一种高纯度的外周血来源工具B淋巴细胞培养体系及方法技术

本发明专利技术公开了一种高纯度的外周血来源工具B淋巴细胞培养体系及方法。本发明专利技术培养体系包括hBAFF‑hCD40L 3T3培养体系和B细胞培养基；所述hBAFF‑hCD40L 3T3培养体系的制备方法包括：使用hBAFF‑hCD40L‑eGFP质粒转染3T3细胞后，使用嘌呤霉素进行筛选培养，即得；所述B细胞培养基的配制原料包括：IMDM培养基、人血清替代物、hIL‑2、hIL‑4、hIL‑21等。该培养体系具有扩增快、活性好、稳定增殖不分化等优点，在良好保留B细胞定向分化潜能的前提下，能够提高工程化B细胞制备稳定性，从而有助于实现工具B淋巴细胞的产量化制备，因此，本发明专利技术的培养体系及方法具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种高纯度的外周血来源工具b淋巴细胞培养体系及方法，属于生物。

技术介绍

1、人b淋巴细胞(human b lymphocytes)简称b细胞，是来源于骨髓的多能干细胞。b淋巴细胞的祖细胞存在于胎肝(胚胎小鼠14天或顺产儿8-9周)的造血细胞岛(island ofhematopoietic cells)中，此后b淋巴细胞的产生和分化场所逐渐被骨髓所代替。成熟的b细胞主要定居于淋巴结皮质浅层的淋巴小结和脾脏的红髓和白髓的淋巴小结内。b细胞在抗原刺激下可分化为浆细胞，浆细胞可合成和分泌抗体(免疫球蛋白)，主要执行机体的体液免疫(humoralimmunity)。此外，b细胞作为抗原提呈细胞的作用也逐渐被人们所认识：①在抗原浓度非常低的情况下，b细胞是最有效的抗原提呈细胞；②在再次免疫应答中，b细胞是最重要的抗原提呈细胞。

2、随着对b细胞认识的不断提高，在科研或医药研发中对工程化b细胞的需求日趋旺盛。目前工程化b细胞来源主要有骨髓和外周血。骨髓取血难度巨大，因此外周血提取的单个核细胞(peripheral blood mononucl本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于培养高纯度外周血来源工具B淋巴细胞的培养体系，其特征在于，包括hBAFF-hCD40L 3T3培养体系和B细胞培养基；

2.如权利要求1所述的培养体系，其特征在于，还包括：EBV病毒或含有EBV病毒的培养液。

3.如权利要求2所述的培养体系，其特征在于，所述EBV病毒为：从B95-8的细胞培养上清中提取所得的EBV。

4.权利要求1～3中任意一项所述的培养体系在培养高纯度外周血来源工具B淋巴细胞中的应用。

5.一种高纯度外周血来源工具B淋巴细胞的培养方法，其特征在于，包括：从外周血新提取的或复苏冻存的PBMC，洗涤后进行细胞活性...

【技术特征摘要】

1.一种用于培养高纯度外周血来源工具b淋巴细胞的培养体系，其特征在于，包括hbaff-hcd40l 3t3培养体系和b细胞培养基；

2.如权利要求1所述的培养体系，其特征在于，还包括：ebv病毒或含有ebv病毒的培养液。

3.如权利要求2所述的培养体系，其特征在于，所述ebv病毒为：从b95-8的细胞培养上清中提取所得的ebv。

4.权利要求1～3中任意一项所述的培养体系在培养高纯度外周血来源工具b淋巴细胞中的应用。

5.一种高纯度外周血来源工具b淋巴细胞的培养方法，其特征在于，包括：从外周血新提取的或复苏冻存的pbmc，洗涤后进行细胞活性染色和细胞计数，再采用b细胞培养基重悬，转移到hbaff-hcd40l 3t3培养体系中进行培养，再传代扩增，离心后收集细胞沉淀，即得b淋巴细胞；所述b细胞培养基为权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：高强，赵海潮，张天成，胡顺杰，董良庆，张舒，林友培，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：