【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及一种诱导肿瘤组织pd-l1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡及其制备方法和应用。
技术介绍
1、免疫检查点是体内免疫系统中的抑制性信号通路，能够调控免疫反应的强弱和持续时间，避免组织损伤并维持机体自身的耐受。肿瘤能够利用免疫检查点通路的抑制作用，逃避免疫细胞的识别，特别是抑制t细胞的免疫应答，实现免疫逃逸。因此，抑制免疫检查点，可以激发免疫系统原有的抗肿瘤能力。目前，肿瘤免疫检查点抑制技术的研究主要集中在在ctla-4、pd-1、pd-l1三个分子，以pd-1/pd-l1抗体为代表的肿瘤免疫检查点抑制疗法近年来取得了显著的进展，然而该疗法仍存在总体有效率不高、长期使用后产生耐药等问题。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种诱导肿瘤组织pd-l1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡，所述工程化外膜囊泡通过基因工程手段呈现lyp-1靶向肽，用于靶向肿瘤组织，同时还负载有靶向pd-l1的pd-l1抗体和靶向细胞膜表面的ci-m6pr受体的m6p分子，用于促进pd-l1运输至溶酶体，从而达到在肿瘤组织局部高效降解pd-l1的目的。
2、本专利技术提供了一种诱导肿瘤组织pd-l1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡，外膜囊泡表面表达有lyp-1靶向肽，所述外膜囊泡上负载有m6p和pd-l1抗体。
3、优选的，所述lyp-1蛋白的氨基酸序列如seq id no：1所示。
4、优选的，所述m6p和pd-l1抗体通过生物素和链
5、优选的，所述工程化外膜囊泡的外膜囊泡来源于细菌。
6、本专利技术提供了一种所述诱导肿瘤组织pd-l1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡的制备方法，包括以下步骤：
7、构建含lyp-1编码序列和链霉亲和素或链霉亲和素突变体编码序列的重组载体；
8、将所述重组载体转化至宿主中，转化后的宿主进行培养，分离外膜囊泡；
9、分离的外膜囊泡与生物素标记的m6p和生物素标记的pd-l1抗体孵育，得到工程化外膜囊泡。
10、优选的，所述重组载体的构建方法，将所述lyp-1编码序列和链霉亲和素或链霉亲和素突变体编码序列形成融合基因插入到骨架载体中，形成重组载体；
11、当所述工程化外膜囊泡的外膜囊泡来源于细菌时，所述重组载体为pet9a。
12、优选的，所述融合基因的核苷酸序列如seq id no：2所示。
13、优选的，所述分离的外膜囊泡、生物素标记的m6p和生物素标记的pd-l1抗体的摩尔比为1：(50-200)：(100-500)。
14、本专利技术提供了一种抗肿瘤药物，包括所述诱导肿瘤组织pd-l1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡或所述制备方法制备的诱导肿瘤组织pd-l1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡和医学上可接受的辅料。
15、本专利技术提供了所述诱导肿瘤组织pd-l1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡或所述制备方法制备的诱导肿瘤组织pd-l1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡在制备预防和/或治疗抗肿瘤的药物中的应用。
16、本专利技术提供了一种诱导肿瘤组织pd-l1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡，外膜囊泡表面表达有lyp-1靶向肽，所述外膜囊泡上负载有m6p和pd-l1抗体。本专利技术提供的工程化外膜囊泡同时具备肿瘤靶向性和降解pd-l1的功能，具体为外膜囊泡表面表达的lyp-1通过靶向肿瘤组织表面的p32受体，从而实现肿瘤组织靶向效果；所述工程化外膜囊泡负载的pd-l1抗体，用于特异性结合肿瘤细胞的pd-l1，负载的m6p通过靶向细胞膜表面的ci-m6pr受体，从而促进pd-l1运输至溶酶体，从而降解pd-l1。可见，本专利技术提供的工程化外膜囊泡是基于pd-l1靶向溶酶体清除策略，解除肿瘤免疫抑制，实现增强肿瘤免疫，是一种新型的肿瘤免疫治疗方案，与传统方法比较具有以下优势：
17、1)通过omv的药物靶向递送，减少药物非靶向器官副作用；
18、2)omv靶向肿瘤组织递送m6p和anti-pd-l1，在肿瘤局部实现pd-l1靶向溶酶体降解作用，解除了肿瘤内免疫检查点对免疫的抑制，从而激活肿瘤免疫效应。
19、所述工程化外泌体抗肿瘤或抗癌策略临床应用前景广，具有显著特色和创新。该策略的成功有望革命性地改变肿瘤免疫治疗的方向，为提升肿瘤免疫治疗效果提供全新的视角。
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1.一种诱导肿瘤组织PD-L1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡，其特征在于，外膜囊泡表面表达有Lyp-1靶向肽，所述外膜囊泡上负载有M6P和PD-L1抗体。
2.根据权利要求1所述诱导肿瘤组织PD-L1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡，其特征在于，所述Lyp-1靶向肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
3.根据权利要求1所述诱导肿瘤组织PD-L1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡，其特征在于，所述M6P和PD-L1抗体通过生物素和链霉亲和素或链霉亲和素突变体与所述外膜囊泡连接。
4.根据权利要求1所述诱导肿瘤组织PD-L1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡，其特征在于，所述工程化外膜囊泡的外膜囊泡来源于细菌。
5.一种权利要求1～4中任意一项所述诱导肿瘤组织PD-L1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，所述重组载体的构建方法，将所述Lyp-1编码序列和链霉亲和素或链霉亲和素突变体编码序列形成融合基因插入到骨架载体中，形成重组载体；
7.
8.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，所述分离的外膜囊泡、生物素标记的M6P和生物素标记的PD-L1抗体的摩尔比为1：(50～200)：(100～500)。
9.一种抗肿瘤药物，其特征在于，包括权利要求1～4中任意一项所述诱导肿瘤组织PD-L1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡或权利要求5～8中任意一项所述制备方法制备的诱导肿瘤组织PD-L1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡和医学上可接受的辅料。
10.权利要求1～4中任意一项所述诱导肿瘤组织PD-L1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡或权利要求5～8中任意一项所述制备方法制备的诱导肿瘤组织PD-L1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡在制备预防和/或治疗抗肿瘤的药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种诱导肿瘤组织pd-l1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡，其特征在于，外膜囊泡表面表达有lyp-1靶向肽，所述外膜囊泡上负载有m6p和pd-l1抗体。
2.根据权利要求1所述诱导肿瘤组织pd-l1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡，其特征在于，所述lyp-1靶向肽的氨基酸序列如seq id no：1所示。
3.根据权利要求1所述诱导肿瘤组织pd-l1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡，其特征在于，所述m6p和pd-l1抗体通过生物素和链霉亲和素或链霉亲和素突变体与所述外膜囊泡连接。
4.根据权利要求1所述诱导肿瘤组织pd-l1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡，其特征在于，所述工程化外膜囊泡的外膜囊泡来源于细菌。
5.一种权利要求1～4中任意一项所述诱导肿瘤组织pd-l1溶酶体靶向降解的工程化外膜囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，所述重组载体的构建方法，将所...
【专利技术属性】
技术研发人员：季刚，纪盼盼，杨国栋，吴鹏英，王兰天，韦梦影，王宇菲，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：
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