本发明专利技术公开了一种白术多糖的制备方法与应用。该白术多糖的制备方法，包括下述步骤：１）将白术用水浸泡，然后煎煮，收集滤液，浓缩得到白术浸提液；２）加入乙醇，置于４℃静置，离心收集沉淀，将沉淀溶解，然后在透析去除去乙醇、小分子糖、蛋白质和盐；干燥，得到白术粗多糖；３）将白术粗多糖溶解，然后添加２倍体积的Ｓａｖｅｇ液，混合摇匀，离心收集上清液；然后在水中透析除去除去氯仿和正丁醇，干燥，得到不含蛋白质的白术多糖。实验证明，该白术多糖可在体外促进婴儿、青春、动物双歧杆菌和植物乳杆菌等益生菌的增殖。可以作为一种益生元生产，具有调节肠道菌群平衡的作用，可以作为新型功能性益生元开发。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种白术多糖的制备方法与其在调节肠道菌群平衡中的应用。
技术介绍
人体消化道内经常有一层微生物或微生物层存在，它们对宿主不但无害，而且 是有益和必需的，这一微生物层即称为正常微生物群(normal microbiota)或正常菌群 (normal bacteria flora)。这些微生物群(数百亿，占人体重量的1/50-1/60)在人体肠道 内进行活跃的生长代谢活动，有着极为重要的生理作用。与人体消化、吸收、免疫、抗肿瘤、 抗衰老、抵抗外来菌群侵袭等方面密切相关。众多研究结果表明，年龄、人种、膳食结构、生 活习惯、环境、疾病、抗生素治疗等会影响人肠道微生态系统及其群落结构。双歧杆菌和乳 杆菌是两种最重要的肠道益生菌，其数量和组成对维持健康肠道环境和提高免疫系统功能 起着关键作用。双歧杆菌能维持宿主肠道的微生态平衡，提高人体对乳糖的耐受性；具有抑制肠 道病原菌生长，改善蛋白质代谢并能合成多种维生素，促进机体免疫机能等。双歧杆菌在时 空、种类和数量上产生相应的动态变化，随着年龄增长而减少，从而直接影响人体的健康。 近年来，国内外出现了研究开发双歧杆菌产品的热潮，目前主要的产品有酸乳制品、胶囊 等，但该类活菌制剂保存有效性较差及活菌摄入机体后受到胃酸影响的条件限制，使向机 体补充双歧杆菌的效果降低。因而，向体内补充双歧生长因子，采用促进双歧杆菌增殖的物 质来补充体内有益菌群将是一条更易被接受的途径。在双歧生长因子中，低聚糖类研究最 多，如果糖低聚糖、大豆低聚糖、异麦芽寡糖等都具有促进双歧杆菌的增殖作用。经查证，目前消费市场上的益生元产品主要有英吉利益生元铁锌钙葡萄糖、多美 滋婴幼儿奶粉、贝因美牛初乳益生元奶粉、多维益生元豆浆粉、亨氏清儿润、雀巢力多精等 等，这些产品在治疗肠道菌群失调引起的腹泻、慢性腹泻、抗生素治疗无效的腹泻及便秘的 等方面发挥了很大的作用，同时也是某些临床疾病的良好的辅助药物。它们大多为添加低 聚果糖、低聚葡萄糖、低聚木糖、褐藻胶低聚糖、菊糖等各类功能性低聚糖的产品，以乳制品 居多。通过对国内外专利文献、期刊杂志及其它公开发表的文献(如互联网)进行检索， 多糖研究主要集中在免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗衰老等，并未有多糖类化合物作为益生 元开发利用。白 $ (Rhizoma Atractylodis Macrocephalae)力胃禾斗(Compositae)才直·白 * Atractylodes macrocephala Koidz的干燥根茎。白术为多年生草本，栽培历史悠久，主产 中国浙江省东阳、磐安一带，是著名的道地中药材“浙八味”之一，分布于浙江、江西、湖南、 湖北、陕西，亦多栽培。白术多糖，也仅限于在免疫调节及抗肿瘤、降血脂上有良好作用，没 有对益生菌和肠道菌群作用的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种白术多糖的制备方法与其在调节肠道菌群平衡中的应用。本专利技术提供的白术多糖的制备方法，包括下述步骤1)将白术用水浸泡，然后煎煮，收集滤液，浓缩得到白术浸提液；2)在步骤1)获得的白术浸提液中加入乙醇或乙醇溶液，调节乙醇最终体积百分 浓度为70% -75% (如71. 25% )，置于4°C静置24小时，离心收集沉淀，将沉淀用水溶解， 然后在水中透析去除去乙醇、小分子糖、蛋白质和盐；浓缩透析液，真空冷冻干燥，得到白术 粗多糖；3)将步骤2)获得的白术粗多糖用水溶解，添加2倍体积的Saveg液，混合摇勻， 离心收集上清液，重复此步骤，直到上清液经紫外测定在260、280nm波长处无蛋白质和核 酸的吸收峰，此上清液为脱蛋白后的糖液；然后在水中透析除去氯仿和正丁醇，浓缩透析 液，真空冷冻干燥，得到不含蛋白质的白术多糖；所述Saveg液为氯仿和正丁醇按体积比为 41混合后的混合液；所述方法中还包括将步骤3)获得的不含蛋白质的白术多糖用水溶解，进行 DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子柱层析纯化，用50mM Tris-HCl收集含多糖的洗脱液； 将洗脱液置于水中透析去除Tris-HCl组分浓缩后冷冻干燥，得到白术多糖。为了加快溶解的速度，所述溶解用水的温度为40_80°C，如60°C。所述步骤2)和步骤3)中，所述透析的截留分子量为5000Da以下，优选为3500Da。所述步骤2)和步骤3)中，所述透析的时间为24-72小时，优选为48小时。所述步骤1)中，所述浸泡的时间为12-36小时，优选为24小时；所述浸泡用蒸馏 水为10ml/g白术；所述煎煮为将浸泡后的白术用其浸泡液直接煎煮30分钟，过滤收集滤 液，将滤渣在用于浸泡液相同体积的水煎煮30分钟，收集滤液，合并两次收集获得的滤液。所述方法中，所用的水均为蒸馏水或去离子水。比如，上述步骤1)中的浸泡白术 用水、步骤2)中溶解沉淀用水、步骤3)中的溶解白术粗多糖用水均可以为蒸馏水，上述方 法中的透析用水，DEAE-Si^pharose Fast Flow阴离子柱层析纯化前溶解白术多糖用水可以 为去离子水。上述方法制备的白术多糖即本专利技术所要保护的白术多糖。本专利技术还提供白术多糖在促进肠道有益菌的增殖或者调节肠道菌群的平衡中的 应用。所述肠道有益菌为婴儿双歧杆菌、青春双歧杆菌、动物双歧杆菌或植物乳杆菌。 所述肠道有益菌优选为婴儿双歧杆菌CICC6069、青春双歧杆菌CICC6070、两歧双歧杆菌 1. 1852、动物双歧杆菌1. 2268或植物乳杆菌1. 124。白术多糖可在体外促进肠道有益菌的 增殖，并在一定程度上可以调节肠道菌群的平衡。本专利技术的白术多糖的提取方法，经醇沉淀、Saveg法除蛋白、透析、阴离子柱层析， 提取的白术多糖纯度极高，纯度达色谱纯，分子量为5527Da，主要由阿拉伯糖，半乳糖，葡萄 糖和甘露糖组成。我们采用的方法提取的白术多糖的鉴定方法和仪器均属于最新的科研成果，检测 灵敏准确，可信度高。多糖分子量测定主要采用高效液相色谱及凝胶渗透色谱，本方法利用 激光检测器，灵敏度高，且不需标曲。单糖组成大都采用液相色谱或气相色谱，采用的检测4器为脉冲安培检测，不需样品柱前或柱后衍生，分辨率高，获得的结果更可靠。本专利技术首次通过实验验证了白术多糖对肠道有益菌的增殖具有促进作用，实验证 明，该白术多糖可在体外促进婴儿、青春、动物双歧杆菌和植物乳杆菌等益生菌的增殖。可 以作为一种益生元生产利用，具有调节肠道菌群平衡的作用，可以作为新型功能性益生元 开发。我们将白术多糖对微生态方面进行研究，弥补了这一方面的空白，并有希望添加至产 品中，开发新型功能性益生元产品。附图说明图1为本专利技术方法制得白术粗多糖的样品照片。图2为本专利技术方法制得白术精多糖的样品照片。图3为实施例1制得白术精多糖的S印harose CL-6B凝胶层析洗脱曲线图4为实施例1制得白术精多糖的紫外扫描5不同添加量白术精多糖对双歧杆菌生长的影响图6不同添加量白术多糖(AMP)对乳杆菌生长的影响图7白术多糖(AMP)的FT-IR谱8中A为单糖标品(1. 0 μ g/mL)HPAEC-PAD色谱图；B为实施例1制得白术精多 糖的HPAEC-PAD色谱图具体实施例方式下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。实施例1、白术多糖的提取方本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种白术多糖的制备方法，包括下述步骤： １）将白术用水浸泡，然后煎煮，收集滤液，浓缩得到白术浸提液； ２）在步骤１）获得的白术浸提液中加入乙醇或乙醇溶液，至乙醇终体积百分比浓度为７０％－７５％，置于４℃静置２４小时，离心收集沉淀，将沉淀用水溶解，然后在水中透析去除乙醇、小分子糖、蛋白质和盐；浓缩透析液，真空冷冻干燥，得到白术粗多糖； ３）将步骤２）获得的白术粗多糖用水溶解，然后添加２倍体积的Ｓａｖｅｇ液，混合摇匀，离心收集上清液，重复此步骤，直到上清液经紫外测定在２６０和２８０ｎｍ波长处无蛋白质和核酸的吸收峰，此上清液为脱蛋白后的糖液；然后在水中透析除去氯仿和正丁醇，浓缩透析液，真空冷冻干燥，得到不含蛋白质的白术多糖；所述Ｓａｖｅｇ液为氯仿和正丁醇按体积比为４∶１混合后的混合液。
【技术特征摘要】
一种白术多糖的制备方法，包括下述步骤1)将白术用水浸泡，然后煎煮，收集滤液，浓缩得到白术浸提液；2)在步骤1)获得的白术浸提液中加入乙醇或乙醇溶液，至乙醇终体积百分比浓度为70％ 75％，置于4℃静置24小时，离心收集沉淀，将沉淀用水溶解，然后在水中透析去除乙醇、小分子糖、蛋白质和盐；浓缩透析液，真空冷冻干燥，得到白术粗多糖；3)将步骤2)获得的白术粗多糖用水溶解，然后添加2倍体积的Saveg液，混合摇匀，离心收集上清液，重复此步骤，直到上清液经紫外测定在260和280nm波长处无蛋白质和核酸的吸收峰，此上清液为脱蛋白后的糖液；然后在水中透析除去氯仿和正丁醇，浓缩透析液，真空冷冻干燥，得到不含蛋白质的白术多糖；所述Saveg液为氯仿和正丁醇按体积比为4∶1混合后的混合液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中还包括将步骤3)获得的不 含蛋白质的白术多糖用水溶解，进行DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子柱层析纯化，用 50mM Tris-HCl洗脱，收集含多糖的洗脱液；将含多糖的洗脱液置于去离子水中透析去除 Tris-HCl组分浓缩后冷冻干燥，得到白术多糖。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述步骤2)和步骤3)中，所述透...
【专利技术属性】
技术研发人员：李平兰，刘丽莎，王锐，尚楠，王洋，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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