【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于生物医药，具体涉及一种用于抑制细胞程序性死亡-配体1基因表达的sirna、其缀合物和药物组合物及用途。
技术介绍
1、细胞程序性死亡配体1(programmed cell death 1ligand 1，pd-l1)也称为表面抗原分化簇274(cluster of differentiation 274，cd274)或b7同源体(b7 homolog 1，b7-h1)，是大小为40kda的i型跨膜蛋白，由cd274基因编码。pd-l1在t细胞、上皮细胞、内皮细胞等不同组织细胞上均有表达,并且其在包括在许多肿瘤中表达上调。
2、pd-l1是pd-1的主要配体，配体pd-l1与受体pd1的相互作用可以诱导细胞内免疫受体酪氨酸转换基序(itsm)和受体酪氨酸抑制基序(itim)磷酸化，从而抑制t细胞的活化和细胞因子的产生。在正常组织感染或炎症期间，这种相互作用对于通过维持免疫反应稳态来预防自身免疫很重要。在肿瘤微环境中，这种相互作用可以促使效应t细胞失活，从而为肿瘤细胞提供免疫逃逸。
3、此外有文章报道(sun y等人，am j physiol gastrointest liverphysiol.2020jan 1；318(1):g162-g173.)病毒调节pd-1/pd-l1途径以改善感染性。在乙型肝炎病毒(hbv)感染过程中，hbv可以通过pten/β-catenin/c-myc信号通路增加pd-l1的表达，从而抑制t细胞反应，最终促进hbv免疫逃逸。靶向该信号通路是治疗慢性乙型肝炎的潜在策
4、目前靶向pd-l1的上市或临床药物类型大多数是抗体类或小分子类，如恩沃利单抗、舒格利单抗、度伐利尤单抗、apl-502、ca-170等。此类药物在研适应症多为肿瘤领域，为全身性用药，临床上不良反应率较高，安全性较差，较少有乙型肝炎治疗领域应用，目前上市药物中仅恩沃利单抗(asc22)针对乙型肝炎适应症在美国开展临床试验，临床前研究表明在感染乙型肝炎病毒的土拨鼠模型中，asc22与恩替卡韦联用可以降低表面抗原水平(balsitis s等人，plos one.2018feb 14；13(2):e0190058.)，iia期临床数据显示单次给药0.3、1.0或2.5mg/kg asc22后剂量依赖性hbsag减少。
5、目前在核酸领域，在乙型肝炎治疗领域临床阶段仅罗氏一款针对pd-l1的寡核苷酸类(aso)ro-9191863药物，通常aso在有效性和长效性表现上稍逊于sirna药物，具有全身分布的特性，肝部特异性递送不如肝靶向分子缀合的sirna药物形式。sirna药物可以通过肝靶向分子缀合的方式，特异地将靶向pd-l1的sirna药物递送至肝脏，可以特异地下调肝部pd-l1分子的水平，降低小分子、抗体、aso药物形式的全身副作用。
6、截至目前，虽有一些靶向pd-l1的sirna的专利，但尚未有靶向pd-l1的sirna药物上市，甚至未有sirna药物处于临床研究阶段。因此，仍需持续开发能够抑制pd-l1基因表达的sirna药物。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供如下能够特异性地抑制细胞中pd-l1基因的表达的sirna及其修饰序列，包含本公开的sirna的药物组合物和sirna缀合物能够有效地将本公开的sirna递送至目标组织和/或细胞，从而在治疗或预防与pd-l1表达相关的疾病中显示出高的成药潜力。
2、为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案是：
3、本专利技术第一方面提供一种用于抑制细胞程序性死亡-配体1基因表达的sirna，其包括正义链和反义链，所述正义链包括选自seq id no.1至12所示核苷酸序列中的一种或上述序列不超过3个碱基突变的核苷酸序列，所述反义链包括选自seq id no.13至24所示核苷酸序列中的一种或上述序列不超过5个碱基突变的核苷酸序列。
4、根据某些实施方式，所述正义链包括与seq id no.1至12所示核苷酸序列中的任一条不超过2个碱基突变的核苷酸序列，不超过1个碱基突变的核苷酸序列。
5、根据某些实施方式，所述正义链的碱基突变可以在核苷酸序列的任意位置，例如第一位、第二位、第三位、第四位、第五位、第六位、第七位、第八位、第九位、第十位、第十一位、第十二位、第十三位、第十四位、第十五位、第十六位、第十七位、第十八位、第十九位中的任意一位、两位或三位。
6、根据某些实施方式，所述反义链包括与seq id no.13至24所示核苷酸序列中的任一条不超过5个碱基突变的核苷酸序列，不超过4个碱基突变的核苷酸序列，不超过3个碱基突变的核苷酸序列，不超过2个碱基突变的核苷酸序列，不超过1个碱基突变的核苷酸序列。
7、根据某些实施方式，所述反义链的碱基突变可以在核苷酸序列的任意位置，例如第一位、第二位、第三位、第四位、第五位、第六位、第七位、第八位、第九位、第十位、第十一位、第十二位、第十三位、第十四位、第十五位、第十六位、第十七位、第十八位、第十九位、第二十位、第二十一位中的任意一位、两位、三位、四位或五位。
8、根据某些实施方式，按照5’到3’的方向，所述正义链的碱基突变在其核苷酸序列的3’末端，所述反义链的碱基突变在其核苷酸序列的5’末端、第2～8位、3’端最后两位中的任意一位或多位。
9、根据某些实施方式，所示碱基突变包括碱基的替换、插入或者缺失。
10、在某些实施方案中，所述修饰的核苷酸为2’-甲氧基修饰的核苷酸、2’-氟代修饰的核苷酸、2’-o-ch2-ch2-o-ch3修饰的核苷酸、2’-o-ch2-ch＝ch2修饰的核苷酸、2’-ch2-ch2-ch＝ch2修饰的核苷酸、2’-脱氧基核苷酸、2’-甲氧基乙基修饰的核苷酸、硫代磷酸酯键修饰的核苷酸、vp修饰的核苷酸、lna、ena、cet bna、una、gna和safe-01中的一种或多种的组合，其中safe-01所示结构式中的r1为h、oh或ch3，base为天然核碱基、修饰的核碱基、通用碱基或h原子。
11、进一步地，r1为ch3。
12、在某些实施方案中，所述正义链中的修饰核苷酸的个数为一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个或十九个。
13、在某些实施方案中，所述反义链中的修饰核苷酸的个数为一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或二十一个。
14、在某些实施方案中，所述正义链和所述反义链中的全部的核苷酸为修饰的核苷酸。
15、在某些实施方案中，按照5’到3’的方向，所述正义链的第7、8和9位的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的第2、14和16位的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸。
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【技术保护点】
1.一种siRNA，其包括正义链和反义链，其特征在于：所述siRNA中的每个核苷酸各自独立地为修饰或未修饰的核苷酸，所述正义链包括选自SEQ ID NO.1至12所示核苷酸序列中的一种或上述序列不超过3个碱基突变的核苷酸序列，所述反义链包括选自SEQ ID NO.13至24所示核苷酸序列中的一种或上述序列不超过5个碱基突变的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的siRNA，其特征在于：按照5’到3’的方向，所述正义链的碱基突变在其核苷酸序列的3’末端，所述反义链的碱基突变在其核苷酸序列的5’末端、第2～8位、3’端最后两位中的任意一位或多位。
3.根据权利要求1所述的siRNA，其特征在于：所述修饰的核苷酸为2’-甲氧基修饰的核苷酸、2’-氟代修饰的核苷酸、2’-O-CH2-CH2-O-CH3修饰的核苷酸、2’-O-CH2-CH＝CH2修饰的核苷酸、2’-CH2-CH2-CH＝CH2修饰的核苷酸、2’-脱氧基核苷酸、2’-甲氧基乙基修饰的核苷酸、硫代磷酸酯键修饰的核苷酸、VP修饰的核苷酸、LNA、ENA、cET BNA、UNA、GNA和中的一种或多种的组合
4.根据权利要求1至3中任一项所述的siRNA，其特征在于：所述正义链或所述反义链中的一个及以上的核苷酸为修饰的核苷酸。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的siRNA，其特征在于：按照5’到3’的方向，所述正义链的第7、8和9位的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述正义链的其他位置的核苷酸为2’-甲氧基修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，所述反义链的第2、14和16位的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的除第2、6、7、14和16位以外的位置的核苷酸为2’-甲氧基修饰的核苷酸；所述siRNA中以下核苷酸之间的连接中至少一个为硫代磷酸酯基连接：
6.根据权利要求1至3中任一项所述的siRNA，其特征在于：按照5’到3’的方向，所述反义链的第6位为2’-氟代修饰的核苷酸或所述反义链的第7位为2’-甲氧基修饰的核苷酸或其中，R1为H、OH或CH3，Base为天然核碱基、修饰的核碱基、通用碱基或H原子。
7.根据权利要求6所述的siRNA，其特征在于：所述反义链的第6位或第7位的核苷酸为
8.根据权利要求1所述的siRNA，其特征在于：所述siRNA为如下表所示序列中的任一条：
9.根据权利要求1所述的siRNA，其特征在于：所述siRNA为如下表所示序列中的任一条：
10.根据权利要求1所述的siRNA，其特征在于：所述siRNA为如下表所示序列中的任一条：
11.一种siRNA缀合物，其特征在于：其包括权利要求1至10中任一项所述的siRNA中的一条或多条，以及缀合至所述siRNA的缀合基团。
12.根据权利要求11所述的siRNA缀合物，其特征在于：所述缀合基团来自化合物SA51，所述缀合基团中的化合物SA51的个数为2～4个，2～4个所述化合物SA51通过化学键依次连接；所述化合物SA51的结构式为：
13.根据权利要求11或12所述的siRNA缀合物，其特征在于：所述缀合基团连接在所述正义链的3’末端和/或5’末端。
14.根据权利要求11所述的siRNA缀合物，其特征在于：所述siRNA缀合物的结构式如下：
15.一种药物组合物，其特征在于：其包括权利要求1至10中任一项所述的siRNA或权利要求11至14中任一项所述的siRNA缀合物，以及药学上可接受的载体或辅料。
16.根据权利要求15所述的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物用于抑制细胞程序性死亡-配体1基因表达。
17.如权利要求1至10中任一项所述的siRNA，或权利要求11至14中任一项所述的siRNA缀合物，或权利要求15或16所述的药物组合物用于制备治疗和/或预防PD-L1基因表达相关的疾病的药剂的用途。
18.根据权利要求17所述的用途，其特征在于：所述疾病为病毒性肝炎或癌症。
19.根据权利要求18所述的用途，其特征在于：所述病毒性肝炎为乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒感染所导致的。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种sirna，其包括正义链和反义链，其特征在于：所述sirna中的每个核苷酸各自独立地为修饰或未修饰的核苷酸，所述正义链包括选自seq id no.1至12所示核苷酸序列中的一种或上述序列不超过3个碱基突变的核苷酸序列，所述反义链包括选自seq id no.13至24所示核苷酸序列中的一种或上述序列不超过5个碱基突变的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的sirna，其特征在于：按照5’到3’的方向，所述正义链的碱基突变在其核苷酸序列的3’末端，所述反义链的碱基突变在其核苷酸序列的5’末端、第2～8位、3’端最后两位中的任意一位或多位。
3.根据权利要求1所述的sirna，其特征在于：所述修饰的核苷酸为2’-甲氧基修饰的核苷酸、2’-氟代修饰的核苷酸、2’-o-ch2-ch2-o-ch3修饰的核苷酸、2’-o-ch2-ch＝ch2修饰的核苷酸、2’-ch2-ch2-ch＝ch2修饰的核苷酸、2’-脱氧基核苷酸、2’-甲氧基乙基修饰的核苷酸、硫代磷酸酯键修饰的核苷酸、vp修饰的核苷酸、lna、ena、cet bna、una、gna和中的一种或多种的组合，其中，r1为h、oh或ch3，base为天然核碱基、修饰的核碱基、通用碱基或h原子。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的sirna，其特征在于：所述正义链或所述反义链中的一个及以上的核苷酸为修饰的核苷酸。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的sirna，其特征在于：按照5’到3’的方向，所述正义链的第7、8和9位的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述正义链的其他位置的核苷酸为2’-甲氧基修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，所述反义链的第2、14和16位的核苷酸为2’-氟代修饰的核苷酸，所述反义链的除第2、6、7、14和16位以外的位置的核苷酸为2’-甲氧基修饰的核苷酸；所述sirna中以下核苷酸之间的连接中至少一个为硫代磷酸酯基连接：
6.根据权利要求1至3中任一项所述的sirna，其特征在于：按照5’到3’的方向，所述反义链的第6位为2’-氟代修饰的核苷酸或所述反义链的第7位为2’-甲氧基修饰的核苷酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘楠，张红丽，
申请(专利权)人：苏州时安生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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