含有植物甾醇的活性植物乳杆菌活菌制剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种含有植物甾醇、活性植物乳杆菌活菌制剂的制备。本发明专利技术的植物甾醇、植物乳杆菌活菌制剂，经过活性植物乳杆菌扩培、离心、加入保护剂、真空干燥，获得了高存活率的植物乳杆菌活菌粉，再加入低聚糖、植物甾醇制备可在室温稳定存放的含有植物甾醇、植物乳杆活菌制剂。该保护剂按重量份的组成：谷氨酸钠０．０５－３份；Ｖｃ０．０５－２份；Ｌ－半胱氨酸０．０５－１份；甘油０．５－５份；海藻糖５－１５份；蔗糖３－８份；脱脂奶粉１５－７０份；玉米淀粉１０－２５份；玉米面１０－２５份。本发明专利技术的方法制成了治疗保健作用更强，并可常温保存时间长的含有植物甾醇植物乳杆活菌制剂。解决了常规生产方法冷冻干燥设备昂贵，不易实现工业化的缺点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种活性植物乳杆菌活菌制剂，特别是涉及一种含有植物留醇的活性 植物乳杆菌活菌制剂及其制备方法。
技术介绍
植物乳杆菌(L plantarum)属于乳杆菌科中的乳杆菌属，革兰氏阳性菌，兼性厌 氧，是人体胃肠道的益生菌群，代谢可以产生有机、细菌素、过氧化氢、双乙酰等多种天然抑 菌物质，调整菌群之间的关系，维持和保证菌群最佳优势组合以及组合的稳定，阻止了致病 菌的定殖与入侵，拮抗致病菌和有害微生物的生长及毒素的黏附，具有维持肠道菌群平衡 的作用。自20世纪70年代Marm和Spoerry发现长期饮用当地野生乳杆菌发酵制品的非洲 Masai部落人体内血清胆固醇含量普遍较低，迄今已有大量实验证实，乳杆菌及其相关制品 具有降低介质及血清胆固醇的能力。其作用机理是乳杆菌产生的胆盐水解酶可以使结合胆 酶分解为游离胆酸，在酸性条件下，游离胆酸与胆固醇发生共沉淀。植物乳杆菌对于急性肝 脏损伤具有治疗作用，能够定殖预防和阻止肠道病原菌的过度生长，同时细菌素去除作用 有利于肠道IgA分泌和巨噬细胞反应的提高，提高机体免疫力。促进营养物质吸收，缓解乳 糖不耐症及抑制肿瘤细胞的形成等。植物乳杆菌在食品工业中也具有广泛的应用。在发酵 肉类制品中经过发酵，不仅可以提高产品的营养价值，延长产品的保质期，改善产品的组织 结构和色泽，而且降低了亚硝酸盐和胆固醇的残留量。在发酵调味品中是主要的优势菌，可 作为优良的菌种供企业直接应用。在发酵饮料中植物乳杆菌同样起到了生产加工和营养保 健功能。目前，国内外研究人员开始重视对植物乳杆菌粉的开发，潘艳采用冷冻干燥技术 对植物乳杆菌进行冻干，中国专利技术专利申请CN200910103925. 8公开了一种植物乳杆菌冻 干发酵剂的制备。冷冻干燥技术在多数菌种制粉过程常采用的一种干燥技术，但是该冻干 手段需要昂贵设备，且处理量较少，不易在工业化中实现，而常压干燥菌粉存在干燥时间 长，菌体容易污染杂菌的问题，解决干燥手段是植物乳杆菌产品市场化、降低成本的重要问 题。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术存在的问题，提供一种菌活数遇空气下降慢、常温 保存下稳定的含有植物留醇的活性植物乳杆菌活菌制剂。本专利技术另一目的是提供上述含有植物留醇的活性植物乳杆菌活菌制剂的制备方法。本专利技术开发含有低聚糖及植物留醇的植物乳杆菌活菌制剂，有利于植物乳杆菌在 常温条件下保存，解决了植物乳杆菌产品所面临的菌活数遇空气下降快、常温保存下不稳 定的的又一难题，也增强了植物乳杆菌制剂的保健生理功能，协同发挥进一步的生理作用。本专利技术第一目的通过如下技术方案实现一种含有植物留醇的活性植物乳杆菌活菌制剂，以重量份数计，其原料配方组份 组成为植物乳杆菌粉60-90份、植物留醇5-20份和低聚糖5-20份；所述低聚糖为海藻酸钠、环状糊精、大豆低聚糖、低聚异麦芽糖和/或半乳糖；所述植物乳杆菌粉为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Ml_UVs29经过活 化、发酵培养、收集菌泥、添加保护剂、真空干燥和磨粉所得，制得的植物乳杆菌粉活菌数 1.0X1010-ncfu/g ；添加保护剂是将保护剂用生理盐水溶解，生理盐水使用量为菌泥重量的 1 3倍，将保护剂的生理盐水溶液与菌泥搅拌均勻，得到菌液的糊状体；以重量份数计，所 述保护剂组成为谷氨酸钠0. 05-3份；VcO. 05-2份；L-半胱氨酸0. 05-1份；甘油0. 5-5份； 海藻糖5-15份；蔗糖3-8份；脱脂奶粉15-70份；玉米淀粉10_25份；玉米面10-25份。为进一步实现本专利技术目的，其原料配方组份组成优选为植物乳杆菌粉80份；植 物甾醇10份；低聚糖10份。所述活化是将植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Ml_UVs29接种于改良 MRS琼脂斜面培养基上；然后放进培养箱中，在37 士 0. 5°C的温度下以固体培养基划线培 养24-48h ；按在培养基中的浓度计，改良MRS琼脂斜面培养基组分为蛋白胨10-15g/L，牛 肉浸出物10-15g/L，酵母粉4-6g/L，葡萄糖3-8g/L，乙酸钠4_6g/L，柠檬酸二胺l_3g/L， 琼脂15-20g/L，土温801-2mL/L，磷酸氢二钾l_3g/L，七水硫酸镁0. 1-0. 3g/L，七水硫酸锰 0.05-0. 08g/L。所述发酵培养包括如下步骤a、一级种子液的培养取已经活化培养的斜面种子，将菌落洗脱，以无菌操作加入到改良的MRS液体培 养基，改良的MRS液体培养基成份除不含琼脂外，其他成分与含量同改良MRS琼脂斜面培养 基，37 士 1°C培养24-28h，得到一级种子液，活菌数在101(lCfU/mL以上；b、二级种子液的培养将所得一级种子液接入改良的MRS液体培养基，按体积比计，接种量为10-15 %， 培养温度37士 1°C，培养时间24-28h，得到二级种子液；C、三级种子液的培养将所得二级种子液接入改良的MRS液体培养基，按体积比计，接种量为10-15%， 培养温度37士 1°C，培养时间24-28h，得到三级种子液；d、发酵增殖培养将所得三级种子液接入改良的MRS液体培养基，按体积比计，接种量为10-15%， 发酵温度37 士 0. 5°C，发酵时间22-26h发酵成熟。所述收集菌泥是将发酵培养得到的发酵增殖培养液低温离心，离心温度2-4°C，转 速为3000-4000rpm，离心处理5_10min后收集菌泥。所述真空干燥是将添加保护剂后得到的菌体放入无菌真空干燥箱，在温度为 30-40°C，压强为-0. 06—0. IMpa 条件下干燥 20h_30h。所述磨粉真空干燥得到的干燥的植物乳杆活菌体于无菌磨粉机中磨粉，得到 Ml-UVs29植物乳杆活菌粉。本专利技术另一目的通过如下技术方案实现一种含有植物留醇的活性植物乳杆菌活菌制剂的制备方法，包括如下步骤6(1)植物乳杆菌种的活化将植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Ml_UVs29接种于改良MRS琼脂斜面培 养基上；然后放进培养箱中，在37士0. 5°C的温度下以固体培养基划线培养24-48h ；按在培养基中的浓度计，改良MRS琼脂斜面培养基组分为蛋白胨10_15g/L，牛 肉浸出物10-15g/L，酵母粉4-6g/L，葡萄糖3-8g/L，乙酸钠4_6g/L，柠檬酸二胺l_3g/L，琼 脂15-20g/L，土温80 l-2mL/L,磷酸氢二钾l_3g/L，七水硫酸镁0. 1-0. 3g/L，七水硫酸锰 0.05-0. 08g/L ；(2)植物乳杆菌种的发酵培养a、一级种子液的培养取上述已经活化培养的斜面种子，将菌落洗脱，以无菌操作加入到改良的MRS液 体培养基，改良的MRS液体培养基成份除不含琼脂外，其他成分与含量同改良MRS琼脂斜面 培养基，37士 1°C培养24-28h，得到一级种子液，活菌数在101(lCfU/mL以上；b、二级种子液的培养将所得一级种子液接入改良的MRS液体培养基，按体积比计，接种量为10-15%， 培养温度37士 1°C，培养时间24-28h，得到二级种子液；C、三级种子液的培养将所得二级种子液接入改良的MRS液体培养基，按体积比计，接种量为10-15%， 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
一种含有植物甾醇的活性植物乳杆菌活菌制剂，其特征在于，以重量份数计，其原料配方组份组成为植物乳杆菌粉60 90份、植物甾醇5 20份和低聚糖5 20份；所述低聚糖为海藻酸钠、环状糊精、大豆低聚糖、低聚异麦芽糖和/或半乳糖；所述植物乳杆菌粉为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)M1 UVs29经过活化、发酵培养、收集菌泥、添加保护剂、真空干燥和磨粉所得，制得的植物乳杆菌粉活菌数为1.0×1010～11cfu/g；添加保护剂是将保护剂用生理盐水溶解，生理盐水使用量为菌泥重量的1～3倍，将保护剂的生理盐水溶液与菌泥搅拌均匀，得到菌液的糊状体；以重量份数计，所述保护剂组成为谷氨酸钠0.05 3份；Vc0.05 2份；L 半胱氨酸0.05 1份；甘油0.5 5份；海藻糖5 15份；蔗糖3 8份；脱脂奶粉15 70份；玉米淀粉10 25份；玉米面10 25份。2.根据权利要求1所述的含有植物留醇的活性植物乳杆菌活菌制剂，其特征在于以 重量份数计，其原料配方组份组成为植物乳杆菌粉80份；植物留醇10份；低聚糖10份。3.根据权利要求1所述的含有植物留醇的活性植物乳杆菌活菌制剂，其特征在于所 述活化是将植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Ml_UVs29接种于改良MRS琼脂斜面培 养基上；然后放进培养箱中，在37士0. 5°C的温度下以固体培养基划线培养24-48h ；按在培 养基中的浓度计，改良MRS琼脂斜面培养基组分为蛋白胨10-15g/L，牛肉浸出物10-15g/ L,酵母粉4-6g/L，葡萄糖3-8g/L，乙酸钠4_6g/L，柠檬酸二胺l_3g/L，琼脂15_20g/L，土温 801-2mL/L，磷酸氢二钾l_3g/L，七水硫酸镁0. 1-0. 3g/L，七水硫酸锰0. 05-0. 08g/L。4.根据权利要求1所述的含有植物留醇的活性植物乳杆菌活菌制剂，其特征在于所 述发酵培养包括如下步骤a、一级种子液的培养取已经活化培养的斜面种子，将菌落洗脱，以无菌操作加入到改良的MRS液体培养基， 改良的MRS液体培养基成份除不含琼脂外，其他成分与含量同改良MRS琼脂斜面培养基， 37士 1°C培养24-28h，得到一级种子液，活菌数在101(lCfU/mL以上；b、二级种子液的培养将所得一级种子液接入改良的MRS液体培养基，按体积比计，接种量为10-15%，培养 温度37士 1°C，培养时间24-28h，得到二级种子液；c、三级种子液的培养将所得二级种子液接入改良的MRS液体培养基，按体积比计，接种量为10-15%，培养 温度37士 1°C，培养时间24-28h，得到三级种子液；d、发酵增殖培养将所得三级种子液接入改良的MRS液体培养基，按体积比计，接种量为10-15%，发酵 温度37 士 0.5°C，发酵时间22-26h发酵成熟。5.根据权利要求1所述的含有植物留醇的活性植物乳杆菌活菌制剂，其特征在于 所述收集菌泥是将发酵培养得到的发酵增殖培养液低温离心，离心温度2-4°C，转速为 3000-4000rpm,离心处理5-lOmin后收集菌泥。6.根据权利要求1所述的含有植物留醇的活性植物乳杆菌活菌制剂，其特征在于所 述真空干燥是将添加保护剂后得到的菌体放入无菌真空干燥箱，在...

【专利技术属性】
技术研发人员：于长青，钱丽丽，姚笛，左锋，李丽娜，
申请(专利权)人：黑龙江八一农垦大学，
类型：发明
国别省市：23