【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、生物制剂诸如蛋白质、肽和核酸是用于治疗多种疾病和障碍的有希望的方法。特别地，寡核苷酸诸如反义化合物的治疗应用非常广泛，因为这些化合物可用针对几乎任何靶基因或基因组区段的任何核苷酸序列来合成。然而，质膜在药物发现和治疗中都提出了重大挑战，尤其是对于治疗剂诸如生物制剂。例如，有关在治疗中使用基于寡核苷酸的生物制剂的主要问题是当全身施用时它们获得进入细胞内区室的能力有限。寡核苷酸化合物的细胞内递送可通过使用载体体系(诸如聚合物、阳离子脂质体)或通过构建体的化学修饰(例如通过胆固醇分子的共价附接)来促进。然而，细胞内递送效率仍然很低。
2、一种破坏膜屏障并将治疗剂诸如生物制剂递送到细胞中的潜在策略是将它们附接到“细胞穿透肽(cpp)”上。经由内吞作用进入细胞的cpp必须从内吞囊泡中排出以便到达胞质溶胶。遗憾的是，已经证明内体膜是这些cpp向细胞质递送的重要屏障；通常可忽略不计的部分肽逃逸进入细胞内部(参见例如，el-sayed,a等人，aaps j.，2009年，第11卷：第13-22页；varkouhi,a k等人，j.controlled release，2011年，第151卷：第220-228页；appelbaum,j s等人，chem.biol.，2012年，第19卷：第819-830页)。具有改善特性的环状cpp(ccpp)已经被描述用于货物部分的细胞内递送(美国专利公开号2017/0190743和2017/0355730)。
3、对用于细胞内递送治疗剂，特别是以允许调节该治疗剂的组织分
技术实现思路
1、本文描述了用于调节细胞内治疗剂的组织分布和/或保留的组合物和方法。已经发现，当包含与治疗性部分(tm)连接的细胞穿透肽(cpp)的化合物还包含如本文所述的环外肽(ep)时，该化合物具有改变的组织分布和/或保留。ep通常是含赖氨酸的肽。ep已被鉴定为本领域中先前已知的“核定位信号”(nls)，诸如sv40病毒大t抗原的核定位序列，其最小功能单元是七个氨基酸序列pkkkrkv。在cpp-tm化合物中包含ep可例如改变tm在不同组织(诸如不同类型的肌肉组织或不同类型的中枢神经系统组织)中的表达水平、活性或功能(参见例如，实施例5和7)。在一个实施方案中，化合物鞘内施用，并且调节化合物在cns组织中的组织分布和/或保留。
2、在实施方案中，提供了包含以下部分的化合物：
3、(a)细胞穿透肽(cpp)；
4、(b)治疗性部分(tm)；和
5、(c)环外肽(ep)，其中与包含cpp和tm但不含ep的化合物相比，化合物的组织分布或保留被调节。
6、在一个实施方案中，ep与cpp缀合。在一个实施方案中，ep与tm缀合。在一个实施方案中，cpp是环状细胞穿透肽(ccpp)。在各种实施方案中，治疗性部分是蛋白质、多肽、寡核苷酸或小分子。在一个实施方案中，寡核苷酸是反义化合物(ac)。在一个实施方案中，寡核苷酸不是反义化合物(ac)。
7、在实施方案中，治疗性化合物包含调节dmd的外显子2、8、11、17、19、23、29、40、41、42、43、44、45、46、48、49、50、51、52、53、55和59的剪接的ac。在实施方案中，化合物包含调节dmd的外显子2、8、11、23、43、44、45、50、51、53和55的剪接的ac。在实施方案中，化合物包含调节dmd的外显子2、23、44或51的剪接的ac。
8、在实施方案中，化合物包含调节cd33的外显子1、外显子2、外显子3、外显子4、外显子5、外显子6、外显子7a和外显子7b的剪接的ac。
9、在实施方案中，化合物选自eev-pmo-mdx23-1,2,3、eev-pmo-cd33-1和实施例5的表c中所示的具有本文所示结构的化合物。
10、在实施方案中，提供了包含本文所述的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
11、在实施方案中，提供了包括本文所述的化合物的细胞。
12、本公开还涉及一种调节治疗剂在有需要的受试者体内的组织分布或保留的方法，该方法包括施用本公开的化合物。在实施方案中，化合物鞘内施用于受试者，并且化合物调节治疗剂在中枢神经系统(cns)组织中的组织分布或保留。在实施方案中，化合物调节治疗剂在肌肉组织中的组织分布或保留。
13、本公开还涉及一种治疗有需要的受试者的疾病或障碍的方法，该方法包括施用本公开的化合物。在实施方案中，治疗剂是反义化合物(ac)，并且该化合物的施用调节靶基因的剪接或表达、降解mrna、稳定mrna或在空间上阻断mrna。在实施方案中，化合物的施用调节靶前mrna的剪接。
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1.一种化合物，所述化合物包含：
2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述EP与所述CPP缀合。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中所述EP与所述TM缀合。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中所述CPP是环状细胞穿透肽(cCPP)。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中所述EP包含至少一个带正电的氨基酸残基。
6.根据权利要求5所述的化合物，其中所述EP包含至少一个赖氨酸残基和/或至少一个精氨酸残基。
7.根据权利要求5所述的化合物，其中所述EP包含至少一个赖氨酸残基。
8.根据权利要求5所述的化合物，其中所述EP包含序列PKKKRKV。
9.根据权利要求5所述的化合物，其中所述EP包含选自KK、KR、RR、KKK、KGK、KBK、KBR、KRK、KRR、RKK、RRR、KKKK、KKRK、KRKK、KRRK、RKKR、RRRR、KGKK、KKGK、KKKKK、KKKRK、KBKBK、KKKRKV、PGKKRKV、PKGKRKV、PKKGRKV、PKKKGK
10.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中所述EP是核定位信号(NLS)。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中所述治疗性部分是除反义化合物以外的蛋白质、多肽、小分子或寡核苷酸。
12.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中所述治疗性部分是反义化合物(AC)。
13.根据权利要求12所述的化合物，其中所述AC包含选自硫代磷酸酯(PS)核苷酸、二氨基磷酸酯吗啉代核苷酸、锁核酸(LNA)、肽核酸(PNA)、包含2'-0-甲基(2'-OMe)修饰的主链的核苷酸、2'0-甲氧基-乙基(2'-MOE)核苷酸、2',4'-约束乙基(cEt)核苷酸和2'-脱氧-2'-氟-β-D-阿拉伯糖核酸(2'F-ANA)的至少一种修饰的核苷酸或核酸，并且
14.根据权利要求12所述的化合物，其中所述AC包含小干扰RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)、核酶、免疫刺激核酸、反义、antagomir、antimir、微小RNA模拟物、supermir、Ul衔接子、适体或CRISPR基因编辑机制。
15.根据权利要求12至14中任一项所述的化合物，其中所述环肽与所述AC的3'端缀合。
16.根据权利要求12至14中任一项所述的化合物，其中所述环肽与所述AC的5'端缀合。
17.根据权利要求12至14中任一项所述的化合物，其中所述环肽与所述AC的主链缀合。
18.根据权利要求12至17中任一项所述的化合物，所述化合物包含将所述环肽与所述AC缀合的接头。
19.根据权利要求18所述的化合物，其中所述接头与所述AC的所述5'端共价结合。
20.根据权利要求18所述的化合物，其中所述接头与所述AC的所述3'端共价结合。
21.根据权利要求18所述的化合物，其中所述接头与所述AC的所述主链共价结合。
22.根据权利要求18至21中任一项所述的化合物，其中所述接头与所述环肽上的氨基酸残基的侧链共价结合。
23.根据权利要求18至22中任一项所述的化合物，其中所述接头包含二价或三价C1-C50亚烷基，其中1-25个亚甲基基团任选地且独立地被-N(H)-、-N(C1-C4烷基)-、-N(环烷基)-、-O-、-C(O)-、-C(O)O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(C1-C4烷基)-、-S(O)2N(环烷基)-、-N(H)C(O)-、-N(C1-C4烷基)C(O)-、-N(环烷基)C(O)-、-C(O)N(H)-、-C(O)N(C1-C4烷基)、-C(O)N(环烷基)、芳基、杂芳基、环烷基或环烯基替换。
24.根据权利要求18至22中任一项所述的化合物，其中所述接头包含：
25.根据权利要求24所述的化合物，其中所述接头包含：
26.根据权利要求24或25所述的化合物，其中每个R1和R2各自独立地是亚烷基，每个J是O，每个x独立地是1至20的整数，并且每个z独立地是1至20的整数。
27.根据权利要求18所述的化合物，其中所述接头包含：
28.根据权利要求18至27中任一项所述的化合物，其中所述接头具有以下结构：
29.根据权利要求18至27中任一项所述的化合物，其中所述接头具有以下结构：
30.根据权利要求29所述的化合物，其中M是：...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种化合物，所述化合物包含：
2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述ep与所述cpp缀合。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中所述ep与所述tm缀合。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中所述cpp是环状细胞穿透肽(ccpp)。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中所述ep包含至少一个带正电的氨基酸残基。
6.根据权利要求5所述的化合物，其中所述ep包含至少一个赖氨酸残基和/或至少一个精氨酸残基。
7.根据权利要求5所述的化合物，其中所述ep包含至少一个赖氨酸残基。
8.根据权利要求5所述的化合物，其中所述ep包含序列pkkkrkv。
9.根据权利要求5所述的化合物，其中所述ep包含选自kk、kr、rr、kkk、kgk、kbk、kbr、krk、krr、rkk、rrr、kkkk、kkrk、krkk、krrk、rkkr、rrrr、kgkk、kkgk、kkkkk、kkkrk、kbkbk、kkkrkv、pgkkrkv、pkgkrkv、pkkgrkv、pkkkgkv、pkkkrgv和pkkkrkg的序列。
10.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中所述ep是核定位信号(nls)。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中所述治疗性部分是除反义化合物以外的蛋白质、多肽、小分子或寡核苷酸。
12.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中所述治疗性部分是反义化合物(ac)。
13.根据权利要求12所述的化合物，其中所述ac包含选自硫代磷酸酯(ps)核苷酸、二氨基磷酸酯吗啉代核苷酸、锁核酸(lna)、肽核酸(pna)、包含2'-0-甲基(2'-ome)修饰的主链的核苷酸、2'0-甲氧基-乙基(2'-moe)核苷酸、2',4'-约束乙基(cet)核苷酸和2'-脱氧-2'-氟-β-d-阿拉伯糖核酸(2'f-ana)的至少一种修饰的核苷酸或核酸，并且
14.根据权利要求12所述的化合物，其中所述ac包含小干扰rna(sirna)、微小rna(mirna)、核酶、免疫刺激核酸、反义、antagomir、antimir、微小rna模拟物、supermir、ul衔接子、适体或crispr基因编辑机制。
15.根据权利要求12至14中任一项所述的化合物，其中所述环肽与所述ac的3'端缀合。
16.根据权利要求12至14中任一项所述的化合物，其中所述环肽与所述ac的5'端缀合。
17.根据权利要求12至14中任一项所述的化合物，其中所述环肽与所述ac的主链缀合。
18.根据权利要求12至17中任一项所述的化合物，所述化合物包含将所述环肽与所述ac缀合的接头。
19.根据权利要求18所述的化合物，其中所述接头与所述ac的所述5'端共价结合。
20.根据权利要求18所述的化合物，其中所述接头与所述ac的所述3'端共价结合。
21.根据权利要求18所述的化合物，其中所述接头与所述ac的所述主链共价结合。
22.根据权利要求18至21中任一项所述的化合物，其中所述接头与所述环肽上的氨基酸残基的侧链共价结合。
23.根据权利要求18至22中任一项所述的化合物，其中所述接头包含二价或三价c1-c50亚烷基，其中1-25个亚甲基基团任选地且独立地被-n(h)-、-n(c1-c4烷基)-、-n(环烷基)-、-o-、-c(o)-、-c(o)o-、-s-、-s(o)-、-s(o)2-、-s(o)2n(c1-c4烷基)-、-s(o)2n(环烷基)-、-n(h)c(o)-、-n(c1-c4烷基)c(o)-、-n(环烷基)c(o)-、-c(o)n(h)-、-c(o)n(c1-c4烷基)、-c(o)n(环烷基)、芳基、杂芳基、环烷基或环烯基替换。
24.根据权利要求18至22中任一项所述的化合物，其中所述接头包含：
25.根据权利要求24所述的化合物，其中所述接头包含：
26.根据权利要求24或25所述的化合物，其中每个r1和r2各自独立地是亚烷基，每个j是o，每个x独立地是1至20的整数，并且每个z独立地是1至20的整数。
27.根据权利要求18所述的化合物，其中所述接头包含：
28.根据权利要求18至27中任一项所述的化合物，其中所述接头具有以下结构：
29.根据权利要求18至27中任一项所述的化合物，其中所述接头具有以下结构：
30.根据权利要求29所述的化合物，其中m是：
31.根据权利要求30所述的化合物，其中m是-c(o)。
32.根据权利要求29至31中任一项所述的化合物，其中z是11。
33.根据权利要求29至32中任一项所述的化合物，其中x是1。
34.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，所述化合物包含与根据权利要求中任一项所述的环肽或根据权利要求所述的接头缀合的环外肽(ep)。
35.根据权利要求29至34中任一项所述的化合物，所述化合物包含与所述接头的氨基基团缀合的环外肽(ep)。
36.根据权利要求34或35所述的化合物，其中所述ep包含2至10个氨基酸残基。
37.根据权利要求34至36中任一项所述的化合物，其中所述ep包含4至8个氨基酸残基。
38.根据权利要求34至37中任一项所述的化合物，其中所述ep包含1或2个氨基酸，所述氨基酸包含含有胍基或其质子化形式的侧链。
39.根据权利要求34至38中任一项所述的化合物，其中所述ep包含1、2、3或4个赖氨酸残基。
40.根据权利要求39所述的化合物，其中每个赖氨酸残基的侧链上的氨基基团被三氟乙酰基(-cocf3)基团、烯丙氧基羰基(alloc)、1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代亚环己基)乙基(dde)或(4,4-二甲基-2,6-二氧代环己-1-亚基-3)-甲基丁基(ivdde)基团取代。
41.根据权利要求34至40中任一项所述的化合物，其中所述ep包含至少2个具有疏水侧链的氨基酸残基。
42.根据权利要求41所述的化合物，其中所述具有疏水侧链的氨基酸残基是缬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸。
43.根据权利要求34至42中任一项所述的化合物，其中所述环外肽包含以下序列中的一者：pkkkrkv；kr；rr；kkk；kgk；kbk；kbr；krk；krr；rkk；rrr；kkkk；kkrk；krkk；krrk；rkkr；rrrr；kgkk；kkgk；kkkkk；kkkrk；kbkbk；kkkrkv；pgkkrkv；pkgkrkv；pkkgrkv；pkkkgkv；pkkkrgv；或pkkkrkg。
44.根据权利要求34至43中任一项所述的化合物，其中所述环外肽具有以下结构：ac-p-k-k-k-r-k-v-。
45.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，所述化合物包含以下结构：
46.根据权利要求1至45中任一项所述的化合物，其中所述环肽在所述环肽中包含4至20个氨基酸残基，其中至少两个氨基酸残基包含胍基或其质子化形式，并且至少两个氨基酸残基独立地包含疏水侧链。
47.根据权利要求1至46中任一项所述的化合物，其中所述环肽包含2、3或4个氨基酸残基，所述氨基酸残基包含胍基或其质子化形式。
48.根据权利要求46或47所述的化合物，其中所述环肽包含2、3或4个包含疏水侧链的氨基酸残基。
49.根据权利要求46至48中任一项所述的化合物，其中所述环肽包含至少一个氨基酸，所述氨基酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：钱自清，P·多尔蒂，M·凯拉巴迪，刘皓明，沈秀龙，
申请(专利权)人：恩特拉达治疗学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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