【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药领域，具体的说，涉及一种利用超高效液相色谱指纹图谱评价药用大蒜品质的方法。
技术介绍
1、大蒜(allium sativum l.)又称作胡蒜、葫、麝香草等，是百合科植物大蒜的地下鳞茎部分，味辛，性温，归脾、胃、肺经，原产于伊朗东北部和中亚地区，在全球范围内被用来制作各种菜肴，是我国现存最早记载的可药食两用的作物之一。因其杀菌、抑菌作用是植物药材中最强者，被誉为“地里长出的青霉素”和“天然广谱抗菌药物”。
2、符合药典标准的大蒜，被称作药用大蒜。由于大蒜的生长地域差异，作为中药材使用的大蒜存在质量控制不稳定、不够准确、且难以进行定性和定量分析等问题。因此，为提高其药用质量，迫切需要优化该药材的质量控制方法。
3、因此，本专利技术提供一种首次利用uplc技术，对药用大蒜药材指纹图谱进行研究，为药用大蒜药材质量控制和评价提供了新的技术方法。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种利用超高效液相色谱指纹图谱评价药用大蒜品质的方法，以及由此方法得到的药用大蒜药材标准指纹图谱及其在药用大蒜药材优化筛选、品质的鉴别和控制中的应用。根据本专利技术的构建方法解决了药用大蒜药材的成分分析中不能有效地反映和控制药用大蒜的整体质量的问题，弥补了现有质量控制技术的不足。
2、根据本专利技术的一个方面，提供一种药用大蒜药材超高效液相色谱指纹图谱的构建方法，包括：
3、步骤一：供试品溶液的制备：
4、取去皮鲜蒜约10.0g，精密称重，
5、步骤二：混合对照品溶液的制备：
6、分别精密称取适量氨基酸对照品，置于同一25ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，作为对照品溶液(表1)。
7、表1混标中各氨基酸浓度
8、
9、步骤三：样品溶液的衍生化反应：
10、衍生化试剂配制：三乙胺乙腈溶液(1mol·l-1)：称取三乙胺13.5ml，置100ml容量瓶，加乙腈稀释并定容刻度，摇匀即得。异硫氰酸苯酯乙腈溶液(0.1mol·l-1)：称取异硫氰酸苯酯1.2ml，置100ml容量瓶，加乙腈稀释并定容刻度，摇匀即得。
11、衍生化反应：准确移取对照品溶液(或供试品溶液或超纯水溶液)2ml，分别加入0.1mol·l-1异硫氰酸苯酯乙腈溶液1ml，1mol·l-1三乙胺乙腈溶液1ml，振摇混匀，室温放置30min，加入正己烷4ml，充分振摇混匀后，离心(6000r·min-1，25℃)5min，弃上层溶液，再次加入正己烷4ml萃取，离心(6000r·min-1，25℃)5min，吸取下层溶液，用0.45μm滤膜滤过，即得对照品衍生化溶液(或供试品衍生化溶液或阴性对照衍生化溶液)。
12、步骤四：确定uplc的色谱条件：
13、ace excel 1.7superc18色谱柱(100mm×2.1mm，1.7μm)；柱温：25～40℃；流速：0.1～0.6ml·min-1；测定波长：210～310nm；进样体积：0.5～2μl；流动相：流动相a：称取8.2g三水醋酸钠，置1000ml烧杯中，加超纯水600ml，搅拌溶解，以冰醋酸调ph值至6.5，加乙腈45ml，混匀，用0.45μm滤膜过滤；流动相b为甲醇：乙腈：水＝20：60：20(v/v/v)；采用梯度洗脱方式洗脱，梯度洗脱程序：0min→2min～13.6min→15.2min→16.8min→18min→20min，流动相b(甲醇：乙腈：水＝20：60：20(v/v/v))10体积％→12体积％～65体积％→100体积％→100体积％→0体积％→0体积％。
14、步骤五：超高效液相色谱测定：
15、分别精密吸取上述步骤三中的供试品、对照品及阴性对照衍生化溶液，注入超高效液相色谱仪测定，记录色谱图；
16、步骤六：建立指纹图谱：
17、将对照品溶液色谱图和供试品溶液色谱图导入指纹图谱软件，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得药用大蒜药材的指纹图谱，比较待测样品的色谱图和标准指纹图谱相似度。
18、根据本专利技术的利用超高效液相色谱指纹图谱评价药用大蒜品质的方法或者获得的标准指纹图谱与现有技术相比具有下述显著的优点：
19、(1)本专利技术首次利用uplc技术，对药用大蒜药材进行指纹图谱研究，为药用大蒜药材质量控制提供了新的分析方法。
20、(2)将药用大蒜药材作为整体对待，通过比较其共有峰，可以找出不同药材之间的细微差异，适用于药用大蒜药材真伪、产地和品质的鉴别和控制。
21、(3)本专利技术色谱条件容易实现，精密度高，而且其稳定性和重现性较好，本专利技术采用的检测波长出峰较多，反映的信息完全。
22、(4)同时本专利技术的检测方法以蒜氨酸为参比峰，确定并指认了18个共有峰，指纹图谱组成丰富全面。
23、(5)与传统的薄层色谱指纹图谱和hplc方法相比，在不影响整体效果的前提下，大大缩短了在线分析时间，节省了材料成本和时间成本。
24、中药指纹图谱是指中药样本经光谱或色谱等现代分析技术得到的中药各组分群体的特征图谱，目前已成为国内外公认的鉴别中药品种和评价中药质量的最有效手段之一。目前最新的指纹图谱测试方法之一是超高效液相色谱(ultra performance liquidchromatography,uplc)，这是最近几年出现的一种新型液相色谱技术，采用1.7μm的小粒径色谱柱填料，不仅使柱效得以提高，而且在较宽的流速范围内柱效保持恒定，从而有利于通过提高流动相的流速而缩短分析时间，提高分析通量。相对于常规高效液相色谱(highperformance liquid chromatography,hplc)而言，uplc有更好的分离效率、峰容量以及灵敏度。但是，在药用大蒜药材分析
，还仍未有用uplc对药用大蒜药材进行质量控制分析以及报道其指纹图谱。
【技术保护点】
1.一种利用超高效液相色谱指纹图谱评价药用大蒜品质的方法，其特征在于，包括一下步骤：
2.根据权利要求1所述的利用超高效液相色谱指纹图谱评价药用大蒜品质的方法，其特征在于，供试品溶液的制备按下述方法进行：
3.根据权利要求1所述的利用超高效液相色谱指纹图谱评价药用大蒜品质的方法，其特征在于，步骤四所述的色谱条件为ACE Excel SuperC18(100mm×2.1mm，1.7μm)色谱柱；柱温30℃，流速0.2mL·min-1；测定波长为254nm；进样体积：0.8μL；流动相A：称取8.2g三水醋酸钠，置1000mL烧杯中，加超纯水600mL，搅拌溶解，以冰醋酸调pH值至6.5，加乙腈45mL，混匀，用0.45μm滤膜过滤；流动相B为甲醇：乙腈：水＝20：60：20(V/V/V)，采用梯度洗脱。
4.根据权利要求1所述的利用超高效液相色谱指纹图谱评价药用大蒜品质的方法，其特征在于，步骤六中的指纹图谱软件为《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》。
5.根据权利要求1～4所述的利用超高效液相色谱指纹图谱评价药用大蒜品质的方法，其特征在
6.根据权利要求5所述的药用大蒜药材指纹图谱，其特征在于，包括18个共有峰，其中以10号峰蒜氨酸为参比峰S，各共有峰相对保留时间如下：
7.一种药用大蒜药材的标准指纹图谱，其通过权利要求1～6中任一项所述的利用超高效液相色谱指纹图谱评价药用大蒜品质的方法获得。
8.一种药用大蒜药材的标准指纹图谱，其特征在于：为超高效液相色谱UPLC的指纹图谱，并且包含18个共有特征峰，以10号峰蒜氨酸为参照峰，其相对保留时间分别为：0.19(±5％)、0.47(±5％)、0.50(±5％)、0.59(±5％)、0.68(±5％)、0.73(±5％)、0.76(±5％)、0.79(±5％)、0.94(±5％)、1.00(±5％)、1.10(±5％)、1.17(±5％)、1.20(±5％)、1.31(±5％)、1.66(±5％)、1.68(±5％)、1.72(±5％)、1.76(±5％)。
9.根据权利要求7或8所述的药用大蒜药材的标准指纹图谱在药用大蒜药材以及含药用大蒜药材的制剂的检测中的应用。
10.一种评价药用大蒜品质的方法，其特征在于，所述方法包括将待测药用大蒜药材的指纹图谱与权利要求书7或8所述的药用大蒜药材的标准指纹图谱相比较，相似度大于0.85为品质较佳，所述待测药用大蒜的指纹图为用UPLC得到的指纹图谱。
...【技术特征摘要】
1.一种利用超高效液相色谱指纹图谱评价药用大蒜品质的方法，其特征在于，包括一下步骤：
2.根据权利要求1所述的利用超高效液相色谱指纹图谱评价药用大蒜品质的方法，其特征在于，供试品溶液的制备按下述方法进行：
3.根据权利要求1所述的利用超高效液相色谱指纹图谱评价药用大蒜品质的方法，其特征在于，步骤四所述的色谱条件为ace excel superc18(100mm×2.1mm，1.7μm)色谱柱；柱温30℃，流速0.2ml·min-1；测定波长为254nm；进样体积：0.8μl；流动相a：称取8.2g三水醋酸钠，置1000ml烧杯中，加超纯水600ml，搅拌溶解，以冰醋酸调ph值至6.5，加乙腈45ml，混匀，用0.45μm滤膜过滤；流动相b为甲醇：乙腈：水＝20：60：20(v/v/v)，采用梯度洗脱。
4.根据权利要求1所述的利用超高效液相色谱指纹图谱评价药用大蒜品质的方法，其特征在于，步骤六中的指纹图谱软件为《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》。
5.根据权利要求1～4所述的利用超高效液相色谱指纹图谱评价药用大蒜品质的方法，其特征在于，包括18个共有峰，均指认出，分别为：峰1为天冬氨酸，峰2为谷氨酸，峰3为丝氨酸，峰4为甘氨酸，峰5为组氨酸，峰6为精氨酸，峰7为苏氨酸，峰8为丙氨酸，峰9为脯氨酸，峰10为蒜氨酸，峰11为酪氨酸，峰12为缬氨酸，峰13为蛋氨酸，峰14为胱氨酸，峰...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐辉，王珍琪，张晨晨，王翔飞，马玲，任立才，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：
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