【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及功能酶鉴定，尤其涉及一种络石甲基转移酶与催化二苄基丁内酯类木脂素甲基化的方法。
技术介绍
1、现有文献报道，峨参罗汉松脂酚甲基转移酶(asmromt)和朝鲜连翘罗汉松脂酚甲基转移酶(fkmromt)可以催化(-)-罗汉松脂酚((-)-matairesinol)(二苄基丁内酯类木脂素)生成(-)-牛蒡子苷元((-)-arctigenin)(ragamustari s k,yamamura m,ono e,etal.substrate-enantiomer selectivity of matairesinol o-methyltransferases[j].plant biotechnology,2014,31(3):257-267.)。可见现有技术公开了仅可以催化(-)-罗汉松脂酚的酶类，这种酶类只能进行一步甲基化反应。现有技术并未发现哪种酶类可以进行多步甲基化，并能同时催化(-)-罗汉松脂酚和(+)-罗汉松脂酚两种对映异构体发生甲基化。
2、(+)-牛蒡子苷元为中药牛蒡子中常见的主要活性物质，通过众多学者的潜心钻研，使得arc-g在药用方面的作用逐渐凸显出来。目前对其药理作用的研究比较深入，有抗炎及增强免疫力、抵御病毒、抗白血病、抑制肿瘤细胞活性和调节血糖等作用。已进行初步研究的药理活性包括抗菌、抵御血小板活化因子(paf)受体、调节血压稳定以及对于心脏病的调节。现有技术并未发现通过酶法合成(+)-牛蒡子苷元的方法，阻碍了对(+)-牛蒡子苷元的药理活性的研究。
3、基于此，提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种络石甲基转移酶与催化二苄基丁内酯类木脂素甲基化的方法。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种络石甲基转移酶，所述络石甲基转移酶的氨基酸序列如seq idno:1所示。
4、本专利技术还提供了编码所述络石甲基转移酶的核苷酸序列，所述核苷酸序列如seqid no:2所示。
5、本专利技术还提供了扩增所述核苷酸序列的引物对，所述引物对如seq id no:3～4所示。
6、本专利技术还提供了一种重组质粒，包括所述的核苷酸序列以及空载载体；
7、所述空载载体为大肠杆菌pet系列载体和大肠杆菌pqtev系列载体中的任意一种。
8、本专利技术还提供了一种重组菌，包括所述的核苷酸序列或者所述的重组质粒以及宿主菌；
9、所述宿主菌为大肠杆菌bl21。
10、本专利技术还提供了所述的络石甲基转移酶、所述的重组质粒或者所述的重组菌在制备催化二苄基丁内酯类木脂素甲基化的产品中的应用。
11、本专利技术还提供了所述的络石甲基转移酶、所述的重组质粒或者所述的重组菌在制备合成一步甲基化二苄基丁内酯类木脂素或两步甲基化二苄基丁内酯类木脂素的产品中的应用。
12、本专利技术还提供了所述的络石甲基转移酶、所述的重组质粒或者所述的重组菌在制备合成牛蒡子苷元和/或二甲基罗汉松脂酚的产品中的应用。
13、本专利技术还提供了一种催化二苄基丁内酯类木脂素甲基化的方法，包括如下步骤：
14、将所述的络石甲基转移酶或者所述的重组菌与二苄基丁内酯类木脂素混合，反应1～4h，得到甲基化的二苄基丁内酯类木脂素；
15、所述反应的温度为25～37℃；
16、所述甲基化的二苄基丁内酯类木脂素为经过一步和/或两步甲基化的产物。
17、本专利技术还提供了一种催化罗汉松脂酚甲基化的方法，包括如下步骤：
18、将所述的络石甲基转移酶或者所述的重组菌与罗汉松脂酚混合，反应1～4h，得到甲基化的罗汉松脂酚；
19、所述反应的温度为25～37℃；
20、所述罗汉松脂酚为(+)-罗汉松脂酚和/或(-)-罗汉松脂酚；
21、所述甲基化的罗汉松脂酚为经过一步和/或两步甲基化的产物；
22、一步甲基化的产物为(+)-牛蒡子苷元和/或(-)-牛蒡子苷元；
23、两步甲基化的产物为(+)-二甲基罗汉松脂酚和/或(-)-二甲基罗汉松脂酚。
24、本专利技术的方案具有如下优点：
25、本专利技术的方案用于鉴定络石中络石苷元生物合成途径中的关键基因，表征其催化活性，最终应用于生产木脂素类化合物及类似物中。
26、本专利技术得到的络石来源的甲基转移酶，能够催化(+)-罗汉松脂酚和(-)-罗汉松脂酚发生甲基化，生成相应的(+)-牛蒡子苷元和(-)-牛蒡子苷元。该酶还能进一步使(+)-牛蒡子苷元和(-)-牛蒡子苷元发生甲基化，从而生成相应的(+)-二甲基罗汉松脂酚和(-)-二甲基罗汉松脂酚，具有研究开发价值。较现有技术仅能实现一步甲基化，只能催化一种罗汉松脂酚的酶具有更广泛的应用价值。
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1.一种络石甲基转移酶，其特征在于，所述络石甲基转移酶的氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示。
2.编码权利要求1所述络石甲基转移酶的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.扩增权利要求2所述核苷酸序列的引物对，其特征在于，所述引物对如SEQ ID NO:3～4所示。
4.一种重组质粒，其特征在于，包括权利要求2所述的核苷酸序列以及空载载体；
5.一种重组菌，其特征在于，包括权利要求2所述的核苷酸序列或者权利要求4所述的重组质粒以及宿主菌；
6.权利要求1所述的络石甲基转移酶、权利要求4所述的重组质粒或者权利要求5所述的重组菌在制备催化二苄基丁内酯类木脂素甲基化的产品中的应用。
7.权利要求1所述的络石甲基转移酶、权利要求4所述的重组质粒或者权利要求5所述的重组菌在制备合成一步甲基化二苄基丁内酯类木脂素或两步甲基化二苄基丁内酯类木脂素的产品中的应用。
8.权利要求1所述的络石甲基转移酶、权利要求4所述的重组质粒或者权利要求5所述的重组菌在制备合成牛蒡子苷元和/或二
9.一种催化二苄基丁内酯类木脂素甲基化的方法，其特征在于，包括如下步骤：
10.一种催化罗汉松脂酚甲基化的方法，其特征在于，包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种络石甲基转移酶，其特征在于，所述络石甲基转移酶的氨基酸序列如seq idno:1所示。
2.编码权利要求1所述络石甲基转移酶的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列如seq id no:2所示。
3.扩增权利要求2所述核苷酸序列的引物对，其特征在于，所述引物对如seq id no:3～4所示。
4.一种重组质粒，其特征在于，包括权利要求2所述的核苷酸序列以及空载载体；
5.一种重组菌，其特征在于，包括权利要求2所述的核苷酸序列或者权利要求4所述的重组质粒以及宿主菌；
6.权利要求1所述的络石甲基转移酶、权利要求4所述的重...
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