【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，尤其涉及一种葫芦茶提取物及其在制备抗i型单纯疱疹病毒药物中的应用。
技术介绍
1、i型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus-1，hsv-1)是一种普遍存在且分布广泛的人类病原体，研究表明，90％以上的人曾感染过单纯疱疹病毒(hsv)，当机体抵抗力下降时，体内潜伏的hsv被激活而发病。根据hsv包膜糖蛋白抗原性的差异，将其分为hsv-1和hsv-2两种血清型，hsv-1主要感染粘膜上皮细胞，并在感觉神经元中建立终身感染，hsv-1感染最常见的症状为口腔和面部形成疼痛的水泡状病变，症状包括刺痛、发痒或灼热感，这些症状可定期反复出现，频率因人而异，严重者可导致唇疱疹、角膜失明和脑炎、艾滋病以及阿尔兹海默症等，这些疾病即便能够得到有效的治疗，依然会留下无法根除的后遗症，给人类造成了极大的痛苦。
2、目前临床上主要应用阿昔洛韦(acv)、更昔洛韦(gcv)为代表的核苷类似物治疗hsv-1感染，这些核苷类似物可以被病毒胸苷激酶磷酸化，但不能被宿主细胞酶磷酸化，其产物核苷酸被结合到病毒复制的dna中，造成dna链合成终止，从而抑制病毒感染细胞中的病毒dna复制达到治疗疱疹病毒感染的作用。但这些药物均以病毒dna聚合酶为靶点，存在溶解度低、半衰期短、生物利用度低及副作用较大等问题，并且长期使用这些药物治疗hsv-1感染容易诱发耐药病毒株，造成肺炎、脑炎、食管炎和皮肤黏膜感染等其他不良反应。因此，开发新型的尤其是高效、低毒性、多靶点的药物对于hsv-1的治疗十分有必要。
1、为此，本专利技术的目的在于提供高效、低毒性、多靶点的葫芦茶提取物在制备抗i型单纯疱疹病毒药物中的应用，为i型单纯疱疹病毒感染的防治提供一种新的药物选择。
2、本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
3、一种具有抗i型单纯疱疹病毒活性的葫芦茶提取物的制备方法，包括以下步骤：
4、s1：以葫芦茶为原料，加入10～20重量倍的水煎煮，煎煮时间为10～20min，过滤，加入5～15重量倍的水煎煮滤渣，煎煮时间为10～20min，过滤，合并滤液，减压浓缩，再加入乙醇使得乙醇终浓度为60％v/v，4℃静置6～18h后离心，收集上清液，减压浓缩，即得乙醇提取物；
5、s2：对所述乙醇提取物依次用等量石油醚、乙酸乙酯萃取三次，收集水相并减压浓缩，得到水相分提物；
6、s3：将所述水相分提物进行硅胶柱层析分离，以体积配比为4:1～0:1的乙酸乙酯-甲醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液并进行薄层色谱分析，合并相同组分，获得组分fr1和fr2，将所述组分fr1和fr2分别进行减压浓缩，得到所述葫芦茶提取物。
7、本专利技术提供的葫芦茶分离组分fr1、fr2在细胞水平和动物水平均具有优良的抗i型单纯疱疹病毒活性，具备安全性好、选择指数高等优点，可用于制备针对i型单纯疱疹病毒的抗病毒药物，扩展疱疹病毒感染疾病的治疗方案，具有广阔的应用前景和重要的临床意义。
8、进一步，其制备方法还包括s4：取组分fr1进行高效液相色谱分离，采用甲醇-水溶液进行梯度洗脱，收集洗脱时间为0～3min且甲醇体积百分数从10％变化至20％的洗脱液进行浓缩，得到所述葫芦茶提取物。
9、进一步，其制备方法还包括s5：取组分fr2进行高效液相色谱分离，以甲醇体积百分数从5％变化至100％的甲醇-水溶液进行梯度洗脱，收集洗脱时间为26～30min且甲醇体积百分数从90％变化至100％的洗脱液进行浓缩，得到所述葫芦茶提取物。
10、另一些实施例中，所述葫芦茶提取物作为活性成分在制备抗i型单纯疱疹病毒药物中的应用。
11、进一步，所述药物包括药学上可接受的辅料。
12、说明书附图
13、图1为实施例1葫芦茶乙醇提取物和阳性药物gcv对hela、vero两种细胞的细胞毒性测定结果；
14、图2为实施例1葫芦茶乙醇提取物和阳性药物gcv在hela、vero两种细胞中抗hsv-1活性的检测结果；
15、图3为实施例1不同浓度葫芦茶乙醇提取物下hsv-gfp感染hela细胞的荧光镜检图及荧光强度；
16、图4为实施例1葫芦茶乙醇提取物对hela细胞中hsv-1病毒晚期基因gb mrna表达水平的影响；
17、图5为实施例1葫芦茶乙醇提取物对hela细胞中hsv-1病毒滴度的影响；
18、图6为实施例1葫芦茶乙醇提取物对皮肤疱疹病毒感染模型小鼠的伤口愈合的影响；
19、图7为实施例1葫芦茶乙醇提取物对皮肤疱疹病毒感染模型小鼠的体重的影响；
20、图8为实施例1葫芦茶乙醇提取物对皮肤疱疹病毒感染模型小鼠的炎症评分的影响；
21、图9为实施例1葫芦茶乙醇提取物对皮肤疱疹病毒感染模型小鼠的皮肤刺细胞层厚度的影响；
22、图10为实施例1葫芦茶乙醇提取物对hela细胞中hsv-1病毒晚期基因gb mrna表达水平及hsv-1病毒滴度的影响；
23、图11为实施例2葫芦茶的不同分提物对hela细胞的细胞毒性测定结果；
24、图12为实施例2葫芦茶的不同分提物在hela细胞中抗hsv-1活性的检测结果；
25、图13为实施例3葫芦茶水相分提物的洗脱组分fr1和fr2对hela细胞的细胞毒性测定结果；
26、图14为实施例3组分fr1和fr2在hela细胞中抗hsv-1活性的检测结果；
27、图15为实施例3不同浓度组分fr1下hsv-gfp感染hela细胞的荧光镜检图；
28、图16为实施例3不同浓度组分fr2下hsv-gfp感染hela细胞的荧光镜检图；
29、图17为实施例3组分fr1对hela细胞中hsv-1病毒晚期基因gb mrna表达水平及hsv-1病毒滴度的影响；
30、图18为实施例3组分fr2对hela细胞中hsv-1病毒晚期基因gb mrna表达水平及hsv-1病毒滴度的影响；
31、图19为实施例3组分fr1对hela细胞中抗病毒基因il-1β、ifn-β及tnf-αmrna表达的影响；
32、图20为实施例3组分fr2对hela细胞中抗病毒基因il-1β、ifn-β及tnf-αmrna表达的影响；
33、图21为实施例3组分fr1和fr2对皮肤疱疹病毒感染模型小鼠的伤口愈合的影响；
34、图22为实施例3组分fr1和fr2对皮肤疱疹病毒感染模型小鼠的体重的影响；
35、图23为实施例3组分fr1和fr2对皮肤疱疹病毒感染模型小鼠的炎症评分的影响；
36、图24为实施例3组分fr1和fr2对皮肤疱疹病毒感染模型小鼠的皮肤刺细胞层厚度的影响；
37、图25为实施例3组分fr1和fr2对皮肤疱疹病毒感染模型小鼠的皮肤组织中hsv-1病毒复制的影响；<本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种葫芦茶提取物，其特征在于，其制备方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述葫芦茶提取物，其特征在于，其制备方法还包括S4：取组分Fr1进行高效液相色谱分离，采用甲醇-水溶液进行梯度洗脱，收集洗脱时间为0～3min且甲醇体积百分数从10％变化至20％的洗脱液进行浓缩，得到所述葫芦茶提取物。
3.根据权利要求1所述葫芦茶提取物，其特征在于，其制备方法还包括S5：取组分Fr2进行高效液相色谱分离，以甲醇体积百分数从5％变化至100％的甲醇-水溶液进行梯度洗脱，收集洗脱时间为26～30min且甲醇体积百分数从90％变化至100％的洗脱液进行浓缩，得到所述葫芦茶提取物。
4.权利要求1～3任一所述葫芦茶提取物作为活性成分在制备抗I型单纯疱疹病毒药物中的应用。
5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述药物包括药学上可接受的辅料。
【技术特征摘要】
1.一种葫芦茶提取物，其特征在于，其制备方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述葫芦茶提取物，其特征在于，其制备方法还包括s4：取组分fr1进行高效液相色谱分离，采用甲醇-水溶液进行梯度洗脱，收集洗脱时间为0～3min且甲醇体积百分数从10％变化至20％的洗脱液进行浓缩，得到所述葫芦茶提取物。
3.根据权利要求1所述葫芦茶提取物，其特征在于，其制备方法还包括s5：取...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈俊，李弘剑，彭伟建，王汉琨，赵王淳，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：
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