【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学检测领域，尤其涉及一种早期乳腺癌肝转移诊断模型及其乳腺癌肝转移循环标志物。
技术介绍
1、乳腺癌的发病率呈逐年上升趋势，是女性发病率第一，病死率第二的疾病。远处转移是绝大多数乳腺癌患者死亡的最直接原因，其中肝转移是除骨转移、肺转移外最容易发生的远处转移。与乳腺癌骨和肺转移患者相比，肝转移患者综合治疗效果更差、5年生存率更低。因此，研究乳腺癌肝转移的分子机制对其预防和治疗尤为重要。而传统的乳腺癌肝转移循环标志物用于诊断乳腺癌肝转移的敏感性和特异性不高，未能为乳腺癌肝转移早期诊断提供有效的临床价值，因此临床需要具有较高敏感性及特异性的循环生物标志物分子，以及有效的算法来构建准确的乳腺癌肝转移诊断模型。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种早期乳腺癌肝转移诊断的乳腺癌肝转移循环标志物，可以补充乳腺癌肝转移液体活检的相对空白，具有较高特异度及灵敏度。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了一种乳腺癌肝转移循环标志物，所述乳腺癌肝转移循环标志物为血浆中肿瘤细胞来源的lncrnas，包括linc01579、linc00861、host2及linc02353。
3、进一步地，各lncrnas的引物序列为：
4、linc01579的正向引物：5’-gacaaaaggaggcagtggga-3’；
5、linc01579的反向引物:5’-tctaagttccacgtcacggc-3’；
6、linc00861的正向
7、linc00861的反向引物：5’-tccaataaggcagcactggg-3’；
8、host2的正向引物：5’-ggacaggtcccttgtttcaa-3’；
9、host2的反向引物：5’-ctggtctttccttgcctctg-3’；
10、linc02353的正向引物：5’-cctatcagcgatcatgcctaa-3’；
11、linc02353的反向引物：5’-cctatcagcgatcatgcctaa-3’。
12、基于该乳腺癌肝转移循环标志物，可以构建早期乳腺癌肝转移诊断模型，所述诊断模型为：
13、logit(p)＝0.637+0.319×exp(linc01579)+0.577×exp(linc00861)+0.624×exp(host2)+0.263×exp(linc02353)； 式(1)
14、p＝1/[1+e-logit(p)] 式(2)
15、其中，exp为各lncrnas的相对表达值，若预测概率p值大于0.771，则受试者可被预测为乳腺癌肝转移患者，若p值小于0.771，则可判定为受试者未发生乳腺癌肝转移。
16、进一步地，选择β-actin为内参基因，exp为各lncrnas相对β-actin的相对表达值，β-actin的引物序列为：
17、β-actin的正向引物：5’-gatcattgctcctcctgagc-3’；
18、β-actin的反向引物：5’-actcctgcttgctgatccac-3’。
19、进一步地，通过进行qrt-pcr检测获得各lncrnas的相对表达值。
20、本专利技术还提供一种早期乳腺癌肝转移诊断系统，所述诊断系统包括步骤：
21、提供新鲜血液标本；新鲜血液标本指保存于2～6℃冰箱不超过48小时的血液标本；
22、处理新鲜血液标本，分离血浆；
23、提取血浆中的总rna，具体提取方式为trizol试剂提取法进行提取；
24、进行总rna逆转录，得到总cdna；
25、进行qrt-pcr检测，获得linc01579、linc00861、host2及linc02353的相对表达值；
26、通过上述的早期乳腺癌肝转移诊断模型判断受试者是否为乳腺癌肝转移患者。
27、进一步地，所述处理新鲜血液标本，分离血浆的步骤包括：取新鲜血液标本0.8～1.2ml，2～6℃下2500～3500rpm离心新鲜血液标本8～12min，然后10,000～14,000g高速离心8～12min，取上清液至少400μl为血浆。
28、进一步地，所述提取血浆中的总rna的步骤包括：
29、(1)取400μl血浆加入600μl trizol试剂；用振荡器震匀，静置5min；
30、(2)加入200μl氯仿，使用振荡器震荡15-30s，直至液体呈现粉红色，静置5min，离心(4℃，12000rpm，15min)；
31、(3)离心后液体呈现明显分层，将最上层水溶相转移至新的无rna酶的ep管中，加入500μl异丙醇，通过颠倒混匀，静置10min，离心(4℃，12000rpm，10min)；
32、(4)离心后ep管内出现白色沉淀，吸弃上清，保留白色沉淀，加入1ml无水乙醇，将白色沉淀弹起，离心(4℃，7500rpm，5min)，吸弃上清，放在通风橱内晾干；
33、(5)用depc溶解白色沉淀得到总rna。
34、进一步地，所述进行总rna逆转录，得到总cdna的步骤按rna逆转录试剂盒说明书进行操作,包括：
35、使用primescripttm rt-pcr kit(takara)试剂盒配备反应体系，反应体系包括：
36、
37、反应体系进行反应，反应条件：37℃下反应15min；85℃下反应5sec；4℃下反应2min，反应结束后得到cdna。
38、进一步地，所述进行qrt-pcr检测的步骤包括：
39、使用qpcr sybr green master mix配备反应体系，反应体系包括：
40、
41、反应体系进行反应，反应条件如下：
42、
43、反应结束后，获取ct值，分析得到linc01579、linc00861、host2及linc02353的相对表达值。
44、本专利技术提供了特异度及灵敏度高的乳腺癌肝转移循环标志物，补充了目前临床乳腺癌肝转移液体活检的相对空白。并构建了乳腺癌肝转移诊断模型，通过收集少量的新鲜血液标本进行检测，操作时间短，给临床医生和患者提供更准确的临床诊断，减轻患者门诊检查时间久的负担，且为由于各种原因不能进行乳腺影像学检查的患者提供了新的乳腺癌肝转移早期诊断方法。
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1.一种乳腺癌肝转移循环标志物，其特征在于，所述乳腺癌肝转移循环标志物为血浆中肿瘤细胞来源的lncRNAs，包括LINC01579、LINC00861、HOST2及LINC02353。
2.如权利要求1所述的乳腺癌肝转移循环标志物，其特征在于，各lncRNAs的引物序列为：
【技术特征摘要】
1.一种乳腺癌肝转移循环标志物，其特征在于，所述乳腺癌肝转移循环标志物为血浆中肿瘤细胞来源的lncrnas，包括linc01579、linc00...
【专利技术属性】
技术研发人员：房林，赵君勇，郑雯方，刘迪雅，
申请(专利权)人：上海市第十人民医院，
类型：发明
国别省市：
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