【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种细菌外膜囊泡为模板的氢氧化铝纳米颗粒及其制备方法和应用。
技术介绍
1、氢氧化铝佐剂是使用历史最为悠久的疫苗佐剂，已有近百年历史，其能够极大地促进体液免疫(抗体)反应和th2细胞免疫反应广泛用于各种人用疫苗和兽用疫苗。作为首个被美国食品药品监督管理局(foodanddrugadministration,fda)批准用于人类的疫苗佐剂，临床使用超过30年，其有效性和安全性已得到充分验证。但传统铝佐剂有一定的局限性，其虽能诱导强烈的th2体液免疫反应，但缺乏th1细胞免疫应答。这使得传统铝佐剂应用受限，在hiv、肺结核、疟疾、肿瘤等疫苗的应用上无法取得满意的效果。并且传统铝盐佐剂使用时铝含量高、尺寸较大，在注射部位不易代谢，可导致一些局部不良反应，如红斑、皮下结节、接触性超敏，肉芽肿等。因此，能同时诱导强大体液免疫和细胞免疫且减少毒副反应的新型铝佐剂亟待研究。
2、为丰富氢氧化铝佐剂的功能性，近年来许多基于氢氧化铝的复合佐剂逐渐被研发并应用于疫苗制备。如将单磷酰脂质体a(mpl)吸附至氢氧化铝佐剂上制备的as04佐剂可有效诱导t细胞免疫反应和提高记忆性b细胞产生的频率并释放高水平的抗体(didierlaurentam,morel s,lockman l,et al.as04,an aluminum salt-and tlr4agonist-based adjuvant system,induces a transient localized innate immunerespons
技术实现思路
1、目前，基于氢氧化铝的复合佐剂，成分复杂且成本较高，受限于其较大尺寸难以被抗原呈递细胞内化，不足以诱导强大的免疫应答，依旧难以有效激活抗肿瘤免疫。现有直接制备纳米氢氧化铝技术，制备工艺繁琐、处方成分复杂、对工艺设备要求较高，往往需要添加赋形剂或稳定剂，在后续纯化过程中可能需要去除残留有机物，增加额外成本，在一定程度上制约了纳米氢氧化铝佐剂在疫苗中的应用。而现有基于生物矿化技术的间接制备方法，常会引入无功能的蛋白质模板，佐剂功能单一。
2、针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本专利技术的目的在于提供一种细菌外膜囊泡为模板的氢氧化铝纳米颗粒的制备方法与应用。细菌外膜囊泡(outer membranevesicles,omvs)是主要由革兰氏阴性菌分泌的，含有来自其亲本细胞的各种内源性免疫刺激成分，如脂多糖、外膜蛋白和脂蛋白等，且不具有复制能力的20-250nm的囊泡。可直接激活大部分宿主的先天免疫模式识别受体，诱发免疫应答，是一种很有应用前景的免疫佐剂。
3、本专利技术首次以细菌外膜囊泡为模板的蛋白质生物矿化技术构建氢氧化铝纳米颗粒，使其整合细菌外膜囊泡与氢氧化铝佐剂二者优势，赋予其复合佐剂功能。此外，本专利技术合成方法操作简便，反应过程绿色无污染，制备得到的细菌外膜囊泡为模板的氢氧化铝形态规则，整体可发挥免疫激活作用，可用于免疫治疗，具有良好的临床应用前景。
4、为了解决上述存在的技术问题，本申请提供如下技术方案：
5、本专利技术提供一种细菌外膜囊泡为模板的氢氧化铝纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：
6、(1)分别配制铝盐水溶液、酸度调节剂和4-羟乙基哌嗪乙磺酸(hepes)缓冲液；
7、(2)将细菌外膜囊泡分散于所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸(hepes)缓冲液中，得到细菌外膜囊泡溶液；
8、(3)向所述细菌外膜囊泡溶液中加入铝盐水溶液，孵育，超滤洗涤，得到所述细菌外膜囊泡为模板的氢氧化铝纳米颗粒。
9、优选的，所述细菌外膜囊泡选自大肠杆菌来源的细菌外膜囊泡或减毒沙门氏菌来源的细菌外膜囊泡。
10、细菌外膜囊泡的制备方案参考过往研究(qing s,lyu c,zhu l,etal.biomineralized bacterial outer 本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种细菌外膜囊泡为模板的氢氧化铝纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述细菌外膜囊泡选自大肠杆菌来源的细菌外膜囊泡或减毒沙门氏菌来源的细菌外膜囊泡。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述以细菌外膜囊泡为模板的氢氧化铝纳米颗粒的粒径为50-250nm。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述铝盐水溶液中，铝盐选自硫酸铝、氯化铝或硝酸铝，铝盐和水的质量比为5-10：1。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酸度调节剂为氢氧化钠水溶液；所述氢氧化钠水溶液的浓度为1-2mmol/L。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中，4-羟乙基哌嗪乙磺酸的浓度为10-20mmol/L，pH值为7.0-7.5。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述细菌外膜囊泡溶液中，细菌外膜囊泡的蛋白浓度为30-50μg/mL。
8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，
9.一种权利要求1-8中任一项所述的制备方法制备得到的细菌外膜囊泡为模板的氢氧化铝纳米颗粒。
10.一种免疫佐剂，其特征在于，采用权利要求9所述细菌外膜囊泡为模板的氢氧化铝纳米颗粒。
...【技术特征摘要】
1.一种细菌外膜囊泡为模板的氢氧化铝纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述细菌外膜囊泡选自大肠杆菌来源的细菌外膜囊泡或减毒沙门氏菌来源的细菌外膜囊泡。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述以细菌外膜囊泡为模板的氢氧化铝纳米颗粒的粒径为50-250nm。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述铝盐水溶液中，铝盐选自硫酸铝、氯化铝或硝酸铝，铝盐和水的质量比为5-10：1。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酸度调节剂为氢氧化钠水溶液；所述氢氧化钠水溶液的浓度为1-2mmol/l。
6.如...
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