【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种多肽的制作方法、标签、表达载体、多肽的评价方法、核酸展示文库的制作方法及筛选方法。
技术介绍
1、当通过基因工程表达靶蛋白质时，有一种将被称为标签的分子量相对低的多肽附加到靶蛋白质的末端的技术。标签利用于靶蛋白质的检测、分离、固定化等中。
2、正在研究利用标签来增大靶蛋白质的表达量。
3、在国际公开第2016/204198号中公开了由skik的氨基酸序列构成的标签(序列号107)作为增大靶蛋白质的表达量的标签及在靶蛋白质的n末端附加标签来表达的方法。
4、在protein expression and purification 2010；74:248-256中记载了在紧接着起始密码子之后编入ala或ser来增大蛋白质的表达量的内容。
5、为了增大蛋白质的表达量，还在研究基因的碱基序列的最佳化。
6、在science 2013；342:475-479中记载了在蛋白质的n末端使用希少密码子可增加大肠杆菌中的表达量的内容。
7、在protein expression and purification 2010；70:224-230中记载了通过减小hpdf基因的gc含量及去除希少密码子来增加大肠杆菌中的人肽键去甲基化酶(hpdf)的表达量的内容。
技术实现思路
1、专利技术要解决的技术课题
2、本专利技术的实施方式涉及提供高生产率的多肽的制作方法、增大多肽的表达量的标签及表达载体、效率良好
3、用于解决技术课题的手段
4、用于解决课题的具体方案包括以下方式。
5、＜1＞一种多肽的制作方法，其是包括使多肽表达为带标签多肽的步骤的多肽的制作方法，其包括从核酸表达带标签多肽的步骤，所述核酸具有：
6、紧接着起始密码子之后配置且编码由序列号1的氨基酸序列构成的标签的碱基序列；及
7、在编码标签的碱基序列的下游以框内形式配置且编码多肽的碱基序列。
8、＜2＞根据＜1＞所述的多肽的制作方法，其中，
9、标签为由序列号2的氨基酸序列构成的标签。
10、＜3＞根据＜1＞所述的多肽的制作方法，其中，
11、标签为由序列号3的氨基酸序列构成的标签。
12、＜4＞根据＜1＞至＜3＞中任一项所述的多肽的制作方法，其中，
13、通过无细胞肽合成系统或大肠杆菌从核酸表达带标签多肽。
14、＜5＞根据＜1＞至＜4＞中任一项所述的多肽的制作方法，其中，
15、多肽包含非天然氨基酸。
16、＜6＞一种标签，其由序列号1的氨基酸序列构成。
17、＜7＞一种标签，其由序列号2的氨基酸序列构成。
18、＜8＞一种标签，其由序列号3的氨基酸序列构成。
19、＜9＞根据＜6＞至＜8＞中任一项所述的标签，其用于通过无细胞肽合成系统或大肠杆菌使多肽表达为带标签多肽。
20、＜10＞根据＜9＞所述的标签，其中个，多肽包含非天然氨基酸。
21、＜11＞一种表达载体，其具有：
22、紧接着起始密码子之后配置且编码由序列号1的氨基酸序列构成的标签的碱基序列；及
23、在编码标签的碱基序列的下游以框内形式配置且编码多肽的碱基序列。
24、＜12＞根据＜11＞所述的表达载体，其中，
25、标签为由序列号2的氨基酸序列构成的标签。
26、＜13＞根据＜11＞所述的表达载体，其中，
27、标签为由序列号3的氨基酸序列构成的标签。
28、＜14＞根据＜11＞至＜13＞中任一项所述的表达载体，其以在无细胞肽合成系统或大肠杆菌中表达的方式设计。
29、＜15＞一种多肽的评价方法，其包括：
30、通过＜1＞至＜5＞中任一项所述的多肽的制作方法制作多肽的步骤；及
31、评价相对于目标物质的多肽的结合性的步骤。
32、＜16＞一种核酸展示文库的制作方法，其包括从核酸表达带标签多肽并制作核酸-多肽连接体的步骤，所述核酸具有：
33、紧接着起始密码子之后配置且编码由序列号1的氨基酸序列构成的标签的碱基序列；及
34、在编码标签的碱基序列的下游以框内形式配置且编码多肽的碱基序列。
35、＜17＞根据＜16＞所述的核酸展示文库的制作方法，其中，
36、标签为由序列号2的氨基酸序列构成的标签。
37、＜18＞根据＜16＞所述的核酸展示文库的制作方法，其中，
38、标签为由序列号3的氨基酸序列构成的标签。
39、＜19＞根据＜16＞至＜18＞中任一项所述的核酸展示文库的制作方法，其中，
40、制作核酸-多肽连接体的步骤包括：
41、制作mrna-多肽连接体的步骤；及
42、反向转录mrna-多肽连接体的mrna并制作cdna-多肽连接体的步骤。
43、＜20＞根据＜16＞至＜19＞中任一项所述的核酸展示文库的制作方法，其中，
44、核酸-多肽连接体中的核酸及多肽通过嘌呤霉素连接体连接。
45、＜21＞根据＜16＞至＜20＞中任一项所述的核酸展示文库的制作方法，其中，
46、多肽包含非天然氨基酸。
47、＜22＞根据＜16＞至＜21＞中任一项所述的核酸展示文库的制作方法，其中，
48、多肽包含具有第一官能团的氨基酸及具有与第一官能团共价结合的第二官能团的氨基酸，并且在具有第一官能团的氨基酸与具有第二官能团的氨基酸之间介入有2个～28个氨基酸，
49、所述核酸展示文库的制作方法进一步包括核酸-多肽连接体的多肽通过第一官能团及第二官能团的共价结合环化的步骤。
50、＜23＞一种筛选方法，其包括：
51、通过＜16＞至＜22＞中任一项所述的核酸展示文库的制作方法制作核酸展示文库的步骤；及
52、从核酸展示文库选择具有目标活性的核酸-多肽连接体并鉴定所选择的核酸-多肽连接体的核酸的碱基序列的步骤。
53、专利技术效果
54、根据本专利技术的实施方式，可提供高生产率的多肽的制作方法、增大多肽的表达量的标签及表达载体、效率良好的多肽的评价方法、表达量多且表达量的不均匀少的核酸展示文库的制作方法及可靠性高的筛选方法。
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1.一种多肽的制作方法，其是包括使多肽表达为带标签多肽的步骤的多肽的制作方法，所述制作方法包括从核酸表达带标签多肽的步骤，所述核酸具有：
2.根据权利要求1所述的多肽的制作方法，其中，
3.根据权利要求1所述的多肽的制作方法，其中，
4.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽的制作方法，其中，
5.根据权利要求1所述的多肽的制作方法，其中，
6.一种标签，其由序列号1的氨基酸序列构成，
7.一种标签，其由序列号2的氨基酸序列构成，
8.一种标签，其由序列号3的氨基酸序列构成，
9.根据权利要求6至8中任一项所述的标签，其用于通过无细胞肽合成系统或大肠杆菌使多肽表达为带标签多肽。
10.根据权利要求9所述的标签，其中，
11.一种表达载体，其具有：
12.根据权利要求11所述的表达载体，其中，
13.根据权利要求11所述的表达载体，其中，
14.根据权利要求11至13中任一项所述的表达载体，其是以在无细胞肽合成系统或大肠杆菌中表达
15.一种多肽的评价方法，其包括：
16.一种核酸展示文库的制作方法，其包括：
17.根据权利要求16所述的核酸展示文库的制作方法，其中，
18.根据权利要求16所述的核酸展示文库的制作方法，其中，
19.根据权利要求16所述的核酸展示文库的制作方法，其中，
20.根据权利要求16所述的核酸展示文库的制作方法，其中，
21.根据权利要求16所述的核酸展示文库的制作方法，其中，
22.根据权利要求16所述的核酸展示文库的制作方法，其中，
23.一种筛选方法，其包括：
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种多肽的制作方法，其是包括使多肽表达为带标签多肽的步骤的多肽的制作方法，所述制作方法包括从核酸表达带标签多肽的步骤，所述核酸具有：
2.根据权利要求1所述的多肽的制作方法，其中，
3.根据权利要求1所述的多肽的制作方法，其中，
4.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽的制作方法，其中，
5.根据权利要求1所述的多肽的制作方法，其中，
6.一种标签，其由序列号1的氨基酸序列构成，
7.一种标签，其由序列号2的氨基酸序列构成，
8.一种标签，其由序列号3的氨基酸序列构成，
9.根据权利要求6至8中任一项所述的标签，其用于通过无细胞肽合成系统或大肠杆菌使多肽表达为带标签多肽。
10.根据权利要求9所述的标签，其中，
11.一种表达载体，其具有：
12.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：松井健，富永让，木原史织，芳坂贵弘，渡边贵嘉，
申请(专利权)人：富士胶片株式会社，
类型：发明
国别省市：
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