【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学，尤其涉及鸭甲肝病毒1型感染诱导细胞焦亡的分子机制的应用。
技术介绍
1、由小rna病毒科禽肝病毒属的鸭甲肝病毒(duck hepatitis a virus,dhav)引起鸭病毒性肝炎(duck viral hepatitis,dvh)主要对1～3周龄雏鸭有严重致病性，致死率高达90％，其中1型鸭甲肝病毒(dhav-1)和3型鸭甲肝病毒(dhav-3)是我国的主要流行血清型。dhav-1感染引起的“炎症因子风暴”是雏鸭肝脏损伤、急性死亡的关键原因。细胞焦亡(pyroptosis)是一种炎性细胞程序性死亡方式(programmed cell death,pcd)，与其它细胞死亡方式的主要区别在于促炎性因子的大量释放以及细胞膜孔洞的形成。在细胞受到细菌、病毒等病原体刺激时，模式识别受体(pattern recognition receptor,prr)识别病原相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,pamps)，通过接头蛋白与pro-caspase-1结合组装成炎症小体(inflammasome)，活化的caspase-1切割自抑制的gasdermin蛋白，释放其n端结构域的膜打孔活性，诱导细胞焦亡，并引起细胞因子il-1β和il-18的成熟及分泌。在dhav-1感染中，细胞焦亡的发生会扩大炎症反应诱发机体组织损伤，这是导致宿主死亡的直接原因。不同于哺乳动物和人，鸭基因组仅编码gasdermin a(gsdma)和gasdermin e(gsdme)，提示鸭
2、细胞焦亡在小rna病毒感染机制中发挥重要的作用，主要体现在两个方面：一方面通过诱导细胞焦亡使胞内病毒释放出来，有助于吞噬和清除病毒；另一方面可以促进免疫系统的反应，引起炎症反应，从而加强对病毒的抵抗，然而过强的“炎症因子风暴”也会造成宿主组织损伤。目前，关于dhav-1与宿主相互作用的机制研究不深，而病原感染诱导禽源细胞焦亡的研究甚少，dhav-1诱导细胞焦亡的分子机制仍然未知。
技术实现思路
1、针对上述存在的问题，本专利技术旨在提供鸭甲肝病毒1型感染诱导细胞焦亡的分子机制的应用，通过对dhav-1诱导def细胞焦亡的信号通路进行研究，明确dhav-1在感染def后，通过激活caspase-3引发gasdermin e蛋白切割进而诱导细胞焦亡的分子机制，为鸭病毒性肝炎的防治提供新思路。
2、为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案如下：
3、鸭甲肝病毒1型感染诱导细胞焦亡的分子机制的应用，具体为鸭甲肝病毒1型在感染鸭胚成纤维细胞后，通过激活caspase-3引发gasdermin e蛋白的切割进而诱导细胞焦亡。
4、更加具体的，鸭甲肝病毒1型的2a2蛋白上调caspase-3调控的荧光素酶活性，进而引起内源gasdermin e蛋白的切割。
5、更加具体的，鸭甲肝病毒1型2a2蛋白激活caspase-3的作用位点位于2a2蛋白的1-130位氨基酸区域。
6、更加具体的，鸭甲肝病毒1型的2a2蛋白与def中的线粒体抗病毒信号蛋白相互作用，从而激活caspase-3。
7、更加具体的，鸭甲肝病毒1型的2a2蛋白与def中的线粒体抗病毒信号蛋白相互作用，促进了mavs与nlrp3的相互作用，进而激活caspase-3。
8、进一步的，活化的caspase-3还促进炎性细胞因子il-1β和il-18的分泌，引发鸭炎症反应。
9、进一步的，本专利技术还包括如前所述的应用的研究方法，包括以下步骤，
10、s1：用鸭甲肝病毒1型感染def细胞进行细胞焦亡的检测；
11、s2：筛选鸭甲肝病毒1型病毒中参与调控细胞焦亡的特定病毒蛋白；
12、s3：以步骤s2中筛选出来的病毒蛋白为诱饵蛋白，筛选与之相互作用的宿主因子；
13、s4：对病毒蛋白与宿主蛋白mavs相互作用介导鸭甲肝病毒1型诱导细胞焦亡的信号通路进行研究。
14、进一步的，本专利技术还包括caspase-3抑制剂在制备用于治疗鸭甲肝病毒1型引发鸭病毒性肝炎的药物中的应用。
15、进一步的，本专利技术还包括caspase-3抑制剂在制备用于诊断或者治疗鸭甲肝病毒1型引发鸭病毒性肝炎的试剂盒中的应用。
16、进一步的，本专利技术还包括鸭甲肝病毒1型2a2蛋白在制备鸭甲肝病毒1型引发鸭病毒性肝炎疫苗中的应用。
17、本专利技术的有益效果是：
18、本专利技术通过一系列研究发现，dhav-1感染def细胞引发了细胞焦亡，且通过其2a2蛋白与鸭mavs蛋白的互作，促进了鸭mavs蛋白和nlrp3蛋白的相互作用，进而激活caspase-3，活化的caspase-3一方面切割gsdme启动细胞焦亡，另一方面促进炎性细胞因子il-1β和il-18的分泌，引发炎症反应。本研究的开展能够丰富dhav-1感染引起免疫损伤的理论基础，也可以为dvh的防治提供新思路和靶点，对禽类细胞焦亡的研究提供参考。
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1.鸭甲肝病毒1型感染诱导细胞焦亡的分子机制的应用，其特征在于：鸭甲肝病毒1型在感染鸭胚成纤维细胞后，通过激活caspase-3引发Gasdermin E蛋白的切割进而诱导细胞焦亡。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：鸭甲肝病毒1型的2A2蛋白上调caspase-3调控的荧光素酶活性，进而引起内源Gasdermin E蛋白的切割。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：鸭甲肝病毒1型2A2蛋白激活caspase-3的作用位点位于2A2蛋白的1-130位氨基酸区域。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：鸭甲肝病毒1型的2A2蛋白与DEF中的线粒体抗病毒信号蛋白相互作用，从而激活caspase-3。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：鸭甲肝病毒1型的2A2蛋白与DEF中的线粒体抗病毒信号蛋白相互作用，促进了MAVS与NLRP3的相互作用，进而激活caspase-3。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：活化的caspase-3还促进炎性细胞因子IL-1β和IL-18的分泌，引发鸭的炎症反应。<...
【技术特征摘要】
1.鸭甲肝病毒1型感染诱导细胞焦亡的分子机制的应用，其特征在于：鸭甲肝病毒1型在感染鸭胚成纤维细胞后，通过激活caspase-3引发gasdermin e蛋白的切割进而诱导细胞焦亡。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：鸭甲肝病毒1型的2a2蛋白上调caspase-3调控的荧光素酶活性，进而引起内源gasdermin e蛋白的切割。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：鸭甲肝病毒1型2a2蛋白激活caspase-3的作用位点位于2a2蛋白的1-130位氨基酸区域。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：鸭甲肝病毒1型的2a2蛋白与def中的线粒体抗病毒信号蛋白相互作用，从而激活caspase-3。
5.根据权利要求4所述的...
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