【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肿瘤细胞培养，特别是涉及一种神经内分泌型前列腺癌培养基和培养神经内分泌型前列腺癌类器官的方法。
技术介绍
1、各种临床前模型已被用于推进pca研究。大多数研究依赖于使用在二维(2d)培养物中生长或在免疫功能低下的动物中移植的永生化细胞系。尽管这些pca细胞系很容易获得且易于使用，但只有少数存在，并且随着其培养时间的延长，肿瘤细胞的性质在随着传代的次数增加，肿瘤细胞异质性不断加大，对实验结果的有明显的影响。
2、目前，随着前列腺癌(pca)临床和分子图谱发现的进展，在临床中实施以精准医学为指导的治疗测试已成为新的趋势。患者衍生组织器官(pdos)是一种三维(3d)组织培养物，可以通过对pca建模来预测疗效可靠的治疗反应，验证临床药物治疗的有效性。
3、值得注意的是，大多数报告pca pdo成功培养的研究都来自转移性和晚期pca标本。虽然一些研究报告了从管腔和基底细胞建立pca pdo，但通过富集csc成功生成长期繁殖类器官是有限的。
4、前列腺癌患者通常使用促性腺激素释放激素激动剂或拮抗剂(例如亮丙瑞林)来抑制睾丸雄激素分泌。然而，治疗是姑息性的，如果有足够的时间，患者会进展为去势抵抗crpc(castration-resistant prostate cance)。这种进展主要是由前列腺癌细胞通过遗传变化规避adt引起的，即使雄激素水平低，也可以恢复ar信号传导。
5、神经内分泌型前列腺癌由于上述独特的生物学特性，并且在临床治疗中存在极大的困难，因此具有十分重要的研究
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种神经内分泌型前列腺癌培养基和培养神经内分泌型前列腺癌类器官的方法，本专利技术通过在培养基中添加恩杂鲁胺和，更加符合nepc患者肿瘤的体内微环境，同时可以达到更好的培养效果，提高肿瘤的生长速度。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、本专利技术提供了一种神经内分泌型前列腺癌培养基，以dmem/f12为基础培养基，含有10μmol/ml的恩杂鲁胺和ldn193189 100nm。
4、优选的，还包括：体积百分含量为5％的胎牛血清、青霉素10ku/ml、链霉素10mg/ml、noggin 500ng/ml、r-spondin 1 500ng/ml、wnt3a 500ng/ml、fgf10100ng/ml、fgf725ng/ml、fgf2 12.5ng/ml、体积百分含量为2％的b27、a83-015μm、n-乙酰半胱氨酸1.25mm和烟酰胺10mm。
5、本专利技术还提供了一种培养神经内分泌型前列腺癌类器官的方法，包括以下步骤：
6、1)将前列腺癌组织进行消化、过滤，得到消化液；
7、2)除去所述步骤1)得到的消化液中的红细胞，重悬离心，得到细胞沉淀；
8、3)将所述步骤2)得到的细胞沉淀与基质胶混合，得到混合物；
9、4)将所述步骤2)得到的混合物铺于培养板中，先正面静置再倒扣静置，再添加上述技术方案所述的神经内分泌型前列腺癌培养基培养14d以上。
10、优选的，所述步骤1)使用iv型胶原酶和rock抑制剂消化前列腺癌组织；
11、所述iv型胶原酶(c9891；sigma aldrich)的与pbs缓冲液的质量比为1:100；
12、所述rock抑制剂的种类包括(y-27632 2hcl selleck；s1049)，所述rock抑制剂与pbs缓冲液的质量比为为1:1000。
13、优选的，所述步骤1)前列腺癌组织的规格为1～2mm。
14、优选的，所述步骤1)消化的条件包括：温度为37℃，每隔5min进行1次涡旋震荡，直至消化完全；
15、使用100目细胞筛过滤。
16、优选的，所述步骤2)细胞沉淀中细胞含量为300个/μl。
17、优选的，所述步骤3)细胞沉淀与基质胶的质量比为200:1。
18、优选的，所述步骤4)以25μl/滴将所述混合物铺于培养板的孔中，每孔中混合物的添加量为1ml；
19、所述正面静置的时间为3min，所述倒扣静置的时间为3min。
20、优选的，所述步骤4)所述培养的条件包括：温度为37℃，5％co2。
21、本专利技术的有益效果为：
22、普通的前列腺癌类器官培养基普遍添加双氢睾酮。由于大部分神经内分泌性前列腺癌患者肿瘤细胞会通过ar扩增，ar-v7变异等多种机制，提高自身对雄激素的利用或通过自分泌雄激素使其对arpis(androgen receptor pathway inhibitors)耐药。因此为了更好的模拟患者肿瘤组织内的微环境，本专利技术在培养基中去除常规添加的双氢睾酮(dht)，添加了恩杂鲁胺(enzalutamide)更加符合nepc患者肿瘤的体内微环境；添加了ldn193189，抑制bmp信号转导促进恩杂鲁胺耐药细胞的存活，同时可以达到更好的培养效果，提高肿瘤的生长速度。
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1.一种神经内分泌型前列腺癌培养基，其特征在于，以DMEM/F12为基础培养基，含有10μmol/L的恩杂鲁胺和100nM LDN193189。
2.根据权利要求1所述的神经内分泌型前列腺癌培养基，其特征在于，还包括：体积百分含量为5％的胎牛血清、青霉素10kU/mL、链霉素10mg/mL、Noggin 500ng/mL、R-spondin 1500ng/mL、Wnt3a 500ng/mL、FGF10 100ng/mL、FGF7 25ng/mL、FGF2 12.5ng/mL、体积百分含量为2％的B27、A83-01 5μM、N-乙酰半胱氨酸1.25mM和烟酰胺10mM。
3.一种培养神经内分泌型前列腺癌类器官的方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤1)使用IV型胶原酶和ROCK抑制剂消化前列腺癌组织。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤1)前列腺癌组织的规格为1～2mm。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤1)消化的条件包括：温度为37℃，每隔
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤2)细胞沉淀中细胞含量为300个/μL。
8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤3)细胞沉淀与基质胶的质量比为200:1。
9.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤4)以25μl/滴将所述混合物铺于培养板的孔中，每孔中混合物的添加量为1ml；
10.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤4)培养的条件包括：温度为37℃，5％CO2。
...【技术特征摘要】
1.一种神经内分泌型前列腺癌培养基，其特征在于，以dmem/f12为基础培养基，含有10μmol/l的恩杂鲁胺和100nm ldn193189。
2.根据权利要求1所述的神经内分泌型前列腺癌培养基，其特征在于，还包括：体积百分含量为5％的胎牛血清、青霉素10ku/ml、链霉素10mg/ml、noggin 500ng/ml、r-spondin 1500ng/ml、wnt3a 500ng/ml、fgf10 100ng/ml、fgf7 25ng/ml、fgf2 12.5ng/ml、体积百分含量为2％的b27、a83-01 5μm、n-乙酰半胱氨酸1.25mm和烟酰胺10mm。
3.一种培养神经内分泌型前列腺癌类器官的方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤1)使用iv...
【专利技术属性】
技术研发人员：张智锦，张文涛，郭长城，常争燕，毛士玉，陈昊天，姚旭东，
申请(专利权)人：上海市第十人民医院，
类型：发明
国别省市：
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