【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，涉及一种表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒及其制备方法与应用。
技术介绍
1、幽门螺杆菌(helicobacter pylori,hp)是一种螺旋状、微需氧的革兰氏阴性菌，主要定植于人体胃肠道，特别是胃部。hp能在胃酸环境中生存的原因是编码尿素酶，产生氨气和co2微环境，从而不受胃酸的影响。幽门螺杆菌感染的患病率在全球大约50％左右，各国之间差异很大。如果不接受相关治疗，hp感染可终生持续存在。目前该病原体其诱导消化性溃疡、胃炎、胃增生性息肉、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(malt)和胃癌的能力已被证实。此外，根据1994年世界卫生组织(who)国际癌症研究机构工作组的结论，hp已被认为是人类的i类(确定的)致癌物。目前全球胃癌每年新增病例约110万，在恶性肿瘤死亡病因中排第4位，每年约有80万人因胃癌死亡。胃癌的发生受多种因素影响，包括幽门螺杆菌感染、胃癌家族史和遗传倾向、年龄、环境、生活方式、饮食、吸烟、饮酒等，其中至少90％胃癌与幽门螺杆菌感染相关。我国幽门螺杆菌感染率约为60％，全国约共有8-9亿人感染，其中胃癌发病率约1％，是发病率居于第二位的癌症，仅次于肺癌。我国是胃癌的高发国家，全世界有一半以上的新发胃癌在中国。
2、目前ppi(质子泵抑制剂)加上两种抗生素的传统三联方案治疗hp，根除率逐渐下降，现根除率低于或低于80％。中国第五次幽门螺杆菌治疗指南共识推荐的常用的四联方案包括铋剂、ppi及两种抗生素。但是目前世界范围内耐药问题层出不穷，研究报道hp对四环素、阿莫西林、克拉霉素、左氧氟沙星和
3、幽门螺杆菌尚无商品化疫苗上市。尽管研究人员付出了巨大努力，但生产有效的幽门螺杆菌疫苗仍是一项复杂的任务。由于幽门螺杆菌非常适应胃内环境并能够逃避免疫系统机制导致持续感染，所以目前开发高效疫苗的尝试均告失败。并且由于抗原降解和疫苗佐剂的潜在毒性等原因，目前大多数针对幽门螺杆菌疫苗的研究仅限于动物实验，无法用于临床试验。因此开发新型载体疫苗或新型无毒佐剂疫苗是目前研发幽门螺杆菌疫苗的重中之重。
技术实现思路
1、为了解决所述技术问题，本专利技术提供了一种表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒及其制备方法与应用，该表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒可作为新型载体疫苗或新型无毒佐剂疫苗。
2、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、在本专利技术的第一方面，提供了一种表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒的制备方法，所述方法包括：
4、将幽门螺杆菌基因通过酶切位点kpni和hindiii插入穿梭质粒载体，获得重组腺病毒穿梭质粒；其中，所述幽门螺杆菌基因hp-me为napa、urea、ureb、hpaa、lpp20的五个基因的联合优势抗原表位所组成的基因片段；
5、将所述重组腺病毒穿梭质粒与腺病毒骨架质粒共转进感受态细胞中进行重组，获得重组质粒；
6、用限制酶paci线性化所述重组质粒并转染进细胞进行包装重组腺病毒，获得表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒。
7、进一步地，所述幽门螺杆菌基因为hp-me的编码基因序列如seq id no：1所示。
8、进一步地，所述重组腺病毒穿梭质粒与所述腺病毒骨架质粒共转进感受态细胞时的质量比为9-11：1。
9、在本专利技术的第二方面，所述方法获得的表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒。
10、在本专利技术的第三方面，提供了所述的表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒在制备幽门螺杆菌保护性疫苗或治疗性疫苗中的应用。
11、在本专利技术的第三方面，提供了一种幽门螺杆菌保护性疫苗或治疗性疫苗，包括所述的表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒和辅料。
12、进一步地，所述疫苗的剂型选自液体制剂、冻干制剂、胶囊制剂、片剂和丸剂中的一种。
13、本专利技术用作疫苗时接种途径包括肌肉注射、皮下注射，鼻腔、口腔等粘膜感染。
14、本专利技术实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
15、本专利技术提供的一种表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒及其制备方法与应用，首次将幽门螺杆菌优势抗原整合入腺病毒基因组中获得表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒，通过其递送宿主体内诱导宿主产生强烈的针对幽门螺杆菌抗原的体液和细胞免疫反应，可作为幽门螺杆菌保护性疫苗或治疗性疫苗，还可用于幽门螺杆菌蛋白的功能研究以及利用细胞作为生物反应器生产幽门螺杆菌蛋白。且本专利技术首次创造性选用的优势抗原基因hp-me为napa、urea、ureb、hpaa、lpp20的五个基因的联合优势抗原表位所组成的基因片段，免疫原性好。
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1.一种表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的一种表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒的制备方法，其特征在于，所述幽门螺杆菌基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
3.根据权利要求1所述的一种表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒的制备方法，其特征在于，所述重组腺病毒穿梭质粒与所述腺病毒骨架质粒共转进感受态细胞时的质量比为9-11：1。
4.一种采用权利要求1-3任一所述的方法制备得到的表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒。
5.权利要求4所述的表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒在制备幽门螺杆菌保护性疫苗或治疗性疫苗中的应用。
6.一种幽门螺杆菌保护性疫苗或治疗性疫苗，其特征在于，所述疫苗包括权利要求4所述的表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒和辅料。
7.根据权利要求6所述的一种幽门螺杆菌保护性疫苗或治疗性疫苗，其特征在于，所述疫苗的剂型选自液体制剂、冻干制剂、胶囊制剂、片剂和丸剂中的一种。
【技术特征摘要】
1.一种表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的一种表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒的制备方法，其特征在于，所述幽门螺杆菌基因的核苷酸序列如seq id no：1所示。
3.根据权利要求1所述的一种表达幽门螺杆菌蛋白的重组腺病毒的制备方法，其特征在于，所述重组腺病毒穿梭质粒与所述腺病毒骨架质粒共转进感受态细胞时的质量比为9-11：1。
4.一种采用权利要求1-3任一...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱应，聂龙宇，占雨欣，佘应龙，刘实，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：
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