C3-差向异构酶突变体及在生产D-阿洛酮糖中的应用制造技术

本发明专利技术公开了C3‑差向异构酶突变体及在生产D‑阿洛酮糖中的应用，属于生物工程领域。本发明专利技术利用结晶的方法得到了C3‑差向异构酶KeDt3e的晶体并解析了其三维结构，并通过对关键区域的氨基酸突变，获得了具有高底物选择性、热稳定性及催化效率的酶突变体。以表达KeDt3e <supgt;M5</supgt;的重组菌株作为生物催化剂进行全细胞转化，在2.5L发酵罐下，转化2h，D‑阿洛酮糖产量可达167.7g/L。该生产过程简单、原料易得、杂质少，具有较好的工业化应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及c3-差向异构酶突变体及在生产d-阿洛酮糖中的应用，属于生物工程。

技术介绍

1、d-阿洛酮糖是一种在自然界中存在但含量极少的单糖，甜度是蔗糖的70％，但是能量仅为0.3％，是一种新型的低能量甜味剂，与d-果糖和d-葡萄糖相比，d-阿洛酮糖可以生成更多的抗氧化物，使食物长期维持抗氧化状态，保持食品风味、色泽及口感。此外，d-阿洛酮糖并且可以通过竞争吸收和排泄转运糖蛋白抑制d-果糖和d-葡萄糖的吸收，进而增强胰岛素抵抗性，减少体内脂肪积累，降低由于体重过度增长引起慢性疾病的风险，可以用来治疗肥胖症、糖尿病、高血压和动脉粥样硬化等疾病。此外，d-阿洛酮糖在食品、化妆品、以及保健品等领域也有很大的应用潜力。

2、目前，几乎所有的化学法制备d-阿洛酮糖都有产量低、后续分离操作繁琐、易造成重金属和酸性废水污染、副产物多等问题，不符合绿色生产、安全生产和可持续发展的要求。与化学法相比，生物法合成d-阿洛酮糖不仅成本低而且安全环保，更不易造成污染，因此迫切需要一种有效的生物法高效生产d-阿洛酮糖。

3、然而，对于d-阿洛酮糖的生产需本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种C3-差向异构酶突变体，其特征在于，在氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示C3-差向异构酶亲本酶的基础上，进行了如下至少一处突变：

2.根据权利要求1所述的C3-差向异构酶突变体，其特征在于，所述突变体是在氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示C3-差向异构酶亲本酶的基础上，将第15位的天冬氨酸变为半胱氨酸，将第155位的苯丙氨酸突变为酪氨酸，将第227位的谷氨酸突变为丙氨酸，并将第238位的天冬氨酸变为天冬酰胺。

3.编码权利要求1或2所述突变体的基因。

4.携带权利要求3所述基因的重组载体。

5.表达权利要求1或2所述C3-差...

【技术特征摘要】

1.一种c3-差向异构酶突变体，其特征在于，在氨基酸序列如seq id no.1所示c3-差向异构酶亲本酶的基础上，进行了如下至少一处突变：

2.根据权利要求1所述的c3-差向异构酶突变体，其特征在于，所述突变体是在氨基酸序列如seq id no.1所示c3-差向异构酶亲本酶的基础上，将第15位的天冬氨酸变为半胱氨酸，将第155位的苯丙氨酸突变为酪氨酸，将第227位的谷氨酸突变为丙氨酸，并将第238位的天冬氨酸变为天冬酰胺。

3.编码权利要求1或2所述突变体的基因。

4.携带权利要求3所述基因的重组载体。

5.表达权利要求1或2所述c3-差向异构酶突变体，或含有权利要求3所述基因，或含权利要求4所述重组载体的重组微生物细胞。

6.一种重组大肠杆菌，其特征在于，以e.coli bl21(de3...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘立明，郭丁钰，吴静，魏婉清，宋伟，刘佳，刘开放，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：