.根据权利要求1所述的多酶法制备脱脂黑水虻酶解物的工艺，其特征在于：所述碱性蛋白酶来源于地衣芽孢杆菌发酵；胰蛋白酶来源于猪胰腺；木瓜蛋白酶来源于番木瓜植物未成熟的果实。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的工艺制备的脱脂黑水虻酶解物作为水产动物饲料添加剂中的应用，该脱脂黑水虻酶解物能够提高脱脂黑水虻幼虫粉的总还原力、超氧阴离子自由基清除活性、羟基自由基清除活性和DPPH自由基清除活性等抗氧化性能，进而能够作为饲料添加剂加入到水产动物饲料中。
...【技术特征摘要】
1.一种多酶法制备脱脂黑水虻酶解物的工艺，其特征在于具体步骤为：将10g脱脂黑水虻幼虫粉加入到150ml的锥形瓶中，加入50ml蒸馏水进行溶解，再加入脱脂黑水虻幼虫粉固重4wt%-6wt%的蛋白酶，搅拌混合均匀，自然ph，用保鲜膜进行封口，放入150r/min的恒温水浴振荡器中于50-70℃酶解3-5h，酶解结束后将酶解液在95℃条件下灭酶15min，终止反应，待酶解液温度下降到室温后，使用离心机在10℃、5000rpm的条件下离心10min，取上清液得到脱脂黑水虻酶解液，再进行冷冻干燥后得到脱脂黑水虻酶解干粉，所述蛋白酶为质量比1:1:1的碱性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的复合蛋白酶。
2.根据权利要求1所述的多酶法制备脱脂黑水虻酶解物的工艺，其特征在于具体步骤为：将10g脱脂黑水虻幼虫粉加入到150ml的锥形瓶中，加入50ml蒸馏水进行溶解，再加入脱脂黑水虻幼虫粉固重6wt%的蛋白酶，搅拌混合均匀，自然ph，用保...
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