【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学领域，具体的涉及一种非离体鉴定牡丹休眠解除相关基因的方法及基因psemf2和应用。
技术介绍
1、成年牡丹芽属混合芽，每年9月下旬至10月中旬完成形态分化，并逐渐进入内休眠状态，外被发达的鳞片。通常情况下，经过冬季低温可诱导休眠解除，翌年春季芽萌动，形成枝条并顶端开花。暖冬年份或者向南方引种，都可能因为休眠解除不彻底影响开花时间和开花质量，这是影响牡丹产业发展的重要问题。同时，春节催花是牡丹产业的主要内容之一，提前解除芽休眠是促成栽培成功的关键。深入理解芽内休眠解除机理是实现牡丹开花人工调控的理论基础。建立高效的遗传转化技术，筛选、鉴定休眠调控相关基因，是进行机理解析的关键。牡丹童期一般3-5年，且组培再生体系尚不完善，传统基因功能分析手段短期内较难实现。
2、现有技术结合组织培养和瞬时转化，建立了一种离体鉴定休眠解除相关基因功能的技术体系。为了降低污染率，该方法需剥除鳞片，导致所有芽都可在培养基上萌动生长，无法通过萌动率说明候选基因与休眠解除间直接的关系。embryonicflower(emf1和emf2)是植物中一类主要的抑制开花基因。拟南芥中，转反义emf1基因的植株，营养生长期显著缩短，花期提前，而emf2基因的反义植株直接跳过营养生长，种子萌发后立即开花。其中emf2属于pcg蛋白，是polycomb repressive complex 2(prc2)的重要组分。目前，尚未知emf2是否调控芽内休眠解除。
技术实现思路
1、本专利技术
2、本专利技术是通过如下技术方案来实现的：
3、一种非离体鉴定牡丹休眠解除相关基因的方法，所述方法通过构建目标基因超表达载体转化农杆菌eha105，剪取低温处理5-10天带顶芽的牡丹休眠枝条，利用农杆菌侵染牡丹花芽，侵染后的花芽嫁接在‘凤丹’或芍药砧木上，黑暗条件共培养2-4d，转移到20-25℃温室培养，5-10天检测目标基因表达量，7-35天统计花芽萌动率，分析超表达目标基因是否促进了牡丹花芽快速萌动，并判断该基因是否调控休眠解除。
4、作为优选的实施方式之一，低温处理是指将牡丹放在0-7℃处理。
5、作为优选的实施方式之一，将构建的含有目标基因的农杆菌菌株(eha105)，在lb(卡那霉素+利福平)培养基中28℃，200rpm过夜扩摇；将扩摇好的菌液按1:50稀释到lb(卡那霉素+利福平)培养基中28℃，200rpm扩摇od600≈0.6-0.8，离心去上清，菌体沉淀后用侵染缓冲液悬浮调整od600≈0.6-0.8，室温静置4-6h，获得侵染液。
6、作为优选的实施方式之一，所述的侵染为牡丹顶芽朝下放入侵染液中，进行真空抽吸侵染，-0.07mpa，10min，缓慢放气，重复一次。
7、本专利技术还提供一种解除牡丹休眠基因psemf2，所述基因的核苷酸序列如seq idno.1。
8、本专利技术还提供psemf2基因在解除牡丹休眠中的应用，所述的应用为通过超表达psemf2基因，解除牡丹休眠，所述psemf2基因的核苷酸序列为seq id no.1。
9、本专利技术与现有技术相比的有益效果：本专利技术创造性的将瞬时转化和嫁接结合起来，根据转基因株系的萌动率鉴定休眠解除相关基因，避开了牡丹组培再生困难、童期长、离体条件下剥鳞片后无法统计萌动率等问题，实现了快速鉴定休眠解除相关基因，并为牡丹花期调控分子育种提供了psemf2基因。
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1.一种非离体鉴定牡丹休眠解除相关基因的方法，其特征在于，所述方法通过构建目标基因超表达载体转化农杆菌EHA105，剪取低温处理5-10天带顶芽的牡丹休眠枝条，利用农杆菌侵染牡丹花芽，侵染后的花芽嫁接在‘凤丹’或芍药砧木上，黑暗条件共培养2-4d，转移到20-25℃温室培养，5-10天检测目标基因表达量，7-35天统计花芽萌动率，分析超表达目标基因是否促进了牡丹花芽快速萌动，并判断该基因是否调控休眠解除。
2.根据权利要求1所述的一种非离体鉴定牡丹休眠解除相关基因的方法，其特征在于，低温处理是指将牡丹放在0-7℃处理。
3.根据权利要求1所述的一种非离体鉴定牡丹休眠解除相关基因的方法，其特征在于，将构建的含有目标基因的农杆菌菌株EHA105，在LB培养基中28℃，200rpm过夜扩摇；将扩摇好的菌液按1:50稀释到LB培养基中28℃，200rpm扩摇OD600≈0.6-0.8，离心去上清，菌体沉淀后用侵染缓冲液悬浮调整OD600≈0.6-0.8，室温静置4-6h，获得侵染液。
4.根据权利要求1所述的一种非离体鉴定牡丹休眠解除相关基因的方法，其
5.一种解除牡丹休眠基因PsEMF2，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1。
6.PsEMF2基因在解除牡丹休眠中的应用，其特征在于，所述的应用为通过超表达PsEMF2基因，解除牡丹休眠，所述PsEMF2基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。
...【技术特征摘要】
1.一种非离体鉴定牡丹休眠解除相关基因的方法，其特征在于，所述方法通过构建目标基因超表达载体转化农杆菌eha105，剪取低温处理5-10天带顶芽的牡丹休眠枝条，利用农杆菌侵染牡丹花芽，侵染后的花芽嫁接在‘凤丹’或芍药砧木上，黑暗条件共培养2-4d，转移到20-25℃温室培养，5-10天检测目标基因表达量，7-35天统计花芽萌动率，分析超表达目标基因是否促进了牡丹花芽快速萌动，并判断该基因是否调控休眠解除。
2.根据权利要求1所述的一种非离体鉴定牡丹休眠解除相关基因的方法，其特征在于，低温处理是指将牡丹放在0-7℃处理。
3.根据权利要求1所述的一种非离体鉴定牡丹休眠解除相关基因的方法，其特征在于，将构建的含有目标基因的农杆菌菌株eha105，在lb培养基中28℃，...
【专利技术属性】
技术研发人员：盖树鹏，张玉喜，高林强，袁延超，盖伟玲，刘春英，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：
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