【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测，具体涉及一种食物特异性igg抗体检测试剂盒及其应用。
技术介绍
1、人体摄入某类食物和(或)食物添加剂而引起的异常生理表现常被称为食物不良反应(adverse reaction to food)。食物不耐受是由免疫球蛋白g(immuneglobulin g，igg)介导的一种食物不良反应，其发病机制为当患者食入某类食物后，人体的免疫系统将患者体内因缺少相关消化酶而导致未被完全分解的小分子食物抗原视为有害抗原，从而产生相应的食物特异性igg抗体，引发机体的过度保护性免疫反应。
2、如果患者长期食用不耐受食物，则该食物的特异性igg抗体便会在体内不断积蓄，并与不耐受食物抗原形成免疫复合物后游离或者沉积在相应的器官组织中，引起ⅲ型超敏反应，全身各系统也会出现异常的慢性病症，临床表现为胃肠道、皮肤、神经系统、呼吸系统、肌肉骨骼系统的异常症状，例如肠易激综合征、皮肤疾病、头痛、焦虑、抑郁、疲劳、湿疹、哮喘、慢性鼻炎、关节痛、过敏性紫癜、自身免疫性疾病等病症。与此同时，人体体内抵御外来病原微生物入侵和保障身体健康的免疫力也会出现异常。
3、临床中多种常见的疾病类型与食物不耐受息息相关，因此食物不耐受症状缺乏特异性，患者难以自我诊断。近期临床研究进一步证明：如果患者体内的消化酶得不到改善或者患者的饮食结构不发生改变，那么患者体内的与食物不耐受相关的免疫反应会持续进行。当某种食物进入人体消化系统后，通过检测人体血清中是否存在特异性igg抗体及igg抗体含量，不仅能判断患者不耐受食物的种类和不耐受程
4、目前，市面上食物特异性igg抗体的检测方法有酶联免疫法、蛋白芯片法、条带酶免分析法、免疫印迹法、免疫荧光芯片法和化学发光免疫分析法。上述检测方法中使用酶联免疫法检测食物特异性igg抗体的产品最多，其次是条带酶免分析法和蛋白芯片法，免疫印迹法、免疫荧光芯片法和化学发光免疫分析法比较少见。酶联免疫法和条带酶免分析法在检测过程中需要多步手工操作，步骤繁琐且重复性低。蛋白芯片法在检测过程中容易发生非特异性结合，检测灵敏度低。
5、目前食物特异性igg抗体的检测技术均存在手工操作步骤繁琐、检测结果重复性较差的问题，这严重影响了检测的灵敏度、阴阳性符合率和精密度。市面上多数食物特异性igg抗体的检测技术多数为单一指标的检测，检测成本较高，样本消耗量较大，无法实现高通量检测。此外，现有方法只能诊断即时过敏反应，对于迟发性过敏反应的准确诊断效果不佳；现有技术对于不同食物抗原的交叉反应没有进行有效的区分，导致误报或漏报的情况较为常见；现有方法的检测结果可能受到个体差异、食物处理方法和食物配方的影响，缺乏准确性和可靠性。
6、因此，有必要提供一种新型的食物特异性igg抗体检测试剂盒及其使用方法以解决现有技术中存在的上述问题。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种食物特异性igg抗体检测试剂盒及其应用，通过识别固相载体微球的不同信号，来区分不同的食物抗原，通过荧光抗体的检测信号来计算待测样本的浓度，能够同时检测不同种的食物特异性igg抗体，检测灵敏度高、特异性强，无需逐一检测每种食物特异性igg抗体，解决了繁琐操作的问题，缩短了检测时间。并且能够规避样本中存在多种食物特异性igg抗体而无法准确鉴别的情况，节约了成本，具有良好的应用前景。在样本检测过程中，捕获微球混合液中质控微球的检测结果可以同时实时判断试剂盒的有效性以及实验操作的正确性，绘制校准曲线仅需定标1次，更加方便客户使用。
2、与现有技术相比，本技术方案主要解决了以下技术问题：(1)提供了一种食物特异性igg抗体检测试剂盒及其应用，可以同时对57种食物抗原进行分组检测；(2)通过四组食物抗原的交叉反应与非交叉反应的设计，以及对特定食物抗原微球的封闭，解决了食物抗原之间交叉反应导致的误判问题；(3)采用一种偶联特定igg抗体亚型的质控微球进行质控，实时判读目前的检测操作的正确性，提高检测结果的准确性；(4)在待测食物特异性igg抗体项目数大的情况下，实现了一种仅需定标1次的方法，极大程度提高检测的便利性，避免人工误差；(5)提供了一种更全面、准确的食物特异性igg抗体检测方法，可以帮助人们及时发现食物过敏问题。
3、一方面，本专利技术提供了一种食物特异性igg抗体检测试剂盒，包括捕获微球混合液，荧光检测抗体试剂，所述捕获微球混合液包括偶联食物抗原的微球和质控微球，所述食物抗原由第一组食物抗原、第二组食物抗原、第三组食物抗原、第四组食物抗原组成，每一组食物抗原包含一种质控微球；所述四组食物抗原中的任意一组都会与任意另一组食物抗原对应的抗体产生交叉反应，任意一组食物抗原组内任意一种抗原与任意另一种抗原对应的抗体均不存在交叉反应；所述第一组食物抗原包括鸡蛋、牛奶、大豆、小麦、大米、鳕鱼、虾、蟹、西红柿、蘑菇、玉米、鸡肉、猪肉、马铃薯、牛肉抗原中的至少3种抗原；所述第二组食物抗原包括芝麻、花生、烟草、咖啡、白软干酪、蔗糖、青豆、菠菜、燕麦、羊肉、腰果、甘薯、巧克力、红茶、蜂蜜抗原中的至少3种抗原；所述第三组食物抗原包括扇贝、蛤、牡蛎、龙虾、三文鱼、沙丁鱼、带鱼、草鱼、金枪鱼、鳟鱼、鳎鱼、大马哈鱼抗原中的至少3种食物抗原；所述第四组食物抗原包括芒果、橘子、菠萝、西瓜、橄榄、桃、榴莲、香蕉、哈密瓜、葡萄、柚子、草莓、蓝莓、苹果、柠檬抗原中的至少3种食物抗原。
4、在本专利技术的研究过程中，发现大量食物抗原存在交叉反应，不同食物抗原之间可能由于具有相同或相似的抗原表位或因为抗原抗体结合的特异性性较低而出现交叉反应，而且同一食品分类中可能存在交叉反应导致无法同时检测；本专利技术为解决这一问题，筛选了57种食物之间的交叉免疫反应，将57种食物分成了4组，所述四组食物抗原中的任意一组都会与任意另一组食物抗原对应的抗体产生交叉反应，任意一组食物抗原组内任意一种抗原与任意另一种抗原对应的抗体均不存在交叉反应，进而实现了在大通量筛查的情况下避免交叉，使得检测结果准确。
5、进一步的，所述牛肉、青豆、扇贝、桃抗原偶联的微球混合液中添加封闭剂，所述封闭剂包括peg6000。
6、所述peg6000即聚乙二醇6000，聚乙二醇的化学式为ho(ch2ch2o)nh，n称之为聚合度，聚乙二醇是由一系列不同聚合度的分子组成的混合物，6000指的是平均分子质量。
7、当所述牛肉、青豆、扇贝、桃抗原的任意一种或多种被选择加入对应的食物分组进行检测时，在对应组的微球混合液中添加封闭剂peg6000，能够消除交叉反应；值得注意的是，区别于上述四组食物抗原分组，上述食物抗原分组之间即使加入封闭剂peg6000也无法彻底消除交叉，因此只能通过分成四组进行测试，组内存在较弱的交叉反应利用封闭剂peg6000进行消除。
8、进一步的，所述第一组食物抗原、第二组食物抗原、第三组食物抗原、第四组食物抗原本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种食物特异性IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，包括捕获微球混合液，荧光检测抗体试剂，所述捕获微球混合液包括偶联食物抗原的微球和质控微球，所述食物抗原由第一组食物抗原、第二组食物抗原、第三组食物抗原、第四组食物抗原组成，每一组食物组合包含质控微球；所述四组食物抗原中的任意一组都会与任意另一组食物抗原对应的抗体产生交叉反应，任意一组食物抗原组内任意一种抗原与任意另一种抗原对应的抗体均不存在交叉反应；所述第一组食物抗原包括鸡蛋、牛奶、大豆、小麦、大米、鳕鱼、虾、蟹、西红柿、蘑菇、玉米、鸡肉、猪肉、马铃薯、牛肉抗原中的至少3种抗原；所述第二组食物抗原包括芝麻、花生、烟草、咖啡、白软干酪、蔗糖、青豆、菠菜、燕麦、羊肉、腰果、甘薯、巧克力、红茶、蜂蜜抗原中的至少3种抗原；所述第三组食物抗原包括扇贝、蛤、牡蛎、龙虾、三文鱼、沙丁鱼、带鱼、草鱼、金枪鱼、鳟鱼、鳎鱼、大马哈鱼抗原中的至少3种食物抗原；所述第四组食物抗原包括芒果、橘子、菠萝、西瓜、橄榄、桃、榴莲、香蕉、哈密瓜、葡萄、柚子、草莓、蓝莓、苹果、柠檬抗原中的至少3种食物抗原。
2.如权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述
3.如权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述第一组食物抗原、第二组食物抗原、第三组食物抗原、第四组食物抗原的质控微球为偶联抗人IgG2抗体的微球。
4.如权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述捕获微球混合液还包括阻断剂，所述阻断剂包括灭活的兔IgG、HAMA阻断剂。
5.如权利要求4所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括洗涤缓冲液、样品稀释液、校准微球混合液、校准专用荧光检测抗体和校准品，所述校准微球混合液为抗人IgG3抗体标记的不同水平的微球混合液，校准专用荧光检测抗体为标记藻红蛋白的抗人IgG抗体，校准品为人IgG3抗体。
6.如权利要求1-5任一项所述的食物特异性IgG抗体检测试剂盒的定量方法，其特征在于，定标一次，通过测试血清得到各食物特异性IgG抗体的MFI值，再通过校准曲线回归得出各食物特异性IgG抗体的浓度。
7.一种食物抗原分组用于避免食物特异性IgG抗体检测中的交叉反应的用途，其特征在于，所述食物抗原由第一组食物抗原、第二组食物抗原、第三组食物抗原、第四组食物抗原组成；所述四组食物抗原中的任意一组都会与任意另一组食物抗原对应的抗体产生交叉反应，任意一组食物抗原组内任意一种抗原与任意另一种抗原对应的抗体均不存在交叉反应；所述第一组食物抗原包括鸡蛋、牛奶、大豆、小麦、大米、鳕鱼、虾、蟹、西红柿、蘑菇、玉米、鸡肉、猪肉、马铃薯、牛肉抗原中的至少3种抗原；所述第二组食物抗原包括芝麻、花生、烟草、咖啡、白软干酪、蔗糖、青豆、菠菜、燕麦、羊肉、腰果、甘薯、巧克力、红茶、蜂蜜抗原中的至少3种抗原；所述第三组食物抗原包括扇贝、蛤、牡蛎、龙虾、三文鱼、沙丁鱼、带鱼、草鱼、金枪鱼、鳟鱼、鳎鱼、大马哈鱼抗原中的至少3种食物抗原；所述第四组食物抗原包括芒果、橘子、菠萝、西瓜、橄榄、桃、榴莲、香蕉、哈密瓜、葡萄、柚子、草莓、蓝莓、苹果、柠檬抗原中的至少3种食物抗原。
8.如权利要求7所述用途，其特征在于，所述牛肉、青豆、扇贝、桃抗原偶联的微球混合液中添加封闭剂，所述封闭剂包括PEG6000。
9.一种抗人IgG抗体亚型质控微球用于提高检测结果准确性与可靠性的用途，其特征在于，所述抗人IgG抗体亚型质控微球为偶联抗人IgG2抗体的微球，当试剂被正确的使用时，该质控微球的测试结果显示阳性。
10.一种阻断剂用于制备降低食物特异性IgG检测的假阳性率的试剂的用途，其特征在于，所述试剂包括灭活的兔IgG、HAMA阻断剂。
...【技术特征摘要】
1.一种食物特异性igg抗体检测试剂盒，其特征在于，包括捕获微球混合液，荧光检测抗体试剂，所述捕获微球混合液包括偶联食物抗原的微球和质控微球，所述食物抗原由第一组食物抗原、第二组食物抗原、第三组食物抗原、第四组食物抗原组成，每一组食物组合包含质控微球；所述四组食物抗原中的任意一组都会与任意另一组食物抗原对应的抗体产生交叉反应，任意一组食物抗原组内任意一种抗原与任意另一种抗原对应的抗体均不存在交叉反应；所述第一组食物抗原包括鸡蛋、牛奶、大豆、小麦、大米、鳕鱼、虾、蟹、西红柿、蘑菇、玉米、鸡肉、猪肉、马铃薯、牛肉抗原中的至少3种抗原；所述第二组食物抗原包括芝麻、花生、烟草、咖啡、白软干酪、蔗糖、青豆、菠菜、燕麦、羊肉、腰果、甘薯、巧克力、红茶、蜂蜜抗原中的至少3种抗原；所述第三组食物抗原包括扇贝、蛤、牡蛎、龙虾、三文鱼、沙丁鱼、带鱼、草鱼、金枪鱼、鳟鱼、鳎鱼、大马哈鱼抗原中的至少3种食物抗原；所述第四组食物抗原包括芒果、橘子、菠萝、西瓜、橄榄、桃、榴莲、香蕉、哈密瓜、葡萄、柚子、草莓、蓝莓、苹果、柠檬抗原中的至少3种食物抗原。
2.如权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述牛肉、青豆、扇贝、桃抗原偶联的微球混合液中添加封闭剂，所述封闭剂包括peg6000。
3.如权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述第一组食物抗原、第二组食物抗原、第三组食物抗原、第四组食物抗原的质控微球为偶联抗人igg2抗体的微球。
4.如权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述捕获微球混合液还包括阻断剂，所述阻断剂包括灭活的兔igg、hama阻断剂。
5.如权利要求4所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括洗涤缓冲液、样品稀释液、校准微球混合液、校准专用荧光检测抗体和校准品，所述校准微球混合液为抗人igg3抗体标记的不同水平的微球混合液，校准专用荧光检测抗体为标记藻红蛋白的...
【专利技术属性】
技术研发人员：周延庆，徐陈槐，陈善问，黄志杰，张现侠，
申请(专利权)人：杭州赛基生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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