一种同时分析烟用香原料山楂酊中三种低聚原花青素的方法，包括下述步骤：１、将山楂酊样品用甲醇稀释、过滤；２、以甲酸为流动相添加剂，采用液相色谱－二极管阵列检测器分析，经梯度洗脱，实现烟用香原料中三种低聚原花青素（－）－Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ，ＰｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓＢ２和ＰｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓＣ１的同时分离测定。本发明专利技术的方法与现有技术相比：实现了烟用香原料山楂酊中三种低聚原花青素（－）－Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ，ＰｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓＢ２和ＰｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓＣ１的同时测定；通过采用甲酸作为流动相添加剂，避免了色谱峰的托尾，缩短了样品的分析时间，并且实验的重复性好、回收率高，适合卷烟企业大批量烟用样品的分析。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于化学分析检测
，具体涉及一种同时分离分析烟用香原料山楂 酊中三种低聚原花青素(_)-Epicatechin, Procyanidins B2 和 Procyanidins Cl 的新方法。
技术介绍
山楂又名“红果”、“山里红”，蔷薇科，落叶乔木。果实味酸稍甜，富含维生素C、多种 有机酸和黄酮等。原花青素(procyanidins )属于缩合单宁，主要由儿茶素和表儿茶素聚 合而成的，广泛分布于植物界，也存在于一些水果和山楂中，与人类生活和健康密切相关。 山楂酊是用乙醇浸提成熟的山楂果实，加热连续循环回流萃取，回收溶剂后获得。 对于山楂酊的化学成分(如山楂酊中的原花青素)，仍然存在着许多有待揭示的问题，其中 之一就是原花青素(_)-Epicatechin, Procyanidins B2 和 Procyanidins Cl 在山楂酊中 的含量测定。目前，有关烟用香原料山楂酊中原花青素的测定方法尚无统一标准，文献报道 的有正丁醇一盐酸法、香草醛一盐酸法、铁盐催化比色法及流动注射一抑制化学发光法等。 对于正丁醇一盐酸法、香草醛一盐酸法和铁盐催化比色法等分光光度法，由于存在其它高 聚原花青素的显色干扰，严重时可对分析结果产生较大的正误差；对于流动注射-抑制化 学发光法，由于其不具有分离能力，只能测定单个的低聚原花青素。高效液相色谱法具有良 好的精密度和准确度，在植物活性成分分析方面应用广泛，被许多国家政府列为药品、食品 等领域的规定检测手段。然而由于山楂酊中的低聚原花青素成分存在多种聚合方式和聚合 度，使其各成分的分离和测定要复杂得多。因此，对于烟用香原料山楂酊中三种低聚原花青 素(-)-Epicatechin, Procyanidins B2 和 Procyanidins Cl 的准确分析，需要建立一种分 离测定新方法来解决这一问题。
技术实现思路
本专利技术的目的正是针对以往分析山楂中低聚原花青素时存在的问题而提供的一 种解决方法，即以甲酸作为流动相添加剂，通过梯度洗脱，实现山楂酊中三种低聚原花青素 (-)-Epicatechin, Procyanidins B2 禾口 Procyanidins Cl 的同时分离测定。本专利技术的目的是通过以下具体技术方案来实现的本专利技术的如下(1)样品制备取山楂酊剂，用移液管准确移取山楂酊1.0mL，用甲醇稀释5倍后，经 0. 45 μ m有机相滤膜过滤后使用；(2)制备好的样品用液相色谱-二极管阵列检测器分析，分析条件如下 色谱柱waters symmetry C18 柱(4. 6mmX250mmX5 μ m)流动相A 甲醇含0. 5 mL/L甲酸，流动相B 30%乙腈含0. 5 mL/L甲酸 洗脱梯度 时间(min) 0 10 30 40 45 流动相 A (V/V) 100% 100% 60% 45% 100%进样体积=IOyL 流速0. 8mL/min 柱温30°C 检测波长280nm。 本方法与原有的山楂酊中三种低聚原花青素(-)-Epicatechin，Procyanidins B2和Procyanidins Cl的分析方法相比，实现了烟用香原料山楂酊中三种低聚原花青素 (-)-Epicatechin, Procyanidins B2 和 Procyanidins Cl 的同时测定；本方法通过采用 甲酸作为流动相添加剂，避免了色谱峰的托尾，缩短了样品的分析时间，并且实验的重复性 好、回收率高，适合卷烟企业大批量烟用样品的分析。附图说明图1三种低聚原花青素标样色谱图。图中1, Procyanidins B2,2> (-) -Epicatechin, 3> Procyanidins Cl。图2山楂酊中三种低聚原花青素色谱图。图中1> Procyanidins B2, 2> (-) -Epicatechin, 3> Procyanidins Cl。具体实施例方式下面通过实施实例对本专利技术进行进一步说明 实例1精确称取一定量的 Procyanidins B2、(-)-Epicatechin 和 Procyanidins Cl 分别 置于不同的IOmL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇勻，其浓度分别为0. 70mg/mL、 1.16mg/mL 禾口 2. 20mg/mLo液相色谱分析条件色谱柱waters Symmetry C18 柱(4. 6mmX 250mmX 5 μ m) 流速0. 8mL/min 柱温30°C 检测波长280 nm 进样量10yL流动相A 10%甲醇含0. 5 mL/L甲酸，流动相B 30%乙腈含0. 5 mL/L甲酸 洗脱梯度 时间(min) O 10 30 40 45流动相 A (V/V) 100% 100% 60% 45% 100% 此色谱条件下，三者能够得到很好分离的色谱图如图1所示。1. Procyanidins B2, 2. (-) -Epicatechin, 3. Procyanidins Cl 实例2取山楂酊样品lmL，用甲醇稀释5倍后经0. 45 μ m有机相滤膜过滤后，进样分析。液相色谱分析条件色谱柱waters Symmetry C18 柱(4. 6mmX 250mmX 5 μ m)流速0. 8mL/min 柱温30°C 检测波长280 nm 进样量10yL 流动相A 10%甲醇含0. 5 mL/L甲酸，流动相B 30%乙腈含0. 5 mL/L甲酸 洗脱梯度 时间(min) 0 10 30 40 45流动相 A (V/V) 100% 100% 60% 45% 100% 此色谱条件下，山楂酊样品的色谱图如图2所示。 1. Procyanidins B2, 2. (-) -Epicatechinj 3. Procyanidins Cl对同一山楂酊样品进行平行5次测定，结果表明，方法的重现性和稳定性良好，山楂酊 中三种低聚原花青素 Procyanidins B2, (-) -Epicatechin,和 Procyanidins Cl 含量测 定值的RSD小于5%。方法加标回收率均在93. 3-98. 9%之间，说明本方法能够较为可靠地 测定山楂酊中三种低聚原花青素Procyanidins B2, (-)-Epicatechin, Procyanidins Cl。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种同时分析烟用香原料山楂酊中三种低聚原花青素的方法，其特征在于：以甲酸作为流动相添加剂，通过梯度洗脱，实现山楂酊中三种低聚原花青素（－）－Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ， Ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ Ｂ２和Ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ Ｃ１的同时分离测定，具体步骤如下：样品制备：取山楂酊剂，用移液管准确移取山楂酊１．０ｍＬ，用甲醇稀释后，经有机相滤膜过滤后使用；制备好的样品用液相色谱－二极管阵列检测器分析，分析条件如下：色谱柱：ｗａｔｅｒｓ ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｃ１８柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ×５μｍ）流动相Ａ：１０％甲醇含０．５ ｍＬ／Ｌ甲酸，流动相Ｂ：３０％乙腈含０．５ ｍＬ／Ｌ甲酸洗脱梯度：时间（ｍｉｎ） ０ １０ ３０ ４０ ４５流动相Ａ（Ｖ／Ｖ） １００％ １００％ ６０％ ４５％ １００％进样体积：１０μＬ流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ柱温：３０℃检测波长：２８０ｎｍ。
【技术特征摘要】
一种同时分析烟用香原料山楂酊中三种低聚原花青素的方法，其特征在于以甲酸作为流动相添加剂，通过梯度洗脱，实现山楂酊中三种低聚原花青素( ) Epicatechin, Procyanidins B2和Procyanidins C1的同时分离测定，具体步骤如下样品制备取山楂酊剂，用移液管准确移取山楂酊1.0 mL，用甲醇稀释后，经有机相滤膜过滤后使用；制备好的样品用液相色谱 二极管阵列检测器分析，分析条件如下色谱柱waters symmetry C18柱(4....
【专利技术属性】
技术研发人员：刘绍锋，郭吉兆，郭军伟，胡斌，张晓兵，谢复炜，刘惠民，
申请(专利权)人：中国烟草总公司郑州烟草研究院，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]
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