【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学和生物，具体涉及一种原核argonaute蛋白及其应用。
技术介绍
1、argonaute广泛存在于真核生物、细菌、古菌中。真核生物的argonaute(eukaryotic argonaute proteins,eagos)是真核生物中rna干扰机制的核心组成部分。其与小非编码rna结合并形成rna诱导沉默复合物(rna-induced silencing complex,risc)，对目标mrna进行切割或抑制其翻译、沉默基因的表达。在细菌和古菌中，其同源蛋白简称为pagos(prokaryotic argonaute proteins)，在约17％和25％的已测序的细菌和古菌基因组中均有发现。与eagos利用小rna作为向导不同，大部分的pagos利用5’磷酸化小dna作为向导核酸，在与之互补的dna链上进行切割，比如：ttago、pfago、cbago、cpago等。尽管pagos之间在结构上很相似，但通过同源序列比对等的理论分析还无法确定其的酶活特性。
2、pagos的前期研究主要来源于嗜热微生物，其通常在高温下发挥作用，这就限制了其在中温条件下的应用。后续的研究主要从生长于常温的微生物中对pagos进行筛选，发现了部分可以在常温下发挥作用的，比如：cbago、cpago、lrago、kmago等。这些pagos通常利用5’磷酸化小dna作为向导核酸对单链dna切割，对向导核酸的5’末端基团有一定限制。其切割位点通常较为保守，即从靶标核酸所对应的向导核酸的5’末端数起第10和11位碱
3、因此，现有技术还有待于改进和发展。
技术实现思路
1、鉴于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种原核argonaute蛋白及其应用，旨在解决现有技术中pagos切割位点较为保守，特异性切割其他位点时需要重新设计向导核酸的问题，为生物
提供一种新的可选的分子工具。
2、本专利技术的技术方案具体如下：
3、本专利技术提供了一种原核argonaute蛋白，其中，所述原核argonaute蛋白的氨基酸序列如seq id no：1或seq id no：2所示。
4、具体的，所述氨基酸序列如seq id no：1所示的原核argonaute蛋白来源于霍德尔古菌，所述原核argonaute蛋白是hoago。所述氨基酸序列如seq id no：2所示的原核argonaute蛋白来源于洛基古菌，所述原核argonaute蛋白是loago。
5、可选地，所述原核argonaute蛋白来源于阿斯加德古菌，包括其它同属该核酸内切酶家族的同源蛋白。所述原核argonaute蛋白的氨基酸序列与seq id no：1或seq id no：2所示的氨基酸序列具有至少50％或至少70％同源性；优选地，具有至少80％同源性；更优选地，具有至少90％同源性。
6、可选地，所述argonaute蛋白来源于hoago或loago全长蛋白的一部分氨基酸序列。
7、可选地，所述argonaute蛋白是hoago或loago蛋白的突变体，包括但不包含在核酸酶活性位点的突变，或进一步地融合其它效应蛋白。
8、本专利技术还提供一种如上所述原核argonaute蛋白的复合物，其中，包含所述原核argonaute蛋白和向导核酸。
9、本专利技术进一步提供一种如上所述原核argonaute蛋白的应用，其中，所述原核argonaute蛋白用于在体外特异性切割靶标dna。
10、在一种实施方式中，所述原核argonaute蛋白在核酸切割体系中特异性切割靶标dna，所述核酸切割体系包括所述原核argonaute蛋白，向导核酸以及与所述向导核酸互补配对的靶标dna。
11、可选地，所述向导核酸为单链的dna或rna，所述向导核酸的5’末端带有磷酸基或羟基；优选地，所述向导核酸为dna。
12、具体的，所述原核argonaute蛋白在核酸切割体系中特异性切割靶标dna时，对向导核酸的种类和5’末端的基团没有明显的要求。当向导核酸为dna时，切割活性更佳。
13、可选地，所述向导核酸的长度为18至30个核苷酸；优选地，所述向导核酸的长度为18至22个核苷酸，更优选地，所述向导核酸的长度为18个核苷酸。
14、具体的，所述原核argonaute蛋白在核酸切割体系中特异性切割靶标dna时，向导核酸的长度对切割活性有一定影响。当向导核酸长度的范围为18～30nt时可以有效切割靶标dna，当向导核酸长度的范围为18～22nt时可以更有效切割靶标dna，当向导核酸长度的范围为18nt时可以最有效切割靶标dna。
15、可选地，所述互补配对具体为：所述靶标dna具有与所述向导核酸完全互补的核苷酸序列；或所述靶标dna具有与所述向导核酸存在单个碱基错配的核苷酸序列。
16、具体的，所述靶标dna具有与所述向导核酸存在单个碱基错配的核苷酸序列时，仍可识别靶标区域。
17、可选地，所述原核argonaute蛋白特异性切割所述靶标dna，切割位点是在与所述靶标dna互补配对的所述向导核酸的5’末端数起第13和14位碱基之间。
18、具体的，所述原核argonaute蛋白在核酸切割体系中特异性切割靶标dna时，切割位点是在传统处向靶标dna的5’末端偏移3个碱基，即在靶标dna与向导核酸互补区域5’端数起的第13和14位碱基之间。
19、可选地，所述核酸切割体系的温度为25～55℃；优选地，所述核酸切割体系的温度为37～45℃。
20、具体的，所述原核argonaute蛋白在核酸切割体系中特异性切割靶标dna时，可以在温度为25～55℃时切割靶标dna，其中温度为37～45℃时切割活性相对较高。
21、可选地，所述核酸切割体系中包含二价金属阳离子，所述二价金属阳离子选自mg2+、mn2+、co2+中的一种或多种，所述二价金属阳离子的浓度为0.5～10mm。
22、具体的，所述原核argonaute蛋白在核酸切割体系中特异性切割靶标dna时，可以在mg2+、mn2+、co2+条件下有效切割靶标dna，其中，在co2+条件下切割活性最好。mg2+、mn2+、co2+的浓度为5～10mm时，可以有效切割靶标dna。
23、有益效果：本专利技术提供了提供了一种原核argonaute蛋白，其中，所述原核argonaute蛋白的氨基酸序列如seq id no：1或seq id no：2所示。所述原核argonaute蛋白可以在25～55℃下，利用5’末本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种原核Argonaute蛋白，其特征在于，所述原核Argonaute蛋白的氨基酸序列如SEQID NO：1或SEQ ID NO：2所示。
2.一种如权利要求1所述原核Argonaute蛋白的复合物，其特征在于，包含所述原核Argonaute蛋白和向导核酸。
3.一种如权利要求1所述原核Argonaute蛋白的应用，其特征在于，所述原核Argonaute蛋白用于在体外特异性切割靶标DNA。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述原核Argonaute蛋白在核酸切割体系中特异性切割靶标DNA，所述核酸切割体系包括所述原核Argonaute蛋白，向导核酸以及与所述向导核酸互补配对的靶标DNA。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述向导核酸为单链的DNA或RNA，所述向导核酸的5’末端带有磷酸基或羟基。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述向导核酸的长度为18至30个核苷酸。
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述互补配对具体为：
8.根据权利要求4所述的应用，其
9.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述核酸切割体系的温度为25～55℃。
10.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述核酸切割体系中包含二价金属阳离子，所述二价金属阳离子选自Mg2+、Mn2+、Co2+中的一种或多种，所述二价金属阳离子的浓度为0.5～10mM。
...【技术特征摘要】
1.一种原核argonaute蛋白，其特征在于，所述原核argonaute蛋白的氨基酸序列如seqid no：1或seq id no：2所示。
2.一种如权利要求1所述原核argonaute蛋白的复合物，其特征在于，包含所述原核argonaute蛋白和向导核酸。
3.一种如权利要求1所述原核argonaute蛋白的应用，其特征在于，所述原核argonaute蛋白用于在体外特异性切割靶标dna。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述原核argonaute蛋白在核酸切割体系中特异性切割靶标dna，所述核酸切割体系包括所述原核argonaute蛋白，向导核酸以及与所述向导核酸互补配对的靶标dna。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述向导核酸为单链的dn...
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