【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及脱氮微生物，具体为一种具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌及其在海水废水脱氮方面的应用。
技术介绍
1、随着我国水产养殖业快速发展，水体中残存的饵料和排泄物在微生物的作用下转变为的氨氮、硝态氮以及亚硝态氮等无机氮。氮元素含量超标会引起严重的环境污染问题，如水体富营养化和赤潮等灾害，这不仅会危害水体中生物生长繁殖，造成环境污染与经济损失，甚至会危害人类生命健康与生态环境平衡。
2、微生物脱氮技术因具有低成本、操作简单及环保无二次污染等优点，成为常见的除氮方式。但是，传统生物脱氮分为需氧的硝化作用以及厌氧的反硝化作用两个步骤，处理过程繁琐且会增加脱氮成本。因此，异养硝化-好氧反硝化菌的发现成为新型脱氮技术的研究热点。然而，由于细菌种类繁多，其适应生长环境及除氮效率各不相同，且海水脱氮菌的筛选研究较少，故分离筛选具有高效脱氮效率及耐盐和高溶氧特性的异养硝化-好氧反硝化细菌，成为海水养殖废水脱氮的难点及重要环节，对于处理废水样品具更重要意义
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术的不足，目的在于提供一种具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌株及其筛选方法，该菌株能从海水养殖废水中被分离筛选，可在模拟废水中实现高效脱氮。
2、为实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为：
3、本专利技术提供一种具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌株，属于海生卵链菌，名称为marinobacterium maritimum 5-js，分
4、作为本专利技术的一种优选方案，所述海生卵链菌(marinobacterium maritimum)5-js的生物学特征为：
5、(1)能在(nh4)2so4、kno3、nano2为唯一氮源的液体培养基上生长。
6、(2)表面湿润光滑、不透明、边缘完整规则、呈现圆形隆起的淡黄色菌落。
7、(3)16s rdna基因测序
8、对海生卵链菌(marinobacterium maritimum)5-js的16s rdna基因序列进行pcr扩增、测序以及blast比对，结果显示，海生卵链菌(marinobacteriummaritimum)5-js的16srdna基因序列与海生卵链菌(marinobacteriummaritimum)的相似度较高，具有高度相似性。
9、另一方面，本专利技术提供了该具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌株的筛选方法，所述筛选方法包括以下步骤：
10、取1ml 30‰人工海水样品置于20ml富集培养基中，置于30℃、180rpm的摇床中恒温培养1天，取5ml富集菌液至于100ml富集培养基培养，如此重复三次；而后取菌液进行梯度稀释，并涂布于溴百里酚蓝(btb)固体培养基表面，30℃恒温培养1～3天后挑选带有最明亮蓝色晕圈的菌株在btb培养基上进一步纯化，挑取单菌落进行划线分离，如此重复三次得到单一菌株；将单一的菌株保存于-80℃冰箱中。
11、作为本专利技术的一种优选方案，所述培养基按下述比例配制：
12、(1)30‰人工海水：30g nacl溶于1000ml纯水；
13、(2)富集培养基：kno3 0.36g·l-1、(nh4)2so4 0.24g·l-1、柠檬酸钠3.6g·l-1、kh2po4 0.75g·l-1、k2hpo4 0.75g·l-1、mgso4·7h2o 0.5g·l-1、feso4 0.02g·l-1、mnso4·h2o 0.01g·l-1、ph 7.0～7.3；
14、(3)溴百里酚蓝固体培养基(btb)：kno3 1g·l-1、柠檬酸钠3.6g·l-1、kh2po40.75g·l-1、k2hpo4 0.75g·l-1、1％溴百里酚蓝乙醇溶液(btb)、琼脂20g·l-1，ph 7.0～7.3；
15、(4)异养硝化液体培养基(sm)：(nh4)2so4 0.12g·l-1、柠檬酸钠3.6g·l-1、kh2po40.75g·l-1、k2hpo4 0.75g·l-1、mgso4·7h2o 0.5g·l-1、feso4 0.02g·l-1、mnso4·h2o0.01g·l-1，ph 7.0～7.3；
16、(5)反硝化液体培养基(dm)：nano2 0.09g·l-1/kno3 0.18g·l-1、柠檬酸钠3.6g·l-1、kh2po4 0.75g·l-1、k2hpo4 0.75g·l-1、mgso4·7h2o 0.5g·l-1、feso4 0.02g·l-1、mnso4·h2o 0.01g·l-1，ph 7.0～7.3；
17、(6)同步脱氮培养基(snd)：nano2 0.09g·l-1/kno3 0.18g·l-1，(nh4)2so40.12g·l-1、柠檬酸钠7.2g·l-1、kh2po4 0.75g·l-1、k2hpo4 0.75g·l-1、mgso4·7h2o0.5g·l-1、feso4 0.02g·l-1、mnso4·h2o 0.01g·l-1，ph 7.0～7.3。
18、本专利技术的第三方面，提供了具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌的应用，上述具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌在脱氮中的应用。
19、作为本专利技术的一种优选方案，上述具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌在单一氮源模拟废水或混合氮源模拟废水中的脱氮应用，具体方案如下：
20、(1)以1.0％菌株接种量接种至异养硝化培养基，单一氮源为氨氮(20～25mg/l)37℃、200rpm震荡培养24h，每3h取水样测定氨氮、亚硝态氮、硝态氮浓度及溶液od600吸光度；
21、(2)以1.0％菌株接种量接种至反硝化培养基，单一氮源为亚硝态氮(20～25mg/l)37℃、200rpm震荡培养24h，每3h取水样测定亚硝态氮、硝态氮浓度及溶液od600吸光度；
22、(3)以1.0％菌株接种量接种至反硝化培养基，单一氮源为硝态氮(20～25mg/l)37℃、200rpm震荡培养24h，每3h取水样测定亚硝态氮、硝态氮浓度及溶液od600吸光度；
23、(4)以1.0％菌株接种量接种至同步脱氮培养基，混合氮源为氨氮(20～25mg/l)和亚硝态氮(20～25mg/l)，37℃、200rpm震荡培养24h，每3h取水样测定氨氮、亚硝态氮、硝态氮浓度及溶液od600吸光度；
24、(5)以1.0％菌株接种量接种至同步脱氮培养基，混合氮源为氨氮(20～25mg/l)和硝态氮(20～25mg/l)，37℃、200rpm震本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌株，其特征在于，名称为海生卵链菌(Marinobacterium maritimum)5-JS，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.28019。
2.根据权利要求1所述的一种具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌株，其特征在于，所述菌株5-JS能在(NH4)2SO4、KNO3、NaNO2为唯一氮源的液体培养基上生长。
3.根据权利要求1所述的一种具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌株，其特征在于，所述菌株5-JS在培养基上培养时，形成表面湿润光滑、不透明、边缘完整规则、呈现圆形隆起的淡黄色菌落。
4.根据权利要求1所述的一种具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌株，其特征在于，其16S rDNA基因序列如SEQ ID NO:1所示。
5.权利要求1所述具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌株的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述筛选方法，其特征在于，所述培养基及人工海水样品按下
7.采用权利要求1所述具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌株制备的菌剂。
8.权利要求1所述具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌株在脱氮技术领域中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌株在碳氮比C/N为15～20或pH值为7～9或盐度为20～40的水体中对氨氮、硝态氮、亚硝态氮的同步脱氮应用。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌株用于脱除水体中的氨氮、硝态氮、亚硝态氮其中任意一种或多种。
...【技术特征摘要】
1.一种具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌株，其特征在于，名称为海生卵链菌(marinobacterium maritimum)5-js，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.28019。
2.根据权利要求1所述的一种具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌株，其特征在于，所述菌株5-js能在(nh4)2so4、kno3、nano2为唯一氮源的液体培养基上生长。
3.根据权利要求1所述的一种具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌株，其特征在于，所述菌株5-js在培养基上培养时，形成表面湿润光滑、不透明、边缘完整规则、呈现圆形隆起的淡黄色菌落。
4.根据权利要求1所述的一种具有高溶氧特性的海洋异养硝化-好氧反硝化菌株，其特征在于，其16s rdna基因序列如seq id no:1所示。
【专利技术属性】
技术研发人员：杨国军，冯诗语，王龙齐，王连顺，潘相彤，丛玉婷，卢亚楠，王丽，
申请(专利权)人：大连海洋大学，
类型：发明
国别省市：
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