【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及核酸检测领域，具体涉及一种构建测序文库的方法及其试剂盒。
技术介绍
1、自从第一代测序技术sanger测序专利技术以来，使得人们可以不断在单碱基水平研究各物种的基因组序列。由于sanger测序价格昂贵，测序通量低等劣势，2005年左右二代测序相继被开发出来，极大地降低了测序的价格和提升了测序的通量。
2、测序可以在很多不同的层面开展，包括基因组、转录组、甲基化、免疫共沉淀测序等。基因组层面的测序主要可以分为三大类：全基因组测序(whole-genome sequencing，简称w gs)、全外显子测序(whole-exome sequencing，简称wes)、靶向测序(targetedsequencing或panel sequencing)。
3、全基因组测序，是对整个基因组的所有碱基进行测序，主要可分为从头测序(denovo s equencing)和重测序(re-sequencing)。从头测序不需要任何参考基因组信息即可对某个物种的基因组进行测序，利用生物信息学分析方法进行拼接、组装，获得该物种的基因组序列图谱，从而推进改物种的后续研究。重测序是对有参考基因组物种的不同个体进行的基因组测序，并在此基础上对个体或群体进行差异分析，主要用于辅助研究者发现核苷酸多态性位点(snps)、拷贝数变异(cnv)、插入/缺失(indel)等变异类型。随着二代测序(illumina)技术的发展与普及，全基因组重测序已成为人类遗传学、转化医学和群体进化领域最为迅速而有效的方法之一，可更全面地挖掘全基
4、全外显子测序是对基因组的所有外显子进行测序(通常是编码基因的外显子)。对于人来说，外显子序列大概占到人类基因组序列的2％左右，主要应用于鉴定单核苷酸变异或少量碱基的插入或缺失等。但是全外显子测序的探针是依据已经完成的基因组序列设计，探针序列固定，无法检出特定的人群拥有的特异的变异。
5、靶向测序是将目标基因组区域的dna片段进行富集后，再利用第二代测序技术进行测序的方法，包括靶向扩增子测序和靶向捕获测序。通常是对已知致病基因或感兴趣的基因进行测序，在临床中，主要应用于辅助疾病的诊断和治疗。由于只需对基因组中感兴趣的候选区域进行测序就可满足检测需求，大幅缩小了测序区域，极大地降低了成本，非常适合大样本量检测。
6、除了在临床上应用外，靶向测序和全基因组测序对于研究人员来说也非常有价值，研究人员对靶标区域和基因组序列的持续关注可以帮助他们确定新的基因变异是否与人的健康状况有关，这将有助于未来的疾病诊断。
7、全基因组测序能全面检测各类基因组变异，特别是结构变异，但是成本比较高。全外显子测序可用于全基因组层面的单核苷酸变异检测或少量碱基的插入或缺失等信息检测，但是不大适合用于鉴定结构变异，且建库成本较高。相对于靶向扩增测序，靶向捕获测序需要设计不同的探针，成本更高，并且建库起始量要求高，靶向扩增测序成本低，但是只能检测已知的目标区域。针对不同的检测需求需要选择不同的测序策略，如果需要同时获得全基因组和靶向测序数据，则需要分别构建两种不同的文库后再进行测序，获得相应的数据进行分析，耗时较长，建库成本较高。
技术实现思路
1、根据第一方面，在一实施例中，提供一种构建测序文库的方法，该方法包括以下步骤：
2、接头连接步骤：将多个核酸片段与接头混合，反应，得到两端均连接有所述接头的核酸片段产物；
3、文库构建步骤，所述文库构建步骤包括全基因组文库构建步骤以及靶向测序文库构建步骤；
4、所述全基因组测序文库构建步骤包括：从所述接头连接步骤所得的所述核酸片段产物中取一部分样本，对所述样本进行全基因组扩增，得到所述全基因组测序文库；
5、所述靶向测序文库构建步骤包括：从所述接头连接步骤所得的所述核酸片段产物中另取一部分样本，裂解所述样本中与所述核酸片段产物连接的接头中的部分序列，对裂解后的产物进行靶向扩增，得到所述靶向测序文库。
6、根据第二方面，在一实施例中，提供一种试剂盒，包含接头，所述接头包含第一序列和第二序列，其中，所述第二序列中至少部分序列与所述第二序列中至少部分序列反向互补配对，并且，所述第一序列含有至少一个裂解位点。该接头用于连接至核酸样本，用于靶向扩增时，通过裂解第一序列上的裂解位点，使得靶向扩增接头暴露，从而实现靶向扩增。
7、依据上述实施例的构建测序文库的方法及其试剂盒，本专利技术提供一种通用的兼顾全基因组和靶向扩增高通量测序文库构建方法，有效降低建库成本，显著缩短检测实验所需的时间。
8、在一实施例中，本专利技术降低对样本起始量的要求。
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1.一种构建测序文库的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在接头连接步骤中，核酸片段产物所连接的接头为双链接头，在所述靶向测序文库构建步骤中，所述核酸片段产物所连接的双链接头中，一条单链的至少部分序列被裂解。
3.如权利要求1～2任意一项所述的方法，其特征在于，在接头连接步骤中，所述接头具有第一序列和第二序列，所述第一序列中至少部分序列与所述第二序列中至少部分序列反向互补配对，所述第一序列包含至少一个裂解位点；
4.如权利要求1～3任意一项所述的方法，其特征在于，在所述靶向测序文库构建步骤中，使用酶裂解所述样本中含有所述裂解位点的接头；
5.如权利要求1～4任意一项所述的方法，其特征在于，在所述靶向测序文库构建步骤中，构建靶向测序文库的反应体系中含有靶向引物、第一通用测序引物和第二通用测序引物；
6.如权利要求1～5任意一项所述的方法，其特征在于，在所述全基因组测序文库构建步骤中，构建所述全基因组测序文库的反应体系中含有可与所述接头的第一序列中的至少部分序列反向互补配对的第一
7.如权利要求1～6任意一项所述的方法，其特征在于，在所述接头连接步骤中，所述接头包含分子标签。
8.如权利要求1～7任意一项所述的方法，其特征在于，在所述接头连接步骤中，所述核酸片段为天然的核酸片段或经人工打断获得的核酸片段；
9.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含接头，所述接头包含第一序列和第二序列，其中，所述第二序列中至少部分序列与所述第二序列中至少部分序列反向互补配对，并且，所述第一序列含有至少一个裂解位点。
10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含用于靶向扩增靶标区域的靶向引物，所述靶向引物包含公共测序序列和可与靶标区域反向互补配对的序列；其中，所述靶向引物的公共测序序列中的至少部分序列与第一通用测序引物的至少部分公共测序序列相同；
...【技术特征摘要】
1.一种构建测序文库的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在接头连接步骤中，核酸片段产物所连接的接头为双链接头，在所述靶向测序文库构建步骤中，所述核酸片段产物所连接的双链接头中，一条单链的至少部分序列被裂解。
3.如权利要求1～2任意一项所述的方法，其特征在于，在接头连接步骤中，所述接头具有第一序列和第二序列，所述第一序列中至少部分序列与所述第二序列中至少部分序列反向互补配对，所述第一序列包含至少一个裂解位点；
4.如权利要求1～3任意一项所述的方法，其特征在于，在所述靶向测序文库构建步骤中，使用酶裂解所述样本中含有所述裂解位点的接头；
5.如权利要求1～4任意一项所述的方法，其特征在于，在所述靶向测序文库构建步骤中，构建靶向测序文库的反应体系中含有靶向引物、第一通用测序引物和第二通用测序引物；
6.如权利要求1～5任意一项所述的方法，其特征在于，在所述全基因组测序文库构建步骤中...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈丹，韩博炜，
申请(专利权)人：广东积因生物有限公司，
类型：发明
国别省市：
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