【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学工程三维培养，尤其涉及一种血管化的肠癌类组装体的体系制备方法和应用。
技术介绍
1、结直肠癌(crc)是一种常见的消化道恶性肿瘤，其发病率和致死率仅次于胃癌和食管癌，严重威胁人类健康。目前，临床上此类疾病的治疗方式有很多，比如外科手术切除、放疗、化疗、免疫治疗以及转移灶的局部消融治疗等。这些治疗方式在一定程度上有效提高了患者的生存率，但是由于人们饮食习惯调整和生活方式改变等因素的影响，crc的发生发展仍呈明显的上升趋势，应该引起足够重视。因此，深入探明crc的发病机制以及寻找新的治疗方式显得尤为重要。
2、传统crc的研究主要包括二维肿瘤细胞培养模型和异种肿瘤移植模型，但这些模型均有一定的局限性。crc细胞系由于培养体系成熟、易获得等优点长期被用于肿瘤生物学的研究，基因编辑技术的出现使人们可以更深入探明肿瘤的突变机制，但细胞系无法概括病人体内原始肿瘤的特征，失去异质性，这也是用肿瘤细胞系筛选的抗癌药物在临床测试中失败的关键原因。异种肿瘤移植模型虽然可以保持原发肿瘤大部分的组织学形态，更客观的反映疾病的发展和对于药物作用的反应，但是该模型最大的问题是动物与人类具有较大的物种差异性，容易引起免疫排斥反应，且它还存在成本高、技术难度大等许多不足有待进一步解决。
3、三维培养技术的发展为癌症研究提供了一种新的替代方法，类器官是指由一簇具有自我更新、自我组织能力的细胞在体外构成的3d微型器官，在一定程度上类似于人体真实的组织器官。虽然该技术的出现彻底改变了癌症研究并具有广泛的潜在应用，但结直肠
4、因此，亟需开发一种血管化的肠癌类组装体的体系制备方法和应用以解决上述问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种血管化的肠癌类组装体的体系制备方法和应用，解决了结直肠癌类器官的可控性差且传代能力有限的问题。
2、为实现上述目的，第一方面，本专利技术提供了一种血管化的肠癌类组装体的体系制备方法，包括以下步骤：
3、s0：提供结直肠癌细胞、脐带间充质干细胞、人成纤维细胞、人脐静脉内皮细胞和培养基，所述结直肠癌细胞包括人结直肠癌细胞系或分离的原代结直肠癌细胞；
4、s1：用胰酶消化所述结直肠癌细胞、所述脐带间充质干细胞、所述人成纤维细胞和所述人脐静脉内皮细胞并计数，所述结直肠癌细胞、所述脐带间充质干细胞、所述人成纤维细胞和所述人脐静脉内皮细胞按照数量比为(1～7)：(1～3):1:1的比例混合以得到混合细胞；
5、s2：使用所述培养基对所述混合细胞进行重悬以得到细胞混合悬液，将细胞混合悬液滴加到培养装置内，然后放入二氧化碳培养箱中培养以得到血管化的肠癌类组装体。
6、可选的，所述培养基包括氨基酸、维生素、无机盐、碳源、谷胱甘肽、白蛋白、胎牛血清、青霉素-链霉素和缓冲液。
7、可选的，以占所述培养基的重量百分比计，所述氨基酸的含量为1.5％-2％，所述维生素的含量为0.8-1.0％，所述无机盐的含量为10-15％，所述碳源的含量为2-4％，所述谷胱甘肽的含量为0.05-0.1％，所述白蛋白的含量为10-15％，所述胎牛血清的含量为10-15％，所述青霉素-链霉素的含量为0.5-1.5％。
8、可选的，所述培养基还包括人血管内皮生长因子、人成纤维生长因子、人表皮生长因子、人类胰岛素生长因子和细胞增殖调控剂f16。
9、可选的，以占所述培养基的重量百分比计，所述人血管内皮生长因子的含量为0-0.0005％，所述人成纤维生长因子的含量为0-0.0005％，所述人表皮生长因子的含量为0-0.0005％，所述人类胰岛素生长因子的含量为0-0.0005％，所述细胞增殖调控剂f16的含量为0-0.0005％。
10、可选的，所述氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、组氨酸、羟脯氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、盐酸赖氨酸、蛋氨酸、苯基丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸中的多种。
11、可选的，所述维生素包括维生素h、维生素b1、维生素b2、维生素b3、维生素b4、维生素b5、维生素b6、维生素b8、维生素b10和维生素b12中的多种。
12、可选的，所述无机盐选自钙盐、镁盐、钾盐、硝酸盐、硫酸盐、氯化物和磷酸盐。
13、可选的，所述无机盐包括ca(no3)2 4h2o、mgso4 7h2o、kcl、nahco3、nacl、na2hpo4中的多种。
14、第二方面，本专利技术提供了一种由所述体系制备方法制备得到的血管化的肠癌类组装体应用于药物筛选和肿瘤研究。
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1.一种血管化的肠癌类组装体的体系制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的体系制备方法，其特征在于，所述培养基包括氨基酸、维生素、无机盐、碳源、谷胱甘肽、白蛋白、胎牛血清、青霉素-链霉素和缓冲液。
3.根据权利要求2所述的体系制备方法，其特征在于，以占所述培养基的重量百分比计，所述氨基酸的含量为1.5％-2％，所述维生素的含量为0.8-1.0％，所述无机盐的含量为10-15％，所述碳源的含量为2-4％，所述谷胱甘肽的含量为0.05-0.1％，所述白蛋白的含量为10-15％，所述胎牛血清的含量为10-15％，所述青霉素-链霉素的含量为0.5-1.5％。
4.根据权利要求3所述的体系制备方法，其特征在于，所述培养基还包括人血管内皮生长因子、人成纤维生长因子、人表皮生长因子、人类胰岛素生长因子和细胞增殖调控剂F16。
5.根据权利要求4所述的体系制备方法，其特征在于，以占所述培养基的重量百分比计，所述人血管内皮生长因子的含量为0-0.0005％，所述人成纤维生长因子的含量为0-0.0005％，所述人表皮生长因子的含量
6.根据权利要求2所述的体系制备方法，其特征在于，所述氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、组氨酸、羟脯氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、盐酸赖氨酸、蛋氨酸、苯基丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸中的多种。
7.根据权利要求2所述的体系制备方法，其特征在于，所述维生素包括维生素H、维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B4、维生素B5、维生素B6、维生素B8、维生素B10和维生素B12中的多种。
8.根据权利要求2所述的体系制备方法，其特征在于，所述无机盐选自钙盐、镁盐、钾盐、硝酸盐、硫酸盐、氯化物和磷酸盐。
9.根据权利要求2所述的体系制备方法，其特征在于，所述无机盐包括Ca(NO3)2 4H2O、MgSO4 7H2O、KCl、NaHCO3、NaCl、Na2HPO4中的多种。
10.一种权利要求1-9任一项所述的体系制备方法制备得到的血管化的肠癌类组装体应用于药物筛选和肿瘤研究。
...【技术特征摘要】
1.一种血管化的肠癌类组装体的体系制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的体系制备方法，其特征在于，所述培养基包括氨基酸、维生素、无机盐、碳源、谷胱甘肽、白蛋白、胎牛血清、青霉素-链霉素和缓冲液。
3.根据权利要求2所述的体系制备方法，其特征在于，以占所述培养基的重量百分比计，所述氨基酸的含量为1.5％-2％，所述维生素的含量为0.8-1.0％，所述无机盐的含量为10-15％，所述碳源的含量为2-4％，所述谷胱甘肽的含量为0.05-0.1％，所述白蛋白的含量为10-15％，所述胎牛血清的含量为10-15％，所述青霉素-链霉素的含量为0.5-1.5％。
4.根据权利要求3所述的体系制备方法，其特征在于，所述培养基还包括人血管内皮生长因子、人成纤维生长因子、人表皮生长因子、人类胰岛素生长因子和细胞增殖调控剂f16。
5.根据权利要求4所述的体系制备方法，其特征在于，以占所述培养基的重量百分比计，所述人血管内皮生长因子的含量为0-0.0005％，所述人成纤维生长因子的含量为0-0.0005％，所述人表皮生长因子的含量为0-0.000...
【专利技术属性】
技术研发人员：王志敏，郏佳，邢佟莹，
申请(专利权)人：上海市生物医药技术研究院，
类型：发明
国别省市：
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