【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药领域，具体涉及一种递送mrna的tlsv纳米粒及其制备方法和用途。
技术介绍
1、恶性肿瘤是导致死亡的主要重大疾病之一。目前治疗肿瘤的手段主要有手术治疗、放疗、化疗及免疫治疗等，为进一步提高肿瘤治疗的安全性及治疗效果，基因治疗被认为是一种有潜力的创新治疗手段。其中，基于mrna的基因治疗是一种新兴的治疗策略。mrna分子可在较短时间内在细胞中表达蛋白质，发挥补充、替代和编辑等作用进而抑制肿瘤生长。相较其他形式的核酸分子，mrna因其生产效率较高，递送基因较灵活，能够避免基因组插入等优势，是肿瘤基因治疗的理想形式。肿瘤免疫基因疗法通过调控机体免疫应答而发挥抗肿瘤作用，mrna由于其上述优点，在肿瘤免疫基因治疗策略中具有一定开发潜力。然而，如何提高mrna分子的递送效率以及寻找合适的抗肿瘤免疫刺激策略是基于mrna的肿瘤免疫基因治疗当前的重要研究方向。
2、肿瘤细胞作为肿瘤组织的重要组成成分，其各个结构蕴含了丰富的肿瘤相关生物学信息。其中，肿瘤细胞裂解物因富含大量的蛋白质、多糖和核酸等组分，具有较特异的免疫原性，是一种潜在的特异性肿瘤抗原混合物。但目前并没有将肿瘤细胞裂解物用于mrna分子递送方面的报道。
3、tlsv纳米粒，即dotap-mpeg-pcl聚合物包裹肿瘤细胞裂解物的纳米粒，是一种由dotap阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物两亲性mpeg-pcl双嵌段共聚物包裹肿瘤细胞裂解物制备得到的纳米粒，目前，还没有关于tlsv纳米粒递送mrna的相关研究。
技术
1、本专利技术要解决的技术问题为：现有mrna递送的纳米粒递送效率和安全性还有待提高的问题。
2、本专利技术解决上述技术问题的技术方案为：提供了一种递送mrna的tlsv纳米粒。所述递送mrna的tlsv纳米粒，由dotap阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物mpeg-pcl包裹肿瘤细胞裂解物制备得到。
3、其中，上述递送mrna的tlsv纳米粒中，所述的tlsv纳米粒的平均粒径为372.93±24.51nm，平均电位为+21.40±2.77mv。
4、其中，上述递送mrna的tlsv纳米粒中，所述的dotap重量份数为1～5份，所述两亲性mpeg-pcl双嵌段共聚物的重量份数为45～50份，所述的肿瘤细胞裂解物为12～15份。
5、其中，上述递送mrna的tlsv纳米粒中，所述的肿瘤细胞裂解物为ct26细胞或b16细胞的裂解物。优选的，所述的肿瘤细胞裂解物为ct26细胞裂解物。
6、进一步的，所述的ct26细胞裂解物中蛋白质浓度≤1.2mg/ml。ct26细胞裂解物中蛋白质浓度不能过高，高于这个浓度时，得到的tlsv纳米粒没有正电荷特性，无法递送mrna。
7、进一步的，所述的ct26细胞裂解物为全细胞裂解物，主要成分包括：蛋白质、核酸、脂质糖类等有机成分及其他无机成分。
8、本专利技术还提供了一种上述递送mrna的tlsv纳米粒的制备方法，包括以下步骤：
9、a、将ct26细胞重悬，反复冻融并粉碎，离心收集上清液，获得细胞裂解物溶液；
10、b、称取原料，mpeg-pcl共聚物45～50份、dotap 1～5份；
11、c、将mpeg-pcl共聚物45～50份、dotap 1～5份共同溶于有机相溶剂中，然后采用旋转蒸发仪，在55～60℃水浴条件下运行40～45min从而将溶剂蒸发，随后加12～15份细胞裂解物溶液水化直到完全溶解，得到tlsv纳米粒溶液。
12、其中，上述递送mrna的tlsv纳米粒的制备方法中，步骤c所述的溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、四氯甲烷、乙醇、甲醇、乙酸乙酯或环己烷中的至少一种；所述的有机相溶剂为乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、四氯甲烷、甲醇中的至少一种。
13、其中，上述递送mrna的tlsv纳米粒的制备方法中，所述的mrna为表达il-17a蛋白的mrna分子。
14、本专利技术还提供了一种上述tlsv纳米粒在递送mrna中的用途。
15、优选的，所述的mrna为il-17amrna。
16、优选的，所述tlsv纳米粒30～40份，所述il-17amrna1～5份。
17、本专利技术的有益效果为：
18、本专利技术提供了一种tlsv纳米粒，其制备方法及在递送mrna中的用途。所用的tlsv纳米粒为阳离子磷脂dotap与两亲性双嵌段共聚物mpeg-pcl包裹ct26细胞裂解物制备得到，制备方法可采用现有的薄膜旋蒸法。该纳米粒能通过静电相互作用结合mrna，可以有效地将目的基因导入细胞中，其本身具有细胞毒性低、转染率高等特征，在基于mrna的基因功能研究、基因治疗研究及临床应用中有很好的应用前景。本专利技术的tlsv纳米粒可介导il-17a基因的mrna分子，可以在体内有效抑制结肠癌肿瘤组织的生长。tlsv纳米粒是一种相对安全且高效的mrna分子非病毒基因递送载体，制备所得tlsv阳离子纳米颗粒/mrna复合物为疾病治疗提供了一种新的策略。
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1.递送mRNA的TLSV纳米粒，其特征在于：由DOTAP阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物mPEG-PCL包裹肿瘤细胞裂解物制备得到。
2.根据权利要求1所述的递送mRNA的TLSV纳米粒，其特征在于：所述TLSV纳米粒的平均粒径为372.93±24.51nm，平均电位为+21.40±2.77mV。
3.根据权利要求1所述的递送mRNA的TLSV纳米粒，其特征在于：所述DOTAP重量份数为1～5份，两亲性mPEG-PCL双嵌段共聚物的重量份数为45～50份，肿瘤细胞裂解物的重量份数为12～15份。
4.根据权利要求1所述的递送mRNA的TLSV纳米粒，其特征在于：所述的肿瘤细胞裂解物为CT26细胞或B16细胞的裂解物；优选为CT26细胞裂解物。
5.根据权利要求1所述的递送mRNA的TLSV纳米粒，其特征在于：所述的CT26细胞裂解物中蛋白质浓度≤1.2mg/mL。
6.权利要求1-5任一项所述的递送mRNA的TLSV纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的递送mRNA的TLSV纳
8.权利要求1～5任一项所述的递送mRNA的TLSV纳米粒在递送mRNA中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述的mRNA为IL-17AmRNA。
10.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述TLSV纳米粒30～40份，mRNA1～5份。
...【技术特征摘要】
1.递送mrna的tlsv纳米粒，其特征在于：由dotap阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物mpeg-pcl包裹肿瘤细胞裂解物制备得到。
2.根据权利要求1所述的递送mrna的tlsv纳米粒，其特征在于：所述tlsv纳米粒的平均粒径为372.93±24.51nm，平均电位为+21.40±2.77mv。
3.根据权利要求1所述的递送mrna的tlsv纳米粒，其特征在于：所述dotap重量份数为1～5份，两亲性mpeg-pcl双嵌段共聚物的重量份数为45～50份，肿瘤细胞裂解物的重量份数为12～15份。
4.根据权利要求1所述的递送mrna的tlsv纳米粒，其特征在于：所述的肿瘤细胞裂解物为ct26细胞或b16细胞的裂解物；优选为ct26细胞裂解物。
5.根据权利要求1所述的递送mrna的tlsv纳...
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