【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物领域，具体而言，涉及一种轮状病毒中和抗体的检测方法以及试剂盒和应用。
技术介绍
1、轮状病毒感染性腹泻(rotavirus infectious diarrhea，rvid)是因轮状病毒(rotavirus，rv)引起的主要通过粪-口途径传播的高传染性疾病，多发生于0～3岁婴幼儿，可在全世界范围内引起婴幼儿发生严重的腹泻、呕吐、发热、脱水等症状，且有一定的致死率，每年秋冬季是轮状病毒感染的高发期。
2、轮状病毒是一种双链rna病毒，其完整的病毒粒子呈二十面体对称，无囊膜包被。病毒含有外衣壳蛋白、内衣壳蛋白、核心蛋白三种蛋白，其基因组由11个不连续的双股rna片段组成。轮状病毒的外衣壳蛋白vp4(p型抗原)是一种有凝血性质的病毒粘附蛋白，它以刺突的形式存在于病毒上，与轮状病毒的致病性和诱导机体产生中和抗体关联密切。p型抗原目前在轮状病毒中已发现了35种(p[1]～p[35])，但是绝大多数的轮状病毒感染性腹泻都是由p[4]、p[6]、p[8]这三种基因型的病毒引起的。
3、轮状病毒感染是一个公共的卫生问题，接种轮状病毒疫苗是防范措施之一，目的主要是让机体识别病毒并产生特异性抗体从而预防病毒的下一次入侵。接种疫苗后产生的中和抗体是疫苗能发挥作用的主要原因，因此常用轮状病毒中和抗体的效价来评价疫苗的效果。
4、目前，针对轮状病毒中和抗体的检测的方法主要有非细胞法和细胞法。非细胞法主要是酶联免疫吸附试验(elisa)，它是通过模拟病毒表面的抗原与中和抗体的相互作用，主要通过竞争性抑制
5、鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种轮状病毒中和抗体的检测方法以及试剂盒和应用。
2、本专利技术是这样实现的：
3、第一方面，本专利技术实施例提供了一种轮状病毒中和抗体的检测方法，其包括：将经激活后的病毒液与待测样本混合，获得混合溶液；采用所述混合溶液感染宿主细胞，获得细胞培养液；对所述细胞培养液中未被中和的病毒进行检测，以获得中和抗体的效价；其中，所述激活包括：将激活剂与病毒液混合；所述激活剂包括钙离子，所述钙离子在所述激活剂和病毒液的混合体系中的浓度为1～10mm；所述方法不以疾病的诊断或治疗为直接目的。
4、第二方面，本专利技术实施例提供了一种试剂盒，其包括：用于实施前述实施例所述的检测方法的试剂。
5、第三方面，本专利技术实施例提供了试剂组合在非疾病的诊断和治疗目的的轮状病毒中和抗体的检测或制备用于轮状病毒中和抗体的检测的产品中的应用，所述试剂组合包括：用于实施前述实施例所述的检测方法的试剂。
6、本专利技术具有以下有益效果：
7、本专利技术提供了一种新的检测轮状病毒中和抗体的方法，通过采用特定的激活剂对轮状病毒进行有效激活，以及将病毒感染细胞后再进行细胞培养的方式，实现了对轮状病毒中和抗体的高特异性、高灵敏度的检测，能够更真实有效的反应中和抗体的效价，且具有操作简单，检测周期短等优势，为感染轮状病毒的预防、免疫评价以及疫苗评价和生产提供了技术支持。
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1.一种轮状病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，其包括：将经激活后的病毒液与待测样本混合，获得混合溶液；采用所述混合溶液感染宿主细胞，获得细胞培养液；对所述细胞培养液中未被中和的病毒进行检测，以获得中和抗体的效价；
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述钙离子在所述激活剂和病毒液的混合体系中的浓度为3～7mM；
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述激活剂还包括胰酶；
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在采用所述混合溶液感染宿主细胞后，所述检测方法还包括培养宿主细胞，以获得所述细胞培养液；
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述轮状病毒包括：轮状病毒Wa P[8]、RV3 P[6]和DS-1P[4]中的任意一种或多种。
6.根据权利要求1～5任一项所述的检测方法，其特征在于，对所述细胞培养液中未被中和的病毒进行检测的步骤包括：采用固定液对所述细胞培养液中的细胞进行固定，然后加入一抗和荧光标记的二抗，根据检测的荧光信号计算中和抗体的效价；
7.根据权利要求6所述的
8.根据权利要求1～5任一项所述的检测方法，其特征在于，所述宿主细胞包括MA104细胞。
9.一种试剂盒，其特征在于，其包括：用于实施权利要求1～8任一项所述的检测方法的试剂；
10.试剂组合在非疾病的诊断和治疗目的的轮状病毒中和抗体的检测或制备用于轮状病毒中和抗体的检测的产品中的应用，其特征在于，所述试剂组合包括：用于实施权利要求1～8任一项所述的检测方法的试剂；
...【技术特征摘要】
1.一种轮状病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，其包括：将经激活后的病毒液与待测样本混合，获得混合溶液；采用所述混合溶液感染宿主细胞，获得细胞培养液；对所述细胞培养液中未被中和的病毒进行检测，以获得中和抗体的效价；
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述钙离子在所述激活剂和病毒液的混合体系中的浓度为3～7mm；
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述激活剂还包括胰酶；
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在采用所述混合溶液感染宿主细胞后，所述检测方法还包括培养宿主细胞，以获得所述细胞培养液；
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述轮状病毒包括：轮状病毒wa p[8]、rv3 p[6]和ds-1p[4]中的任意一种或多种。
6.根据权利要求1～5任...
【专利技术属性】
技术研发人员：卢锦，方习静，陈静，陈雨薇，
申请(专利权)人：成都迈科康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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