【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种测定植物根状茎茎壁厚度和体积的方法。
技术介绍
1、克隆植物是广泛存在的一个植物类群，在许多生态系统中处于优势地位，全球的数据分析结果表明克隆植物至少分属于139个科，占统计植物种的46.66％，科的65.57％；其中多年生草本中克隆植物占77.23％；单子叶克隆植物中禾本科克隆植物227种，占克隆植物总数的14.13％。以我国东北样带为例，取样区域内的315种植物中，克隆植物155种，而根茎型克隆植物高达123种(占总克隆植物的79.4％)，其中的松嫩草地以根茎型克隆植物羊草为建群种，其他常见物种包括拂子茅(calamagrostis epigeios)、光芦苇(phragmitesaustralis)、毛芦苇(phragmites hirsute)、光稃茅香(hierochloe glabra)、赖草(leymussecalinus)等皆为根茎型禾草。
2、根茎型克隆植物不仅种类丰富，在研究植物形态可塑性、生理整合性以及适应策略(包括生物入侵)时也是良好的实验材料。根状茎是根茎克隆植物的标志和重要器官之一，具有很强的储藏能力，附着于根茎上的芽萌发形成的幼苗比实生苗具有更强的抗逆性和生存能力，长在根状茎上的芽是地上生产力最主要的来源，故以根茎型克隆植物为建群种的天然草地的修复和扩张主要依赖于地下的根状茎。根状茎分节，每节之间不同部位粗细不同(如图1)。根状茎在植物的无性和有性繁殖权衡、克隆分株间信息交流和物质交换、预测资源斑块的质量、地下芽库与地上生产力间关系等方面都起到了重要的作用，所以对根茎型
3、目前对于根茎型克隆植物根茎的测定仍然存在如下问题：
4、1)以母株为中心基点，根状茎向周围扩散，但是因为生长时间不同，每条根状茎的粗细均不相同(如图2)；
5、2)根状茎不同部位(根状茎节处、1/4处、1/2处)粗细不均匀(如图1)；
6、3)受土壤理化性质的影响根茎的横切面并非呈现规则的圆形，往往是不规则形状；
7、4)根茎呈现中间空心的形态(如羊草、拂子茅、芦苇等植物根茎)；
8、以上四点是根茎茎壁厚度和体积测定的最大障碍。
技术实现思路
1、本专利技术是要解决目前根茎型克隆植物的根茎体积和密度测定难度高、准确率低的技术问题，而提供一种测定根茎型克隆植物根状茎茎壁厚度和体积的方法。
2、本专利技术的测定根茎型克隆植物根状茎茎壁厚度和体积的方法是按以下步骤进行的：
3、一、根茎型克隆植物根茎的采集：
4、在待测的克隆植物的样地中，以母株为基点挖出待测的根状茎，去除根系和地上部分只保留根状茎，根状茎用洗瓶冲洗干净后用滤纸吸收根状茎表面的水分；将浸过蒸馏水的滤纸平铺放入自封袋中，将根状茎放入自封袋中且在滤纸上方，将自封袋放在4℃的冰箱中保存；
5、二、将自封袋中保存的根状茎取出，将一根软绳沿着根状茎的形状铺设，然后测量软绳拉直后的长度即为根状茎的长度l；
6、三、根茎型克隆植物根茎石蜡切片的制作：
7、1、取材：选取一个待测的根状茎节，将一根软绳沿着根状茎节的形状铺设，然后测量软绳拉直后的长度即根状茎节的长度h；以根状茎节的一个节点为起点记为rh1，在距离rh1处1/4h的点记为rh2，在距离rh1处1/2h的点记为rh3，分别以rh1、rh2和rh3为起点向远离rh1的方向截取3段长度均为0.2cm～0.5cm的根茎段作为待测物；
8、将上述的三个待测物分别进行下述的操作：
9、2、固定：将30ml的faa固定液加入50ml的注射器中，然后加入上述的一个待测物，静置浸泡2h～2.2h，然后通过推动注射器的活塞将其中的空气全部排出，再用活塞反复抽10次～12次进行加压(此过程注射器内为真空条件)，最后静置浸泡2h～2.2h(此过程注射器内为真空条件)；
10、3、脱水：从注射器中取出待测物，用不同体积浓度的酒精溶液分别浸泡1h；按照浸泡的顺序，酒精的体积浓度依次为70％、85％、95％、100％和100％；
11、4、脱色：用不同体积比的二甲苯和酒精混合液分别浸泡待测物1h；按照浸泡的顺序，混合液中二甲苯的体积分数依次为50％、80％、100％和100％；
12、5、浸蜡与包埋：①在烧杯中加入二甲苯，然后加热至36℃并保温，向烧杯中逐步加入碎石蜡，边加碎石蜡边搅拌至过饱和位置，在36℃恒温下浸泡12h后将二甲苯与石蜡的混合液倒出，保留待测物；
13、②然后在烧杯中加入新的碎石蜡完全淹没待测物，在60℃恒温烘箱中加热8h，倒掉石蜡，保留待测物；
14、③重复步骤②三次，然后自然冷却至室温，得到包埋待测物的石蜡块；
15、6、切片：将步骤五制备的石蜡块用刀片切成等腰梯形结构，用烧红的蜡铲把等腰梯形的下底粘于木块上，然后用切片机竖直切石蜡块为片状，切片厚度为40μm；
16、7、粘片与烤片：在载玻片上涂抹粘片剂，再滴加蒸馏水，放上切好的蜡片，在40℃加热板上烤干；
17、四、观察并拍照：用尼康正置荧光显微镜在4×5倍下观察材料并拍照；
18、五、图形分析：用image j图象处理软件分析，得出rh1处的茎壁厚度为d1，rh2处的茎壁厚度为d2，rh3处的茎壁厚度为d3，rh1处的横切面积为a1,，rh2处的横切面积为a2，rh3处的横切面积为a3；
19、六、根茎型克隆植物根茎茎壁厚度和体积的计算方法：
20、计算平均茎壁厚度dave＝1/3(d1+d2+d3)；
21、计算平均横切面积aave＝1/3(a1+a2+a3)；
22、通过根状茎的长度l和平均横切面积aave计算根状茎的体积v＝aave×l。
23、步骤六中计算的数值为选取一个根状茎节作为待测样品，还可以在根状茎的不同部位选取多个根状茎节作为待测样品，最终算平均值更为准确。
24、本专利技术的优点：
25、本专利技术解决了某些根茎型草本植物，如羊草(leymuschinensis)、拂子茅(calamagrostis epigejos)、赖草(leymussecalinus)、芦苇(phragmites australis)等植物根状茎不同部位粗细不均匀，形状不规则，并且中空，难以用游标卡尺等简单的方法测定体积和密度的问题，该方法可以精准的测出根茎的体积和密度，广泛适用于大部分根茎型草本植物。本发本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种测定根茎型克隆植物根状茎茎壁厚度和体积的方法，其特征在于测定根茎型克隆植物根状茎茎壁厚度和体积的方法是按以下步骤进行的：
2.根据权利要求1所述的一种测定根茎型克隆植物根状茎茎壁厚度和体积的方法，其特征在于步骤一中所述的洗瓶中装的是自来水。
3.根据权利要求1所述的一种测定根茎型克隆植物根状茎茎壁厚度和体积的方法，其特征在于步骤一中所述的待测的克隆植物为羊草、拂子茅、光芦苇、毛芦苇、光稃茅香和赖草。
4.根据权利要求1所述的一种测定根茎型克隆植物根状茎茎壁厚度和体积的方法，其特征在于步骤三1中分别以Rh1、Rh2和Rh3为起点向远离Rh1的方向截取3段长度均为0.5cm的根茎段作为待测物。
5.根据权利要求1所述的一种测定根茎型克隆植物根状茎茎壁厚度和体积的方法，其特征在于步骤三7中所述的粘片剂为赫伯特粘片剂。
【技术特征摘要】
1.一种测定根茎型克隆植物根状茎茎壁厚度和体积的方法，其特征在于测定根茎型克隆植物根状茎茎壁厚度和体积的方法是按以下步骤进行的：
2.根据权利要求1所述的一种测定根茎型克隆植物根状茎茎壁厚度和体积的方法，其特征在于步骤一中所述的洗瓶中装的是自来水。
3.根据权利要求1所述的一种测定根茎型克隆植物根状茎茎壁厚度和体积的方法，其特征在于步骤一中所述的待测的克隆植物为...
【专利技术属性】
技术研发人员：张金伟，石玉杰，王鹏杰，李杰，白珍建，梅琳琳，秦立刚，王明君，崔国文，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：
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