【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请涉及结合至人淀粉样蛋白原纤维的抗体-肽融合蛋白以及使用所述抗体-肽融合蛋白方法。
技术介绍
1、淀粉样变性是一种致命的蛋白质折叠病症，其特征在于蛋白质原纤维和硫酸乙酰肝素蛋白聚糖在重要器官和组织中的聚集和沉积(merlini,g.等人(2003)n.engl.j.med.349,583-596；merlini,g.等人(2004)j.intern.med.255,159-178；delorenzi,e.等人(2004)curr.med.chem.11,1065-1084；merlini,g.(2004)neth.j.med.62,104-105)。淀粉样蛋白的不断累积总是导致器官功能障碍和严重的发病或死亡。沉积物可以是脑部的，如在阿尔茨海默氏病、亨廷顿氏病或朊病毒病患者中；或者是外周的，如在轻链相关(al)淀粉样变性、甲状腺素运载蛋白相关(attr)淀粉样变性和2型糖尿病患者中所见。进一步细分为局部或全身分别指示前体蛋白是局部产生(在沉积部位)还是在血流中循环并沉积在远处解剖部位(westermark,p.等人(2007)amyloid.14,179-183)。淀粉样蛋白可影响任何器官或组织，但肾脏、胰腺、肝脏、脾脏、神经组织和心脏构成患有家族性或散发性形式的系统性淀粉样变性的患者中的主要沉积部位。阿尔茨海默氏病目前影响超过400万美国人，并且这一数字预计到2050年将增加至1600万以上。它是迄今为止最常见形式的淀粉样变性，并且对社会经济的影响最大。它是迄今为止最常见形式的淀粉样变性，通常被认为是孤儿病症，但在美国广泛诊
2、其中，主要的外周淀粉样变性是甲状腺素运载蛋白相关(attr)淀粉样变性，其次是轻链相关(al)淀粉样变性。前者是由野生型(散发性)或变体甲状腺素运载蛋白(遗传性)沉积引起，并且临床上主要表现为周围神经和心脏；然而，肌肉骨骼受累常见，并且可能比器官沉积早数十年。后者是导致由免疫球蛋白轻链蛋白组成的原纤维沉积的散发性单克隆浆细胞恶液质。al占所有外周淀粉样蛋白病例的约三分之二，并且在美国的计算发病率为每年每100,000人约1.4例，与急性淋巴细胞性白血病和慢性骨髓性白血病的计算发病率相当(group,u.s.c.s.w.(2007)united states cancer statistics:1999-2003incidenceand mortality web-based report,u.s.department of health and human servicescenters for disease control and prevention national cancer institute,atlanta)。尽管al是与相关的浆细胞恶液质多发性骨髓瘤一样常见的五分之一，但它可能更具破坏性，中值存活期仅13.2个月，这部分是因为器官破坏的快速进展性质、缺乏有效的抗淀粉样蛋白治疗剂和在器官衰竭发生之前无法有效地诊断疾病。不到5％的所有al患者从诊断时起存活10年或更长时间(comenzo,r.l.等人(2002)blood 99,4276-4282)。此外，在患有心脏al淀粉样变性的患者中，中值存活期少于5个月。
3、attr是系统性淀粉样变性的一种形式。25％的attr淀粉样变性患者在诊断后24个月内死亡。(gertz和dispenzieri jama 324(1)79-89(2002)。)目前的疗法不能预防器官损伤。attr淀粉样变性是由甲状腺素运载蛋白(ttr)原纤维引起的。甲状腺素运载蛋白是一种由肝脏制造的有助于在血液中携带甲状腺激素和维生素a的蛋白质。通常，ttr是由4个单链单体组成的四聚体。在遗传性attr淀粉样变性中，ttr基因突变被认为使蛋白质不稳定并导致四聚体解离成单体，所述单体聚集成淀粉样蛋白原纤维。在野生型attr淀粉样变性中，正常ttr蛋白变得不稳定、错误折叠并形成淀粉样蛋白原纤维。
4、这些淀粉样蛋白原纤维然后在全身多个器官中累积，例如手腕，在称为腕管的狭窄通道中。这可导致腕管综合征，从而引起手和手臂变得麻木和刺痛。椎管，其可导致脊柱变窄(椎管狭窄)。心脏，其可导致心力衰竭和/或心律不齐，称为心房颤动。
5、在美国，另一种流行形式的外周淀粉样变性是炎症相关(aa)淀粉样变性，其与诸如关节炎、结核病和家族性地中海热的慢性炎症性病症相关。aa的发病率在欧洲某些地区最高，并且频率因种族群体而异(buck,f.s.等人(1989)mod.pathol.2,372-377)。在家族性地中海热流行且未经治疗的地区，aa的发病率可达100％。在欧洲，基于在丹麦进行的尸检研究，发病率估计为0.86％(lofberg,h.等人(1987)acta pathologica,microbiologica,et immunologica scandinavica 95,297-302)；然而，在患有类风湿性或银屑病性关节炎患者中，aa的发生率可高达26％。如此高的流行率可能需要筛查计划来更早地检测到所述疾病。淀粉样蛋白的沉积与血清淀粉样蛋白a(saa)(其为淀粉样蛋白原纤维的前体)的血浆浓度的持续增加相关(rocken,c.等人(2002)virchows arch.440,111-122)。aa与al在所沉积的前体蛋白的类型方面不同，但两者具有与原纤维形成和沉积相关的共同机制特征(rocken,c.等人(2006)j.pathol.210,478-487；rocken,c.等人(2001)am.j.pathol.158,1029-1038)。
6、除了淀粉样蛋白的病因病理学得到充分确定的病症外，在其它综合征中也鉴定了具有淀粉样蛋白的结构和着色性质的纤维状沉积物，尽管它们与疾病状态的相关性尚未确定。例如，在2型糖尿病中，胰岛淀粉样蛋白前体蛋白(iapp)在朗格汉斯胰岛中以淀粉样蛋白的形式沉积(jaikaran,e.t.等人(2001)biochim.biophys.acta1537,179-203)。iapp的聚集导致对胰腺细胞有毒的寡聚体结构(lin,c.y.等人(2007)diabetes 56,1324-1332)。因此，提出在1型糖尿病患者中iapp淀粉样蛋白的形成促成β细胞破坏并导致向胰岛素依赖性的转变(jaikaran,e.t.等人(2001)biochim.biophys.acta1537,179-203)。在另一个实例中，已在超过一半的颈动脉粥样硬化患者中鉴定了含有由载脂蛋白a-i组成的淀粉样蛋白原纤维的斑块(westermark,p.等人(1995)am.j.pathol.147,1186-1192；mucchiano,g.i.等人(2001)j.pathol.193,270-275)。这些原纤维的沉积在老年患者中更为常见，但apoa-i无疑存在于斑块发展的早期(vollmer,e.等人(1991)virchows arch.a.pathol.anat.histopathol.419,79-88)。本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含：
2.如权利要求1所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述轻链包含轻链恒定区，并且所述重链包含重链恒定区。
3.如权利要求1或2所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述淀粉样蛋白反应性肽和所述抗体在所述轻链的所述C末端连接。
4.如权利要求1或2所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述间隔区选自由SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:86组成的组。
5.如权利要求1-4中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述淀粉样蛋白反应性肽包含与如SEQ ID NO:1-13所示的氨基酸序列中的任一个具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的氨基酸序列。
6.如权利要求1-5中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述抗体-肽融合蛋白包含两条重链和两条轻链，并且其中每条轻链在所述C末端与所述淀粉样蛋白反应性肽连接。
7.如权利要求1-6中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述抗体是嵌合抗体或人源化抗体。
8.如权利要求1-7中
9.如权利要求1-8中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中
10.如权利要求1-8中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，
11.如权利要求1-8中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中：
12.如权利要求1-11中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述VL包含SEQ ID NO:36中所示的氨基酸序列，并且所述VH包含SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列。
13.如权利要求1-12中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述抗体是全长抗体。
14.如权利要求13所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述Fc区属于IgG1同种型。
15.一种抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含：
16.一种抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含：
17.一种抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含：
18.如权利要求1-17中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述抗体-肽融合蛋白对淀粉样蛋白底物表现出小于1.5nM的EC50。
19.如权利要求1-18中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述抗体-肽融合蛋白缀合至可检测标记，其中所述可检测标记包括荧光标记或放射性标记。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述放射性标记是I-123、I-124、F-18、ZR-89或Tc-99m。
21.如权利要求1-20中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述抗体-肽融合蛋白表现出一种或多种体内特征，所述体内特征选自与参考IgG抗体相比改善的生物分布、泛淀粉样蛋白反应性和增强的吞噬作用。
22.如权利要求1-21中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述抗体-肽融合蛋白结合至rVλ6Wil、Aβ、Aβ(1-40)、IAAP、ALκ4、Alλ1、ATTR、α-突触核蛋白或Tau 441原纤维。
23.一种组合物，所述组合物包含
24.如权利要求23所述的组合物，其中所述完整抗体-肽融合蛋白包含如权利要求1-22中任一项所述的抗体-肽融合蛋白。
25.如权利要求23所述的组合物，其中所述组合物包含不超过10％的裂解产物，其中所述裂解产物包含与SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列相比缺乏所述N末端或所述C末端的一个或多个氨基酸残基的重链或与SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列相比缺乏所述N末端或所述C末端的一个或多个氨基酸残基的轻链。
26.如权利要求23-25中任一项所述的组合物，其中抗体-肽融合蛋白对一种或多种淀粉样蛋白底物表现出EC50结合亲和力，其中所述EC50结合亲和力小于1.5nM。
27.如权利要求23-26中任一项所述的组合物，所述组合物还包含药学上可接受的载体。
28.一种多核苷酸，所述多核苷酸编码如权利要求1-22中任一项所述的抗体-肽融合蛋白。
29.一种载体，所述载体包含如权利要求28所述的多核苷酸。
30.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如权利要求29所述的载体。
31.如权利要求30所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是哺乳动物细胞，任选地是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
32.一种产生抗体-肽融合蛋白的方法，所述方法包括
33.如权利要求32所述的方法，所述方法还包括将步骤b)中回收的抗体-肽融合物施...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含：
2.如权利要求1所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述轻链包含轻链恒定区，并且所述重链包含重链恒定区。
3.如权利要求1或2所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述淀粉样蛋白反应性肽和所述抗体在所述轻链的所述c末端连接。
4.如权利要求1或2所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述间隔区选自由seq id no:83和seq id no:86组成的组。
5.如权利要求1-4中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述淀粉样蛋白反应性肽包含与如seq id no:1-13所示的氨基酸序列中的任一个具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的氨基酸序列。
6.如权利要求1-5中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述抗体-肽融合蛋白包含两条重链和两条轻链，并且其中每条轻链在所述c末端与所述淀粉样蛋白反应性肽连接。
7.如权利要求1-6中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述抗体是嵌合抗体或人源化抗体。
8.如权利要求1-7中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述抗体结合至人淀粉样蛋白原纤维。
9.如权利要求1-8中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中
10.如权利要求1-8中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，
11.如权利要求1-8中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中：
12.如权利要求1-11中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述vl包含seq id no:36中所示的氨基酸序列，并且所述vh包含seq id no:55中所示的氨基酸序列。
13.如权利要求1-12中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述抗体是全长抗体。
14.如权利要求13所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述fc区属于igg1同种型。
15.一种抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含：
16.一种抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含：
17.一种抗体-肽融合蛋白，所述抗体-肽融合蛋白包含：
18.如权利要求1-17中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述抗体-肽融合蛋白对淀粉样蛋白底物表现出小于1.5nm的ec50。
19.如权利要求1-18中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述抗体-肽融合蛋白缀合至可检测标记，其中所述可检测标记包括荧光标记或放射性标记。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述放射性标记是i-123、i-124、f-18、zr-89或tc-99m。
21.如权利要求1-20中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述抗体-肽融合蛋白表现出一种或多种体内特征，所述体内特征选自与参考igg抗体相比改善的生物分布、泛淀粉样蛋白反应性和增强的吞噬作用。
22.如权利要求1-21中任一项所述的抗体-肽融合蛋白，其中所述抗体-肽融合蛋白结合至rvλ6wil、aβ、aβ(1-40)、iaap、alκ4、alλ1、attr、α-突触核蛋白或tau 441原纤维。
23.一种组合物，所述组合物包含
24.如权利要求23所述的组合物，其中所述完整抗体-肽融合蛋白包含如权利要求1-22中任一项所述的抗体-肽融合蛋白。
25.如权利要求23所述的组合物，其中所述组合物包含不超过10％的裂解产物，其中所述裂解产物包含与seq id no:89所示的氨基酸序列相比缺乏所述n末端或所述c末端的一个或多个氨基酸残基的重链或与seq id no:91中所示的氨基酸序列相比缺乏所述n末端或所述c末端的一个或多个氨基酸残基的轻链。
26.如权利要求23-25中任一项所述的组合物，其中抗体-肽融合蛋白对一种或多种淀粉样蛋白底物表现出ec50结合亲和力，其中所述ec50结合亲和力小于1.5nm。
27.如权利要求23-26中任一项所述的组合物，所述组合物还包含药学上可接受的载体。
28.一种多核苷酸，所述多核苷酸编码如权利要求1-22中任一项所述的抗体-肽融合蛋白。
29.一种载体，所述载体包含如权利要求28所述的多核苷酸。
30.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·S·沃尔，J·S·福斯特，S·格思里，J·庞斯，M·L·克莱因，
申请(专利权)人：田纳西大学研究基金会，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。