【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物生物，具体涉及一种艾草茎尖高效再生的方法。
技术介绍
1、艾(artemisia argyi)为菊科蒿属多年生草本植物，是一种集药用、食用及保健价值于一身的大宗中药材植物。全草入药，具有温经活络、去湿散寒、止血、消炎、平喘止咳、安胎、抗过敏和抗凝血等作用。近年来，随着中医药健康服务业的快速发展，艾产业的市场需求与日俱增。艾及其制品在治未病和美容护肤等方面的独特作用得到了社会各界的广泛认同具有广阔的市场前景。
2、河南省南阳市是国内外公认的艾产业重要发源地，是全国最大的艾原材料供应基地，所产的艾被外界统称为“宛艾”。宛艾因其药用价值高、品种多、成分丰富且产量高等特性而备受关注。然而，缺乏优良品种及有效的品种化繁育技术是限制宛艾产业发展的瓶颈问题。
3、目前，在生产上，艾草的繁殖主要以根茎分株、扦插及播种等传统方式进行繁殖。根茎分株及扦插等无性繁殖方式虽能保持母本植株的优良性状，但存在繁殖受材料和季节的限制，且长期的无性繁殖容易导致病害积累，产量及质量下降等品种退化问题。而采用播种方式进行繁殖很难保存母本植株的优良性状。上述问题严重限制了宛艾优质种质资源的规模化繁育、推广及后期的品种改良。
4、公开号为cn106172002a的中国专利申请文献公开了一种艾草组培苗生产方法，其具有成苗量多，繁殖系数高的优点，比传统的广西地区艾草种植方法能够提高成活率15-20％，能够在短期内快速繁殖大量野艾草，具有成活率高，生长迅速，能够快速实现规模化种植和生产的特点；公开号为cn10754901
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题在于如何高效且保持遗传性状稳定的再生艾草。
2、本专利技术通过以下技术手段实现解决上述技术问题：
3、一种艾草茎尖高效再生的方法，包括以下步骤：
4、s1、以宛艾的当年生顶芽为材料，经表面消毒后，剥取茎尖作为外植体材料；
5、s2、将外植体材料接种于不定芽诱导培养基中，进行不定芽的诱导培养；
6、s3、将s2中诱导出不定芽的外植体材料转接于不定芽增殖培养基中进行不定芽的增殖和伸长培养；
7、s4、将s3中伸长的不定芽进行瓶外不定根诱导培养获得完整艾草再生植株。
8、优选地，s1具体包括以下步骤：将宛艾优良健康株系的当年生顶芽经流水冲洗10～20min后，于无菌操作台中，用无菌水冲洗3～5遍，再用75％乙醇进行表面消毒15～20s，然后用无菌水冲洗3～5遍，再用75％乙醇进行表面消毒15～20s，继续用无菌水冲洗3～5遍后，再用0.1％(w/v)的升汞溶液消毒1～3min，然后用无菌水冲洗4～6遍，用无菌滤纸吸干表面水分后，用镊子剥取1～3mm的茎尖分生组织作为外植体材料。
9、优选地，在s2中，所述的不定芽诱导培养基为添加有0.01～0.5mg/l tdz，3.0％(w/v)蔗糖，0.7％(w/v)琼脂的wpm培养基。
10、优选地，在s2中，所述不定芽的诱导培养的时间为4周。
11、优选地，在s3中，所述不定芽增殖培养基为添加有0.1～1.0mg/l tdz，0.1～1.0mg/lzt，0.1～1.0mg/l ga3，3.0％(w/v)蔗糖和0.7％(w/v)琼脂的wpm培养基。
12、优选地，在s3中，所述不定芽的增殖和伸长培养的时间为4周。
13、优选地，s4具体包括以下步骤：将s3中伸长的不定芽从芽丛分离后进行消毒，然后将不定芽的形态学下端置于生根促进液中处理，定植于育苗盘中，于温室中进行瓶外不定根诱导培养获得完整艾草再生植株；其中，所述生根促进液为浓度为500～2000mg/l的kiba水溶液、浓度为500～1000mg/l的iba水溶液、浓度为500～1000mg/l的naa水溶液、浓度为500～1000mg/l的iaa水溶液中的一种。
14、优选地，育苗盘为装有营养土与蛭石混合基质的育苗盘。
15、优选地，s4具体包括以下步骤：将s3中伸长的不定芽从芽丛分离后用流水冲洗，然后用0.05％～0.2％(w/v)高锰酸钾溶液消毒5～10min后，吸干表面水分，将不定芽的形态学下端置于生根促进液中处理5～10s，然后将形态学下端定植于装有营养土与蛭石混合基质的育苗盘中，于温室中进行瓶外不定根诱导培养获得完整艾草再生植株；其中，所述生根促进液为浓度为500～2000mg/l的kiba水溶液、浓度为500～1000mg/l的iba水溶液、浓度为500～1000mg/l的naa水溶液、浓度为500～1000mg/l的iaa水溶液中的一种。
16、优选地，所述营养土与蛭石的体积比为2：1。
17、优选地，在s2、s3和s4中，培养条件均为：温度为25±2℃，光照强度为2500～3000lx，光周期为14/10h(光照/黑暗)。
18、本专利技术的优点在于：
19、本专利技术运用植物组织培养技术提供的一种艾草茎尖高效再生的方法，具有以下突出优点：其一，茎尖为取材于艾草优良株系当年生顶芽，繁育过程采用茎尖直接诱导不定芽，能保持母本植株的种质特性，可以实现对艾草优良单株的快速繁育；其二，伸长的丛生芽直接采用瓶外生根技术，实现了生根过程和驯化移栽的同步化，在提高再生植株移栽成活率的同时，降低了育苗成本。其三，再生效率高，丛生芽诱导率最高达100％，平均每个外植体增殖后最高可产生11.3个不定芽，且不定芽瓶外生根率最高达到100％，为优良艾草株系的种质保存、规模化繁殖、脱毒复壮及后期的遗传改良提供了重要的技术支撑。
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1.一种艾草茎尖高效再生的方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的艾草茎尖高效再生的方法，其特征在于：S1具体包括以下步骤：将宛艾优良健康株系的当年生顶芽经流水冲洗10～20min后，于无菌操作台中，用无菌水冲洗3～5遍，再用75％乙醇进行表面消毒15～20s，然后用无菌水冲洗3～5遍，再用75％乙醇进行表面消毒15～20s，继续用无菌水冲洗3～5遍后，再用0.1％(w/v)的升汞溶液消毒1～3min，然后用无菌水冲洗4～6遍，用无菌滤纸吸干表面水分后，用镊子剥取1～3mm的茎尖分生组织作为外植体材料。
3.根据权利要求1所述的艾草茎尖高效再生的方法，其特征在于：在S2中，所述的不定芽诱导培养基为添加有0.01～0.5mg/L TDZ，3.0％(w/v)蔗糖，0.7％(w/v)琼脂的WPM培养基。
4.根据权利要求1所述的艾草茎尖高效再生的方法，其特征在于：在S2中，所述不定芽的诱导培养的时间为4周。
5.根据权利要求1所述的艾草茎尖高效再生的方法，其特征在于：在S3中，所述不定芽增殖培养基为添加有0.1～1.0m
6.根据权利要求1所述的艾草茎尖高效再生的方法，其特征在于：在S3中，所述不定芽的增殖和伸长培养的时间为4周。
7.根据权利要求1所述的艾草茎尖高效再生的方法，其特征在于：S4具体包括以下步骤：将S3中伸长的不定芽从芽丛分离后进行消毒，然后将不定芽的形态学下端置于生根促进液中处理，处理后定植于育苗盘中，于温室中进行瓶外不定根诱导培养获得完整艾草再生植株；其中，所述生根促进液为浓度为500～2000mg/L的KIBA水溶液、浓度为500～1000mg/L的IBA水溶液、浓度为500～1000mg/L的NAA水溶液、浓度为500～1000mg/L的IAA水溶液中的一种。
8.根据权利要求1所述的艾草茎尖高效再生的方法，其特征在于：S4具体包括以下步骤：将S3中伸长的不定芽从芽丛分离后用流水冲洗，然后用0.05％～0.2％(w/v)高锰酸钾溶液消毒5～10min后，吸干表面水分，将不定芽的形态学下端置于生根促进液中处理5～10s，然后将形态学下端定植于装有营养土与蛭石混合基质的育苗盘中，于温室中进行瓶外不定根诱导培养获得完整艾草再生植株；其中，所述生根促进液为浓度为500～2000mg/L的KIBA水溶液、浓度为500～1000mg/L的IBA水溶液、浓度为500～1000mg/L的NAA水溶液、浓度为500～1000mg/L的IAA水溶液中的一种。
9.根据权利要求8所述的艾草茎尖高效再生的方法，其特征在于：所述营养土与蛭石的体积比为2：1。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的艾草茎尖高效再生的方法，其特征在于：在S2、S3和S4中，培养条件均为：温度为25±2℃，光照强度为2500～3000lx，光周期为14/10h(光照/黑暗)。
...【技术特征摘要】
1.一种艾草茎尖高效再生的方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的艾草茎尖高效再生的方法，其特征在于：s1具体包括以下步骤：将宛艾优良健康株系的当年生顶芽经流水冲洗10～20min后，于无菌操作台中，用无菌水冲洗3～5遍，再用75％乙醇进行表面消毒15～20s，然后用无菌水冲洗3～5遍，再用75％乙醇进行表面消毒15～20s，继续用无菌水冲洗3～5遍后，再用0.1％(w/v)的升汞溶液消毒1～3min，然后用无菌水冲洗4～6遍，用无菌滤纸吸干表面水分后，用镊子剥取1～3mm的茎尖分生组织作为外植体材料。
3.根据权利要求1所述的艾草茎尖高效再生的方法，其特征在于：在s2中，所述的不定芽诱导培养基为添加有0.01～0.5mg/l tdz，3.0％(w/v)蔗糖，0.7％(w/v)琼脂的wpm培养基。
4.根据权利要求1所述的艾草茎尖高效再生的方法，其特征在于：在s2中，所述不定芽的诱导培养的时间为4周。
5.根据权利要求1所述的艾草茎尖高效再生的方法，其特征在于：在s3中，所述不定芽增殖培养基为添加有0.1～1.0mg/l tdz，0.1～1.0mg/l zt，0.1～1.0mg/l ga3，3.0％(w/v)蔗糖和0.7％(w/v)琼脂的wpm培养基。
6.根据权利要求1所述的艾草茎尖高效再生的方法，其特征在于：在s3中，所述不定芽的增殖和伸长培养的时间为4周。
7.根据权利要求1所述的艾草茎尖高效再生的方法，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：侯金艳，吴丽芳，王萍，苏鹏飞，王大成，
申请(专利权)人：中国科学院合肥物质科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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