【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物，具体涉及一株抑制黄曲霉生长的蜡样芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
1、黄曲霉(aspergillus flavus)多见于发霉的粮食、粮制品及其它霉腐的有机物上，菌落生长较快，结构疏松，表面灰绿色，背面无色或略呈褐色，能够产生强烈生物毒性的次生代谢产物黄曲霉毒素(aflatoxin，aft)，黄曲霉毒素的主要分子形式有b、g、m等，其中以b的毒性最强，1993世界卫生组织(who)的癌症研究机构将aft划定为1级致癌物。aft具有极强的致癌作用，严重威胁人、兽、禽类的健康。
2、传统常用的aft脱毒理化方法包括有碱处理法、氧化处理法、抗氧化剂、过滤脱毒、高温处理法、合格原料稀释法、化学脱毒法bata等。传统常见aft脱毒物理化方法存在很多问题，如破坏饲料营养成分、对动物体造成毒害、脱毒效应不高、成本昂贵、给环境带来二次污染等。生物防治技术是防治黄曲霉污染最具发展前景的方法，近年来学者致力于研究生物防治方法，因此，筛选获得对黄曲霉生长具有抑制作用显得尤为重要。
技术实现思路
1、鉴于此，本专利技术的目的是提供了一株抑制黄曲霉生长的蜡样芽孢杆菌及其应用。
2、本专利技术目的是通过以下方式实现：
3、本专利技术提供一株抑制黄曲霉生长的蜡样芽孢杆菌(bacillus cereus)dlwhy-2，于2023年09月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌株保藏编号为cgmcc no.28420；地址为：北京市朝阳区北辰
4、本专利技术另一方面提供一种黄曲霉抑制剂，所述的黄曲霉抑制剂通过发酵上述的蜡样芽孢杆菌dlwhy-2制备得到。
5、基于上述技术方案，进一步地，所述的黄曲霉抑制剂的制备过程包括以下步骤：将所述的蜡样芽孢杆菌dlwhy-2以1×102-1×1010个/ml的浓度接种于发酵培养基中，25-45℃、ph 4-8，90-210rpm下摇床培养6-48h；将发酵液离心，弃沉淀，得到发酵上清液。
6、基于上述技术方案，进一步地，所述发酵培养基中的碳源包括乳糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和果糖，氮源包括酵母浸粉、蛋白胨、牛肉膏、硫酸铵和柠檬酸氢二铵。
7、基于上述技术方案，进一步地，所述的发酵培养基包括：乳糖1-3％，牛肉膏0.5-3％，氯化钠0.5-1.5％。
8、基于上述技术方案，进一步地，离心条件为于1-5℃、6000-9000rpm，离心5-30min。
9、本专利技术另一方面提供上述的蜡样芽孢杆菌dlwhy-2、黄曲霉抑制剂在抑制易滋生黄曲霉材料中黄曲霉生长的应用，所述的易滋生黄曲霉材料包括谷物、奶制品、豆制品、坚果、中药材和饲料。
10、本专利技术还提供一种利用上述的蜡样芽孢杆菌dlwhy-2抑制易滋生黄曲霉材料中的黄曲霉生长的方法，主要包括以下步骤：
11、(1)将所述的蜡样芽孢杆菌dlwhy-2接入至种子培养基中培养10-24h；
12、(2)将步骤(1)得到的菌培养液按接种体积比1-10％接种到发酵培养基中培养6-48h；
13、(3)将步骤(2)得到的发酵培养液离心，收集上清液；
14、(4)将步骤(3)获得的上清液或者步骤(2)获得的发酵液喷洒到易滋生黄曲霉材料上或直接与其混合，抑制易滋生黄曲霉材料中的黄曲霉的生长。
15、基于上述技术方案，进一步地，所述的易滋生黄曲霉材料包括谷物、奶制品、豆制品、坚果、中药材和饲料。
16、基于上述技术方案，进一步地，步骤(1)中所述的种子培养基包括：酵母膏0.5-2％，蛋白胨0.5-2％，nacl 0.5-1.5％。
17、基于上述技术方案，进一步地，步骤(1)中的培养条件为：ph 4-8，25-45℃下90-210rpm摇床培养。
18、基于上述技术方案，进一步地，步骤(2)中的培养条件为：ph 4-8，25-45℃下90-210rpm摇床培养。
19、基于上述技术方案，进一步地，步骤(3)中离心条件为于1-5℃、6000-9000rpm，离心5-30min。
20、基于上述技术方案，进一步地，步骤(4)的具体过程为：将步骤(3)获得的上清液或者步骤(2)获得的发酵液喷洒到黄曲霉污染的易滋生黄曲霉材料上上或直接与其混合，喷洒量或混合量为10-100ml/kg易滋生黄曲霉材料，密封，25-45℃，ph3-8条件下培养两天以上，抑制易滋生黄曲霉材料中的黄曲霉的生长。
21、本专利技术相对于现有技术具有的有益效果如下：
22、本专利技术以对黄曲霉生长的抑制为检测标准，筛选获得一株能够稳定、高效抑制黄曲霉生长的蜡样芽孢杆菌，将所得的蜡样芽孢杆菌的发酵上清液或发酵液均匀喷洒在易滋生黄曲霉材料的取料截面或已经污染黄曲霉的材料上，或者混入易滋生或黄曲霉已经污染的材料中(易滋生黄曲霉材料包括谷物、奶制品、豆制品、坚果、中药材和饲料)，进而抑制黄曲霉的生长；该方法与非微生物的方法比较，具有工艺绿色环保、产品稳定等优点。
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1.一株抑制黄曲霉生长的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)DLWHY-2，其特征在于，于2023年09月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌株保藏编号为CGMCC No.28420；地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
2.一种黄曲霉抑制剂，其特征在于，所述的黄曲霉抑制剂通过发酵权利要求1所述的蜡样芽孢杆菌DLWHY-2制备得到。
3.根据权利要求2所述的黄曲霉抑制剂，其特征在于，所述的黄曲霉抑制剂的制备过程包括以下步骤：将所述的蜡样芽孢杆菌DLWHY-2以1×102-1×1010个/mL的浓度接种于发酵培养基中，25-45℃、pH 4-8，90-210rpm摇床培养6-48h；将发酵液离心，弃沉淀，得到发酵上清液。
4.根据权利要求3所述的黄曲霉抑制剂，其特征在于，所述发酵培养基中的碳源包括乳糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和果糖，氮源包括酵母浸粉、蛋白胨、牛肉膏、硫酸铵和柠檬酸氢二铵。
5.根据权利要求3所述的黄曲霉抑制剂，其特征在于，离心条件为于1-5℃、6000-9000r
6.权利要求1所述的蜡样芽孢杆菌DLWHY-2、权利要求2-5任一项所述黄曲霉抑制剂在抑制易滋生黄曲霉材料中黄曲霉生长的应用，其特征在于，所述的易滋生黄曲霉材料包括谷物、奶制品、豆制品、坚果、中药材和饲料。
7.一种利用权利要求1所述的蜡样芽孢杆菌DLWHY-2抑制易滋生黄曲霉材料中的黄曲霉生长的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的易滋生黄曲霉材料包括谷物、奶制品、豆制品、坚果、中药材和饲料。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的种子培养基包括：酵母膏0.5-2％，蛋白胨0.5-2％，NaCl 0.5-1.5％，培养条件为：pH 4-8，25-45℃下90-210rpm摇床培养；步骤(2)中的培养条件为：pH 4-8，25-45℃下90-210rpm摇床培养；步骤(3)中离心条件为于1-5℃、6000-9000rpm，离心5-30min。
10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(4)的具体过程为：将步骤(3)获得的上清液或者步骤(2)获得的发酵液喷洒到黄曲霉污染的易滋生黄曲霉材料上或直接与其混合，喷洒量或混合量为10-100mL/kg易滋生黄曲霉材料，密封，25-35℃，pH 3-8条件下培养两天以上，抑制易滋生黄曲霉材料中的黄曲霉的生长。
...【技术特征摘要】
1.一株抑制黄曲霉生长的蜡样芽孢杆菌(bacillus cereus)dlwhy-2，其特征在于，于2023年09月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌株保藏编号为cgmcc no.28420；地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
2.一种黄曲霉抑制剂，其特征在于，所述的黄曲霉抑制剂通过发酵权利要求1所述的蜡样芽孢杆菌dlwhy-2制备得到。
3.根据权利要求2所述的黄曲霉抑制剂，其特征在于，所述的黄曲霉抑制剂的制备过程包括以下步骤：将所述的蜡样芽孢杆菌dlwhy-2以1×102-1×1010个/ml的浓度接种于发酵培养基中，25-45℃、ph 4-8，90-210rpm摇床培养6-48h；将发酵液离心，弃沉淀，得到发酵上清液。
4.根据权利要求3所述的黄曲霉抑制剂，其特征在于，所述发酵培养基中的碳源包括乳糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和果糖，氮源包括酵母浸粉、蛋白胨、牛肉膏、硫酸铵和柠檬酸氢二铵。
5.根据权利要求3所述的黄曲霉抑制剂，其特征在于，离心条件为于1-5℃、6000-9000rpm，离心5-30min。
6.权利要求1所述的蜡样芽孢杆菌dlwhy-2、权利要求2-5任一项所述黄曲霉...
【专利技术属性】
技术研发人员：王红英，刘九旭，王宝，赵治伟，钱斯日古楞，
申请(专利权)人：大连工业大学，
类型：发明
国别省市：
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