一种dCE-KOD DNA聚合酶及其制备方法和应用技术

技术编号：40958538 阅读：27 留言：0更新日期：2024-04-18 20:36

本发明专利技术公开了一种dCE‑KOD DNA聚合酶及其制备方法和应用，所述dCE‑KOD DNA聚合酶通过在KOD DNA聚合酶蛋白序列N端融合表达大肠杆菌素CE的突变体dCE得到，其中dCE为dCE2、dCE7、dCE8和dCE9中任一。相较于天然KOD DNA聚合酶，dCE‑KOD DNA聚合酶的持续合成能力得到有效提高且对模板具有更高的敏感性，故本发明专利技术提供的dCE‑KOD DNA聚合酶在基因克隆、长片段的高保真性扩增以及PCR诊断中有着广阔的应用前景。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学和蛋白质工程领域，具体涉及一种dce-kod dna聚合酶及其制备方法和应用。

技术介绍

1、聚合酶链反应(polymerase chain reaction,pcr)是近几十年来普及最迅速，应用最广泛的分子生物学技术。pcr是一种体外模拟体内的dna复制过程，从而大量扩增特定dna片段的基因操作技术。在模板dna、引物、dntp存在的条件下，dna聚合酶利用反应温度的循环变化，能够在2-3小时之内实现目的序列的指数级扩增。pcr技术广泛应用于分子克隆、基因组测序、法医学鉴定以及遗传病、传染病的诊断等方面，推动了精准医疗领域的发展，加速了基因与遗传病相关性的研究。但pcr技术也面临很多方面的局限性，例如血液和组织样本不能直接用于pcr，需要进一步提取dna作为扩增模板，同时pcr扩增的长度和扩增速度方面也有待进一步提高，这些需求驱使人们不断发现和改造dna聚合酶。

2、1988年，rand k saiki首次将从栖热水生菌(thermus aquaticus yt-1)来源的耐高温taq dna聚合酶...

【技术保护点】

1.一种dCE-KOD DNA聚合酶，其特征在于，在KOD DNA聚合酶蛋白序列N端融合表达大肠杆菌素CE的突变体dCE，所述dCE的基因序列如SEQ ID NO.1～4任一所示。

2.根据权利要求1所述的dCE-KOD DNA聚合酶，其特征在于，所述KOD DNA聚合酶来源于Thermococcus kodakarensis KOD1菌株。

3.根据权利要求2所述的dCE-KOD DNA聚合酶，其特征在于，所述dCE-KOD DNA聚合酶为以下任一：

4.编码权利要求1～3任一项所述dCE-KOD DNA聚合酶的基因。