【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞培养，具体为一种无血清、无dmso的间充质干细胞冻存液制备及其应用。
技术介绍
1、间充质干细胞是一种多能干细胞，其具有很强的分化能力，在一定的诱导条件下，可以分化为多种组织细胞。随着对间充质干细胞的深入研究，其在治疗各种疾病、促进组织修复与再生等领域也得到越来越多的关注。越来越多的关于间充质干细胞在治疗糖尿病、糖尿病并发症、心血管、神经退行性疾病、慢性难治性疾病等方面的临床实验展开。但是目前使用传统的冻存方法保存的细胞不能直接应用于临床治疗，限制了间充质干细胞临床应用的灵活性。
2、在冻存时为保护细胞不被快速形成的冰晶伤害，传统细胞冻存液一般添加一定量的二甲基亚砜(dmso)作为冷冻保护剂。但是dmso存在一定细胞毒性作用，含有dmso的细胞冻存液冻存的细胞在临床应用以解决因冻存液中含有有一定毒性的dmso、成分不明确的血清而无法直接应用于临床注射的问题。
技术实现思路
1、(一)解决的技术问题
2、针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种无血清、无dmso的间充质干细胞冻存液制备及其应用，具备组成成分明确，无需液氮保存等优点，解决了上述
技术介绍
中的问题。
3、(二)技术方案
4、为实现上述组成成分明确，无需液氮保存的目的，本专利技术提供如下技术方案：一种无血清、无dmso的间充质干细胞冻存液制备及其应用，所述间充质干细胞冻存液包括以下组分：抗冻剂和保存液，所述抗冻剂包括海藻糖、羟乙基淀粉，所述保存液包括人血白蛋白
5、2.一种无血清、无dmso的间充质细胞冻存液的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤：
6、(1)将上述抗冻剂成分海藻糖和羟乙基淀粉按照一定比例加入到基础培养基中，涡旋溶解混均，过0.22μm的滤器除菌。
7、(2)将人血白蛋白与上述步骤(1)制得的混合溶液按照一定比例混合，最后使海藻糖的终浓度为0.1-20％，羟乙基淀粉的终浓度为0.1-10％。人血白蛋白终浓度为1-15％。
8、(3)在上述无血清、无dmso冻存液中，海藻糖的终浓度为1-10％，羟乙基淀粉的终浓度为0.5-5％。人血白蛋白终浓度为1-10％。
9、3、本专利技术另一方面还提供了上述无血清、无dmso间充质干细胞冻存液在如下任一中的应用：
10、(1)上述无血清、无dmso间充质干细胞冻存液在细胞冻存中的应用；
11、(2)上述无血清、无dmso间充质干细胞冻存液在保证临床安全上的应用；
12、(3)上述无血清、无dmso间充质干细胞冻存液冻存的细胞在维持间充质干细胞活性和功能上的应用。
13、优选的，所述人血白蛋白溶液为20％的人血白蛋白溶液。
14、优选的，所述无血清、无dmso的细胞冻存液包括基础培养基和以下终浓度组分：1-10％海藻糖、0.5-5％羟乙基淀粉、1-10％人血白蛋白。
15、(三)有益效果
16、与现有技术相比，本专利技术提供了一种无血清、无dmso的间充质干细胞冻存液制备及其应用，具备以下有益效果：
17、1、本专利技术的无血清、无dmso间充质干细胞冻存液不含有有毒性作用的dmso和成分不明确的胎牛血清，避免了引入动物源性病原微生物的风险，符合临床应用的安全性要求。
18、2、本专利技术的无血清、无dmso间充质干细胞冻存液成分简单明确，且均为易于得到的试剂，成本低，易于向临床应用上转化。
19、3、本专利技术的无血清、无dmso间充质干细胞冻存液适用于于多种组织来源的间充质干细胞保存。
20、4、本专利技术的无血清、无dmso间充质干细胞冻存液冻存可高密度冻存间充质干细胞，且可长期保存于-80℃，无需转移至液氮。复苏后的细胞可直接应用于临床，随用随取，极大的方便了临床应用。改善了目前临床用间充质干细胞现用现培养的现状，极大节约时间成本和经济成本。
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1.一种无血清、无DMSO的间充质干细胞冻存液制备及其应用，所述间充质干细胞冻存液包括以下组分：抗冻剂和保存液，所述抗冻剂包括海藻糖、羟乙基淀粉，所述保存液包括人血白蛋白、基础培养基，所述抗冻剂和保存液中各溶液按质量体积比包括0.1-20％海藻糖，0.1-10％羟乙基淀粉，1-15％人血白蛋白。
2.一种无血清、无DMSO的间充质细胞冻存液的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤：
3.本专利技术另一方面还提供了上述无血清、无DMSO间充质干细胞冻存液在如下任一中的应用：
4.根据权利要求1所述的一种无血清、无DMSO的间充质干细胞冻存液制备及其应用，其特征在于：所述人血白蛋白溶液为20％的人血白蛋白溶液。
5.根据权利要求1所述的一种无血清、无DMSO的间充质干细胞冻存液制备及其应用，其特征在于：所述无血清、无DMSO的细胞冻存液包括基础培养基和以下终浓度组分：1-10％海藻糖、0.5-5％羟乙基淀粉、1-10％人血白蛋白。
【技术特征摘要】
1.一种无血清、无dmso的间充质干细胞冻存液制备及其应用，所述间充质干细胞冻存液包括以下组分：抗冻剂和保存液，所述抗冻剂包括海藻糖、羟乙基淀粉，所述保存液包括人血白蛋白、基础培养基，所述抗冻剂和保存液中各溶液按质量体积比包括0.1-20％海藻糖，0.1-10％羟乙基淀粉，1-15％人血白蛋白。
2.一种无血清、无dmso的间充质细胞冻存液的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤：
3.本发明另一方面还提供了上述无...
【专利技术属性】
技术研发人员：张迎春，苑帅，秦小娇，张立基，
申请(专利权)人：天津一安生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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