【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物，具体来说，涉及一株高产红曲色素和莫纳可林k、低产桔霉素的红曲霉工程菌及其构建与应用。
技术介绍
1、红曲是丝状真菌红曲霉菌在以籼米为主要成分的培养基经液态深层发酵或无液态流动水相的固体培养基上发酵而成，呈深红色，又称丹曲，神曲，红曲米。是一种纯天然、安全性高、有益于人体健康的食品添加剂，在东亚和东南亚地区广受人们的欢迎。红曲是一种即可入药、又可作为食物的传统中药。红曲的最早使用于唐朝，到目前为止已经有一千多年的历史，一直以来都深受人们的青睐。红曲菌产生许多不同类型的次级代谢产物，其中一些已被纯化和鉴定，包括不同的色素、莫纳可林k(monacolink)，γ-氨基丁酸和dimerumicacid(mda)。最近发现这些物质具有引人瞩目的生物活性功能，日益成为国内外研究的热点问题。其中影响红曲实际生产应用及其商品化价值的是色素、monacolin k。但其另一代谢产物桔霉素，对机体的肾脏具有严重危害，并具有遗传毒性、致癌性和致畸性，桔霉素的存在大大限制了红曲霉制品及其产业的发展。因此，获得低产桔霉素的红曲制品至关重要。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一株工程菌红曲霉△bl9及其构建与应用。
2、本专利技术的目的是通过如下技术方案来实现的：
3、一株高产红曲色素和莫纳可林k、低产桔霉素的红曲霉工程菌，所述红曲霉工程菌是以高粱红曲菌(monascus kaoliang)bl9为出发菌株，将基因敲除盒片段转化到高粱红曲菌(monasc
4、进一步的，上述基因敲除盒片段是通过以下步骤制得：
5、s1：以高粱红曲菌(monascuskaoliang)bl9基因组dna为模板设计引物进行pcr扩增，获得pksct基因上游同源臂片段pksct-up、pksct基因下游同源臂片段pksct-down和mokh基因片段；
6、s2：设计引物通过重叠延伸pcr将步骤s1所得pksct基因上游同源臂片段pksct-up、pksct基因下游同源臂片段pksct-down和mokh基因片段连接起来，获得基因敲除盒片段；
7、其中，所述pksct基因上游同源臂片段pksct-up序列如seq id no.1所示，所述pksct基因下游同源臂片段pksct-down序列如seq id no.2所示，所述mokh基因片段序列如seq id no.3所示。
8、进一步的，扩增上述pksct基因上游同源臂片段pksct-up的引物序列为：pksct-1f：5'-agtgaccaaaaggtacagcaat-3'，
9、pksct-1r：5'-ctcttttatgcccatttgtcagaaatgcggcatgt-3'；
10、扩增上述pksct基因下游同源臂片段pksct-down的引物序列为：
11、pksct-2f：5'-aactgaggtctccatggccataacagcttgggtgtccgat-3'，
12、pksct-2r：5'-ccgtcttcgaataaccaccat-3'；
13、扩增上述mokh基因片段的引物序列为：
14、mokh-1f：5'-tgacaaatgggcataaaagag-3'，
15、mokh-1r：5'-atggccatggagacctcagtt-3'。
16、进一步的，上述重叠延伸pcr所用引物序列为：
17、1p+m：5'-acatgccgcatttctgacaaatgggcataaaagag-3'，2p+m：5'-atcggacacccaagctgttatggccatggagacctcagtt-3'。
18、上述一株红曲霉工程菌的构建方法，其是将seq id no.4所示的基因敲除盒片段转化至高粱红曲菌(monascus kaoliang)bl9，经验证后获得高产红曲色素和莫纳可林k、低产桔霉素的红曲霉工程菌。
19、进一步的，上述转化为peg介导的原生质体转化。
20、上述一株红曲霉工程菌在制备红曲色素和/或莫纳可林k中的应用。
21、上述的构建方法在提高红曲霉红曲色素和/或莫纳可林k产量中的应用。
22、本专利技术的显著优点在于：
23、本专利技术将seq id no.4所示的基因敲除盒片段转化至高粱红曲菌(monascuskaoliang)bl9，经验证后获得高产红曲色素和莫纳可林k、低产桔霉素的红曲霉工程菌。相较于高粱红曲菌(monascus kaoliang)bl9，红曲霉工程菌胞内红曲色素产量提高了21％，胞外红曲色素产量提高了23％，酸式莫纳可林k产量提高了84％，内酯式莫纳可林k产量提高了95％，桔霉素产量降低了95％。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一株高产红曲色素和莫纳可林K、低产桔霉素的红曲霉工程菌，其特征在于：所述红曲霉工程菌是以高粱红曲菌（Monascus kaoliang）BL9为出发菌株，将基因敲除盒片段转化到高粱红曲菌（Monascus kaoliang）BL9中所得；所述高粱红曲菌（Monascus kaoliang）BL9已于2023年11月10日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO：40966，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.根据权利要求1所述的红曲霉工程菌，其特征在于：所述基因敲除盒片段序列如SEQID NO.4所示，所述基因敲除盒片段是通过以下步骤制得：
3.根据权利要求2所述的红曲霉工程菌，其特征在于：扩增所述pksCT基因上游同源臂片段pksCT-up的引物序列为：
4.根据权利要求2所述的红曲霉工程菌，其特征在于：所述重叠延伸PCR所用引物序列为：
5.如权利要求1所述的红曲霉工程菌的构建方法，其特征在于：将SEQ ID NO.4所示的基因敲除盒片段转化至高粱红曲菌（Monascus kaoliang
6.根据权利要求5所述的红曲霉工程菌的构建方法，其特征在于：所述转化为PEG介导的原生质体转化。
7.如权利要求1所述的红曲霉工程菌在制备红曲色素和/或莫纳可林K中的应用。
8.如权利要求5所述的构建方法在提高红曲霉红曲色素和/或莫纳可林K产量中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一株高产红曲色素和莫纳可林k、低产桔霉素的红曲霉工程菌，其特征在于：所述红曲霉工程菌是以高粱红曲菌（monascus kaoliang）bl9为出发菌株，将基因敲除盒片段转化到高粱红曲菌（monascus kaoliang）bl9中所得；所述高粱红曲菌（monascus kaoliang）bl9已于2023年11月10日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为cgmcc no：40966，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.根据权利要求1所述的红曲霉工程菌，其特征在于：所述基因敲除盒片段序列如seqid no.4所示，所述基因敲除盒片段是通过以下步骤制得：
3.根据权利要求2所述的红曲霉工程菌，其特征在于：扩增所述pksct...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘斌，童爱均，黄其震，赵超，黄莹，黄君陶，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。