【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及核酸检测领域，具体涉及一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测方法及仪器。
技术介绍
1、核酸检测在人体疾病、农作物病虫害、食源性致病菌等检测中应用广泛。其原理是利用引物特异性识别目标基因，引发核酸扩增反应，根据是否生成了扩增反应产物，做出定性判断，或者根据扩增产物的含量，获得样本中被测物的含量目前，核酸扩增的方法有很多。除了常规的pcr扩增方法之外，还有一些不需要昂贵的扩增仪器的恒温扩增技术，仅利用水浴锅、保温杯、甚至体温即可满足扩增反应需求，能够实现现场扩增。但是，扩增反应产物的检测仍是制约核酸检测技术广泛应用的关键因素。常用的扩增产物检测方法有凝胶电泳、实时荧光定量等。此外，扩增过程中dna链延伸的反应会释放出副产物焦磷酸，可与镁离子反应生成焦磷酸镁固体微粒，通过专用仪器测定样液的浊度也可实现核酸产物的检测。然而，这些方法的缺点是需要专业的操作技能或昂贵的仪器，应用范围主要局限于实验室或大型医院。因此，开发简便快速的核酸检测结果分析新方法，对于核酸检测在食品安全快速等领域的应用具有重要意义。
2、专利zl202021996507.4提供了一种核酸产物比色检测技术，待pcr扩增反应完成后，在扩增产物中加入显色剂，反应约10min使溶液从无色变为蓝色，测定溶液吸光度，获得定量结果。但是，这种方法的缺点是扩增完成后需要开盖，存在气溶胶污染风险，容易造成后续结果假阳性，尤其不适用于扩增效率、产物量大的方法，如环介导恒温扩增法(loop-mediated isothermal amplificatio
3、核酸可视化检测是利用肉眼观察扩增反应液的变化，做得出定性判断，例如，lamp使用羟基萘酚蓝(hydroxynaphthol blue,hnb)作为指示剂，扩增完成后，直接观察扩增容器中溶液的颜色，紫色为阴性，蓝色为阳性。虽然这种方法十分简便，但利用肉眼观察一种颜色到另一种颜色的变化，存在很多缺点：(1)只能做出定性判断，不满足定量检测的需求，例如判断食品中被测物是否超出限量标准、诊断病情的变化等。(2)操作人员的主观因素对判断结果影响大，容易影响检测结果的可靠性和灵敏度。因此，亟需一种在不开盖的条件下，定量分析扩增管中核酸指示剂羟基萘酚蓝颜色变化的方法，从而实现核酸快速定量检测，满足定量检测的应用需求。
技术实现思路
1、针对现有技术中存在的不足，本专利技术的第一个目的在于提供一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测方法。本专利技术解决羟基萘酚蓝指示剂只能用于定性检测、不能满足核酸定量检测需求的缺点，为食品、医疗、农业等领域提供一种简便、快速、经济的核酸现场定量检测方法。
2、为解决上述技术问题，本专利技术通过下述技术方案实现：
3、一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
4、s1、待测液准备：配制含有羟基萘酚蓝指示剂的环介导等温扩增检测体系；
5、s2、扩增：将装有环介导等温扩增检测体系的扩增容器放入扩增仪器，进行扩增反应；
6、s3、待扩增反应完成后，使用羟基萘酚蓝指示剂颜色由紫变蓝过程中具有选择性吸收的波长范围内的光线作为检测光源，照射扩增容器中的样液，一部分光线被样液吸收，其余未被吸收的光线则穿过样液，使用光敏传感器检测透射光的强度；
7、s4、依据朗伯比尔定律，对测得的透射光强度进行处理，获得检测数值。
8、进一步的：所述步骤s3中，检测光线的波长为590nm～670nm内的单色光。
9、进一步的：检测光线由不同波长的单色光所混合而成的复色光，且多种单色光的波长均在590nm～670nm范围之内。
10、本专利技术第二个目的在于提供一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测仪器，能够直接检测扩增容器中的样品含量，从而实现扩增完成后无需打开扩增容器取出样液，减少检测操作的步骤、避免开盖气溶胶污染，提升检测效率和可靠性。
11、一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测仪器，包括光学检测模块和检测控制模块，所述检测控制模块包括模数转换模块、数据处理模块和结果显示模块，其特征在于：所述光学检测模块包括光学检测模块壳体，光学检测模块壳体开设有供核酸扩增容器容置的样品孔，光学检测模块壳体在样品孔的侧壁上开设有相对应的通光孔，通光孔与样品孔垂直相交，所述光学检测模块壳体两侧面的通光孔的尾部分别开设有光源容置孔和光电传感器容置孔，光源容置孔内设置光源，光电传感器容置孔内设置光电传感器。
12、进一步的：所述光源的发光波长为590nm～670nm内的单色光。
13、进一步的：所述光源采用发光二极管；所述光敏传感器为光敏电阻或光敏二极管。
14、进一步的：所述光源的发射光谱由不同波长的单色光所混合而成的复色光，且多种单色光的波长均在590nm～670nm范围之内。
15、进一步的：所述核酸扩增容器为透明材质。
16、进一步的：所述核酸扩增容器为pcr扩增管。
17、本专利技术与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：
18、(1)本专利技术提供了一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测方法，使检测结果更准确可靠、更灵敏、应用范围更广泛。
19、现有的羟基萘酚蓝方法是利用羟基萘酚蓝的颜色变化进行判断，扩增液由最初的紫色变为蓝色，则表明发生了扩增反应，这种方式只能进行定性检测，只能判断是否存在目标，而不能判断目标物的含量。一方面，肉眼判断颜色变化受主观因素影响很大，不同人对于颜色变化的判断敏感程度也不同，容易导致误判、低含量样品的漏检等问题。另一方面，在实际应用中，大量的检测都需要获得被测物的具体含量，并据此判断被测物的含量是否超出了国家安全限量标准，例如食品检测中很指标的规定是不得超过某一个限量值，超过该限量值则为不合格。因此，根据羟基萘酚蓝是否变蓝得到的定性结果，不能适应这种检测需求，极大地限制了核酸检测的应用范围。
20、相比之下，本专利技术利用核酸扩增产物与羟基萘酚蓝显色剂之间的相互作用关系造成反应溶液对590nm～670nm波段光线吸收程度定量变化的特性，通过测定检测光线被溶液的吸收程度，定量测定羟基萘酚蓝的色彩变化程度。首先，本专利技术所述方法能够避免肉眼判断颜色变化存在的灵敏度、可靠性受不同操作人员主观因素的影响，以及误判的风险，从而提供更灵敏度、准确可靠的结果；更重要地是，本专利技术所述方法能够为核酸检测提供定量结果，以便于用户判断样品中被测物含量是否符合国家安全限量标准、目标物含量是否处于正常水平等，更好地满足实际检测需求，是核酸检测的应用范围更广泛。
21、(2)本专利技术提供了一种操作简便、价格便宜的基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测方法。
22、本方法中的检测羟基萘酚蓝指示剂是预先加入lamp检测体系中本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测方法，其特征在于：所述步骤S3中，检测光线的波长为590nm～670nm内的单色光。
3.根据权利要求1所述的一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测方法，其特征在于：所述步骤S3中，检测光线由不同波长的单色光所混合而成的复色光，且多种单色光的波长均在590nm～670nm范围之内。
4.一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测仪器，包括光学检测模块和检测控制模块，所述检测控制模块包括模数转换模块、数据处理模块和结果显示模块，其特征在于：所述光学检测模块包括光学检测模块壳体，光学检测模块壳体开设有供核酸扩增容器容置的样品孔，光学检测模块壳体在样品孔的侧壁上开设有相对应的通光孔，通光孔与样品孔垂直相交，所述光学检测模块壳体两侧面的通光孔的尾部分别开设有光源容置孔和光电传感器容置孔，光源容置孔内设置光源，光电传感器容置孔内设置光电传感器。
5.根据权利要求4所述
6.根据权利要求4所述的一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测仪器，其特征在于：所述光源采用发光二极管；所述光敏传感器为光敏电阻或光敏二极管。
7.根据权利要求4所述的一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测仪器，其特征在于：所述光源的发射光谱由不同波长的单色光所混合而成的复色光，且多种单色光的波长均在590nm～670nm范围之内。
8.根据权利要求4所述的一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测仪器，其特征在于：所述核酸扩增容器为透明材质。
9.根据权利要求4所述的一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测仪器，其特征在于：所述核酸扩增容器为PCR扩增管。
...【技术特征摘要】
1.一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测方法，其特征在于：所述步骤s3中，检测光线的波长为590nm～670nm内的单色光。
3.根据权利要求1所述的一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测方法，其特征在于：所述步骤s3中，检测光线由不同波长的单色光所混合而成的复色光，且多种单色光的波长均在590nm～670nm范围之内。
4.一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测仪器，包括光学检测模块和检测控制模块，所述检测控制模块包括模数转换模块、数据处理模块和结果显示模块，其特征在于：所述光学检测模块包括光学检测模块壳体，光学检测模块壳体开设有供核酸扩增容器容置的样品孔，光学检测模块壳体在样品孔的侧壁上开设有相对应的通光孔，通光孔与样品孔垂直相交，所述光学检测模块壳体两侧面的通光孔的尾部分别开设有光源容...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐文志，张玮轩，祁杨春，代省全，李忠宏，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：
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