【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测，特别是涉及一种生物假体组织中游离醛基的含量检测方法。
技术介绍
1、戊二醛是一种具有双醛基官能团的五碳分子，自1960年代被用作固定交联生物假体组织以来，在临床上如生物心脏瓣膜、生物补片、血管移植物等多方面得到了广泛的应用。戊二醛具有低成本、水溶解性好、高反应性等优点，可提高所交联组织的力学性能、耐久性，并降低免疫原性。然而大量研究表明，生物假体组织在植入体内后会产生钙化，究其原因，最受关注的是戊二醛共价交联后生物假体组织中游离醛基所造成的危害。虽然戊二醛分子链段短，但其低浓度水溶液容易产生聚合，形成存在多聚物的混合体，具有高醛反应性，与胶原蛋白反应后，使生物假体组织高钙化。
2、为降低生物假体组织植入体内的钙化风险，研究人员通过对游离醛基进行加帽处理，降低组织中的游离醛含量以减少钙化风险。目前已报道的对游离醛基加帽处理的方法很多，如2-氨基油酸钠处理、乙醇胺加帽处理、聚醚胺处理等。小动物模型植入结果表示相较于加帽处理之前，上述加帽处理的方法均可以减少生物假体组织的体内钙化。然而，生物假体组织中游离醛基的理论含量值却鲜少有人研究，不能为生物假体组织的加帽处理等提供理论依据。
3、tara j.tod等人描述了一种测试生物假体组织游离醛基的方法。他们将使用戊二醛固定的心包彻底冲洗，在还原条件下添加胱胺二盐酸盐以产生巯基(-sh)，然后使用5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(埃尔曼试剂)修饰心包上的巯基；接下来，引入三(2-羧乙基)膦盐酸盐(tcep)与二硫键快速反应，将5-硫代-2
4、总之，戊二醛用作生物假体组织交联剂的一大难点在于其游离醛基引起的高钙化风险，然而关于游离醛基含量测评手段鲜有报道，且现有测试方法的实验周期长、检测稳定性较差。为更好地研究生物假体组织中游离醛基含量与钙化风险之间的关系、现有抗钙化工艺与方法的理论优势等，亟需进一步开发生物假体组织中游离醛基的含量检测方法。
技术实现思路
1、基于此，本专利技术提供一种步骤简单、检测准确度高的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法。
2、具体技术方案如下：
3、一种生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，包括如下步骤：
4、将待测生物假体组织与含荧光探针的溶液混合反应，以将至少部分所述含荧光探针或所述荧光探针中的荧光基团固定在所述待测生物假体组织上；
5、脱去反应结束后固定在待测生物假体组织上的所述荧光探针或所述荧光探针中的荧光基团，检测所得反应液中所述荧光探针或所述荧光基团的含量，计算生物假体组织中游离醛基的含量；
6、其中所述荧光探针具有如下式(i)所示的结构特征：
7、nh2-l0-a (i)
8、其中，l0为桥连基团，且结构包含一个或多个选自组s0的基团，组s0包括：-s(o)2-nh-、-nh-、脲基、酯基、酰胺基、二硫键、-s-、-peg-、羰基、希夫碱基和巯基；
9、a为荧光基团。
10、在其中一个实施例中，l0具有如下式(a)～(f)所示结构中的一种：
11、-s01-l01- (a)
12、-l01-s01-l02- (b)
13、-l01-s01-l02-s02-l03- (c)
14、-s01-l01-s02-l02- (d)
15、-s01- (e)
16、-s01-l01-s02-l02-s03- (f)
17、其中，s01、s02、s03各自独立地选自组s0；
18、l01、l02、l03各自独立地选自c1-10烷基。
19、在其中一个实施例中，l0选自如下结构中的一种：
20、
21、在其中一个实施例中，a选自如下结构中的一种：
22、
23、其中，n＝0、1、2、3、4或5；
24、r1各自独立地选自：-n(c1～5烷基)2、-so3h、硝基、c1～5烷基和羟基。
25、在其中一个实施例中，所述荧光探针包括如下化合物(1)～(14)中的一种或多种：
26、
27、在其中一个实施例中，所述含荧光探针的溶液中，荧光探针的浓度为0.1mm～50mm；及/或，
28、反应的条件包括：于15℃～75℃条件下震荡2h～120h。
29、在其中一个实施例中，将待测生物假体组织与含荧光探针的溶液混合反应后，还包括清洗所述待测生物假体组织的步骤，清洗是指采用水和乙醇清洗。
30、在其中一个实施例中，脱去反应结束后固定在待测生物假体组织上的所述荧光探针或所述荧光探针中的荧光基团的方法为与脱除试剂的溶液进行反应。
31、在其中一个实施例中，所述脱除试剂选自盐酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、氢氧化钠、氢氧化钾、乙醇钠、还原型辅酶ⅱ(nadph)、半胱氨酸、tcep、lialh4、二硫苏糖醇和硼氢化钠中的一种或多种；及/或，
32、所述脱除试剂的溶液中，脱除试剂的浓度为0.1mm～50mm；及/或，
33、反应的条件包括：于15℃～120℃条件下震荡2h～120h。
34、在其中一个实施例中，检测的方法为高效液相色谱法、紫外分光光度法或荧光检测法。
35、在其中一个实施例中，将所述待测生物假体组织剪碎至面积≤100mm2的碎片后与所述含荧光探针的溶液混合。
36、在其中一个实施例中，将待测生物假体组织与含荧光探针的溶液混合反应前，先将所述待测生物假体组织进行清洗和干燥。
37、在其中一个实施例中，清洗的条件包括：采用生理盐水或纯化水清洗；及/或，
38、干燥的方式为冷冻干燥、真空干燥或空气干燥。
39、在其中一个实施例中，所述待测生物假体组织为牛心包、猪心包、猪组织瓣膜、血管、皮肤、小肠粘膜下层、脑脊膜、膀胱内膜、韧带、肌腱、主动脉瓣、二尖瓣或三尖瓣。
40、上述生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，通过采用特定结构的荧光探针，反应选择性强，通过伯氨基与醛基的希夫碱反应直接修饰生物假体组织中的游离醛基，修饰生成的共价键稳定性好，反应条件简单且产率较高，可使较多的荧光探针连接到生物假体组织上，减少实验误差。同时，在后续步骤中本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，L0具有如下式(a)～(f)所示结构中的一种：
3.根据权利要求2所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，L0选自如下结构中的一种：
4.根据权利要求1所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，A选自如下结构中的一种：
5.根据权利要求1所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，所述荧光探针包括如下化合物(1)～(14)中的一种或多种：
6.根据权利要求1～5任一项所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，所述含荧光探针的溶液中，荧光探针的浓度为0.1mM～50mM；及/或，
7.根据权利要求1～5任一项所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，将待测生物假体组织与含荧光探针的溶液混合反应后，还包括清洗所述待测生物假体组织的步骤，清洗是指采用水和乙醇清洗。
8.根据权利要求1～5任
9.根据权利要求8所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，所述脱除试剂选自盐酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、氢氧化钠、氢氧化钾、乙醇钠、还原型辅酶Ⅱ、半胱氨酸、TCEP、LiAlH4、二硫苏糖醇和硼氢化钠中的一种或多种；及/或，
10.根据权利要求1～5任一项所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，检测的方法为高效液相色谱法、紫外分光光度法或荧光检测法。
11.根据权利要求1～5任一项所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，将所述待测生物假体组织剪碎至面积≤100mm2的碎片后与所述含荧光探针的溶液混合。
12.根据权利要求1～5任一项所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，将待测生物假体组织与含荧光探针的溶液混合反应前，先将所述待测生物假体组织进行清洗和干燥。
13.根据权利要求12所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，清洗的条件包括：采用生理盐水或纯化水清洗；及/或，
14.根据权利要求1～5任一项所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，所述待测生物假体组织为牛心包、猪心包、猪组织瓣膜、血管、皮肤、小肠粘膜下层、脑脊膜、膀胱内膜、韧带、肌腱、主动脉瓣、二尖瓣或三尖瓣。
...【技术特征摘要】
1.一种生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，l0具有如下式(a)～(f)所示结构中的一种：
3.根据权利要求2所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，l0选自如下结构中的一种：
4.根据权利要求1所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，a选自如下结构中的一种：
5.根据权利要求1所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，所述荧光探针包括如下化合物(1)～(14)中的一种或多种：
6.根据权利要求1～5任一项所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，所述含荧光探针的溶液中，荧光探针的浓度为0.1mm～50mm；及/或，
7.根据权利要求1～5任一项所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，将待测生物假体组织与含荧光探针的溶液混合反应后，还包括清洗所述待测生物假体组织的步骤，清洗是指采用水和乙醇清洗。
8.根据权利要求1～5任一项所述的生物假体组织中游离醛基的含量检测方法，其特征在于，脱去反应结束后固定在待测生物假体组织上的所述荧光探针或所述荧光探针中的荧光基团的方法为与脱除试剂的溶液进行...
【专利技术属性】
技术研发人员：裴歌，何海红，于世河，刘世红，陈国明，
申请(专利权)人：上海微创心通医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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