【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物分子标记，尤其涉及一种春秋婷美甘蓝品种的特异共显性分子标记及其检测引物与应用。
技术介绍
1、结球甘蓝简称甘蓝，其营养丰富、适应性强，是我国主要的叶菜类蔬菜之一。甘蓝根据球形分为尖球、圆球、扁球3种类型，在长江流域及以南地区，牛心型(尖球)甘蓝一直是大家喜欢种植和消费的类型。近年来包球疏松、口感清脆的暄菜类型已逐渐成为市场上的新宠。江苏农业科学院蔬菜研究所选育的春秋婷美甘蓝品种即为该类型。
2、春秋婷美甘蓝品种为中熟、春秋兼用的牛心型甘蓝品种，其球色绿、球形美观、球大、包球疏松、口感清脆。自2017年在江苏、西南地区进行推广以来，深受生产者喜欢；2018年获得非主要农作物品种登记证书，登记编号：gpd结球甘蓝(2018)320276；2021年获得植物新品种权，品种权号：cna20180254.9。
3、目前甘蓝品种及种子纯度鉴定主要采用田间形态学鉴定，然而由于甘蓝生长周期长，存在检测周期长、成本高、易受环境及人为因素影响等缺陷。因此，有必要建立基于分子标记的快速、准确的鉴定方法。插入/缺失长度多态性(insertion-deletion lengthpolymorphism，indel)标记在基因组中密度大，具有方便快捷、重复率高、多态性高、共显性等优点，属于第三代分子标记，基于父母本全基因组重测序数据而开发。开发适用于春秋婷美甘蓝品种的indel标记指纹图谱，有利于加强该品种的市场监管和知识产权保护；并且有利于提高种子纯度鉴定效率，保证该品种种子生产和推广销售的经济效益最大化，具有较
技术实现思路
1、为克服现有技术的缺陷和不足，本专利技术的目的在于提供春秋婷美甘蓝品种的特异共显性分子标记及其检测引物与应用。
2、本专利技术是这样实现的，春秋婷美甘蓝品种的特异共显性分子标记，所述特异共显性分子标记包括在参考基因组位置分别为chr1:1526908、chr2:4913164、chr3:19441960、chr4:43718571、chr5:585990、chr6:4951762、chr7:7949256、chr8:39497796、chr9:772842的indel位点。
3、本专利技术进一步公开了上述特异共显性分子标记在鉴别春秋婷美甘蓝品种中的应用。
4、本专利技术进一步公开了春秋婷美甘蓝品种的特异共显性分子标记的检测引物，所述检测引物包括：
5、chr1:1526908indel位点的扩增引物：
6、tm1-4 f：5’-gcatccacttgggacaatct-3’；
7、tm1-4 r：5’-tttggactgctcgagttcct-3’；
8、chr2:4913164位点的扩增引物：
9、tm2-3 f：5’-ctccgtaggcttgtccacat-3’；
10、tm2-3 r：5’-gcgtttgtgtttacaatttgc-3’；
11、chr3:19441960位点的扩增引物：
12、tm3-4 f：5’-gactcagatccgcctaccac-3’；
13、tm3-4 r：5’-accggttgaatcgacagaag-3’；
14、chr4:43718571位点的扩增引物：
15、tm4-10 f：5’-aaaaagcagtgcgatcatcc-3’；
16、tm4-10 r：5’-gtcctccgatcaaattccaa-3’；
17、chr5:585990位点的扩增引物：
18、tm5-2 f：5’-tctctcttgagccccacttg-3’；
19、tm5-2 r：5’-actgaaacgcccacagaatc-3’；
20、chr6:4951762位点的扩增引物：
21、tm6-18 f：5’-gctggaccagaaggtggtaa-3’；
22、tm6-18r：5’-aaatgctccaccagcaattc-3’；
23、chr7:7949256位点的扩增引物：
24、tm7-1 f：5’-tcttatgcatcttgccgttg-3’；
25、tm7-1 r：5’-tcttcgccaaaatctctcaaa-3’；
26、chr8:39497796位点的扩增引物：
27、tm8-2 f：5’-catgggctttcaaccctaaa-3’；
28、tm8-2 r：5’-gcagtagcggtccttgtgat-3’；
29、chr9:7728429位点的扩增引物：
30、tm9-13 f：5’-agctgttgggcagttaagga-3’；
31、tm9-13 r：5’-tgccggtacaatattccaaa-3’。
32、本专利技术进一步公开了上述检测引物在鉴别春秋婷美甘蓝品种中的应用。
33、优选地，该应用包括以下步骤：
34、(1)以春秋婷美甘蓝品种的父母本双亲及杂交种f1的基因组dna为模板，通过上述检测引物进行pcr扩增；
35、(2)对扩增产物进行电泳并获取条带照片，对条带进行分析并筛选出在f1中同时具有父、母本特异性条带的共显性标记，在9条染色体中各筛选出1对特异的共显性标记，获得9种标记在父母本及f1中的条带类型，并以该9种标记的条带类型作为春秋婷美甘蓝品种的特异鉴别特征。
36、优选地，在步骤(1)中，所述pcr的条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸40s，共30个循环；72℃延伸5min。
37、本专利技术进一步公开了一种春秋婷美甘蓝品种的特异共显性分子标记的检测试剂盒，该试剂盒包括下述检测引物：
38、chr1:1526908indel位点的扩增引物：
39、tm1-4 f：5’-gcatccacttgggacaatct-3’；
40、tm1-4 r：5’-tttggactgctcgagttcct-3’；
41、chr2:4913164位点的扩增引物：
42、tm2-3 f：5’-ctccgtaggcttgtccacat-3’；
43、tm2-3 r：5’-gcgtttgtgtttacaatttgc-3’；
44、chr3:19441960位点的扩增引物：
45、tm3-4 f：5’-gactcagatccgcctaccac-3’；
46、tm3-4 r：5’-accggttgaatcgacagaag-3’；
47、chr4:43718571位点的扩增引物：
48、tm4-10 f：5’-aaaaagcagtgcga本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.春秋婷美甘蓝品种的特异共显性分子标记，其特征在于，所述特异共显性分子标记包括在参考基因组位置分别为Chr1:1526908、Chr2:4913164、Chr3:19441960、Chr4:43718571、Chr5:585990、Chr6:4951762、Chr7:7949256、Chr8:39497796、Chr9:772842的InDel位点。
2.权利要求1所述的特异共显性分子标记在鉴别春秋婷美甘蓝品种中的应用。
3.春秋婷美甘蓝品种的特异共显性分子标记的检测引物，其特征在于，所述检测引物包括：
4.权利要求3所述的检测引物在鉴别春秋婷美甘蓝品种中的应用。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，该应用包括以下步骤：
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，在步骤(1)中，所述PCR的条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸40s，共30个循环；72℃延伸5min。
7.一种春秋婷美甘蓝品种的特异共显性分子标记的检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求3所述的检测引物
8.如权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括PCR用酶、PCR用水和PCR用缓冲液中的至少一种。
...【技术特征摘要】
1.春秋婷美甘蓝品种的特异共显性分子标记，其特征在于，所述特异共显性分子标记包括在参考基因组位置分别为chr1:1526908、chr2:4913164、chr3:19441960、chr4:43718571、chr5:585990、chr6:4951762、chr7:7949256、chr8:39497796、chr9:772842的indel位点。
2.权利要求1所述的特异共显性分子标记在鉴别春秋婷美甘蓝品种中的应用。
3.春秋婷美甘蓝品种的特异共显性分子标记的检测引物，其特征在于，所述检测引物包括：
4.权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾爱松，邢苗苗，严继勇，卢昱宇，许园园，朱志红，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：
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